VEGF与Notch1在乳腺癌浸润和转移中的作用及其相关性

曹文庆，赵峰霞，赵玉哲，张 静

(河北省人民医院普外一科，河北 石家庄 050051)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率均很高。尽管乳腺癌综合治疗不断进展，但仍有相当一部分患者复发。目前Notch信号通路被认为是引起乳腺癌复发的重要因素之一［1］。Notch1是Notch信号通路受体之一，在调控肿瘤细胞的生长、发育、增殖和凋亡等过程中起重要作用［2］。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是重要的血管生成调节因子，其与相应受体结合，启动肿瘤血管生成，与恶性肿瘤的发生、发展、浸润及转移有密切关系［3］。作者应用免疫组化(S-P)法检测VEGF及Notch1蛋白在乳腺癌组织中的表达，分析其与临床病理学特征的关系，并探讨两者与乳腺癌浸润和转移之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 60例乳腺癌组织和20例癌旁正常乳腺组织选自我院2010年1月至2010年12月手术切除经病理确诊的石蜡标本，具有完整的临床资料，均为女性，年龄35～70岁，术前均未行放疗、化疗或其他抗肿瘤的治疗，病理类型均为浸润性导管癌。

1.2 主要试剂 兔抗人VEGF单克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司;兔抗人Notch1多克隆抗体购于Abcam公司;S-P免疫组化染色试剂盒及DAB显色试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。

1.3 检测方法 石蜡标本切成4 μm切片，采用免疫组化S-P法检测60例乳腺癌组织、20例癌旁正常乳腺组织中VEGF和Notch1蛋白的表达。用已知阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 VEGF和Notch1蛋白阳性信号均位于细胞质。染色结果采用半定量积分法，随机选择5个高倍镜视野观察，每个视野计数200个肿瘤细胞。按阳性细胞百分比判断:≤5%为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。按染色强度判断:无色为0分，浅棕色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比与染色强度的乘积，0～3分为阴性表达，记作“－”;4～12分为阳性表达，记作“+”。阅片采用双盲法，每张切片均由2名病理医生判读。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0进行统计分析，率的比较采用χ2检验或连续性校正χ2检验，相关性检验采用Spearman相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 VEGF表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系 VEGF在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织(P＜0.05)。VEGF的表达与乳腺癌的淋巴结转移、组织学分级、临床分期有关(P＜0.05)，而与肿瘤直径、患者年龄无关(P均＞0.05)。见表1、2。

2.2 Notch1蛋白的表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系 Notch1蛋白在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织(P＜0.05)。Notch1蛋白的表达与乳腺癌的淋巴结转移、组织学分级有关(P＜0.05)，而与临床分期、肿瘤直径、患者年龄无关(P均＞0.05)。见表 1、2。

2.3 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌组织中表达的相关性 乳腺癌组织中VEGF表达与Notch1蛋白表达呈正相关关系(r=0.414，P=0.001)。见表 3。

表1 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中的表达

3 讨论

肿瘤的生长与血管生成关系密切，丰富的血管为肿瘤细胞生长提供了充足的营养物质，并为其浸润和转移提供了必要的物质条件。肿瘤的浸润和转移是影响乳腺癌患者预后的重要指标。VEGF信号通路和Notch信号通路是调节胚胎血管发育和肿瘤血管生成的2个最重要的信号通路，作者推测其可能在乳腺癌的浸润和转移中发挥着重要作用。

VEGF作为血管生成最重要的因子，能特异性作用于血管内皮，与血管内皮细胞相应受体结合，从而刺激血管内皮细胞增殖，增强血管通透性，为肿瘤细胞转移提供基质。近年来，大量对胃癌、前列腺癌和肝癌等肿瘤组织中VEGF作用的研究均证实了VEGF与恶性肿瘤的发生、发展、浸润及转移有密切关系［3－5］。本文研究结果显示:VEGF在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织，提示VEGF在乳腺癌的发生、发展有重要作用，且VEGF的表达与淋巴结转移、组织学分级、临床分期有关。VEGF可能通过促进肿瘤血管生成进而促进肿瘤的侵袭和转移。

表2 VEGF及Notch1蛋白的表达与临床病理学特征的关系

表3 VEGF蛋白与Notch1蛋白的相关性

Notch信号通路广泛存在于无脊椎动物和哺乳动物中，是保守进化的细胞内信号通路，调节细胞增殖、分化和控制细胞，在胚胎发育、肿瘤血管生成中发挥重要调节作用［6］。目前，在哺乳动物中发现4个Notch受体(Notch1～Notch4)和至少5个Notch配体(Jagged1、Jagged2、DLL1、DLL3和 DLL4)。其中 Notch1最常在肿瘤组织中被检测到，异常的Notch1在肿瘤细胞的生长、代谢及凋亡等过程中起重要调控作用［2］。研究［7］发现Notch1在乳腺癌组织中表达高于癌旁正常乳腺组织，且与肿瘤淋巴结转移、临床分期及肿瘤直径有关。Wang等［8］研究发现减少Notch1的表达会降低乳腺癌细胞的侵袭和转移，提出乳腺癌中以Notch1为靶目标有重要治疗价值。本文结果显示，Notch1在乳腺癌组织中高表达，且与淋巴结转移、临床分期有关，提示Notch1可能与促进乳腺癌侵袭和转移有关。

Joo等［9］对舌癌的研究发现，VEGF、Notch1 与淋巴结转移及肿瘤浸润深度有关，且两者的表达呈正相关，提示两者在舌癌的浸润和转移中起一定作用，可能成为影响舌癌预后的重要指标。张安华等［10］发现VEGF、Notch1在胃癌组织中高表达，均与浸润深度、淋巴结转移及远处转移有关，且两者表达具有明显正相关性，推测两者可能共同调控肿瘤血管新生，参与胃癌的侵袭和转移。本文结果显示，VEGF、Notch1在乳腺癌组织中的表达呈正相关，且均与淋巴结转移和临床分期有关，提示两者的表达不仅促进肿瘤的发生，且在乳腺癌增殖、生长及浸润、转移中起一定的作用，为乳腺癌的综合治疗提供了新的理论依据。

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