水飞蓟素固体脂质纳米粒在大鼠体内药代动力学研究

刘思佳,于 莲,杜 妍,胡艳秋,马丽娜,平 洋

(佳木斯大学药学院,黑龙江 佳木斯 154007)

水飞蓟素(SM)是从菊科植物水飞蓟的种皮中提取得到的黄酮类有效部位,临床上应用于治疗急慢性肝炎、中毒性肝损伤、肝纤维化和早期肝硬化等肝病。目前,市售的常见制剂有利肝隆胶囊和益肝灵片剂,但由于水飞蓟素难溶于水,口服吸收差 ,导致口服制剂生物利用度较低 ,影响疗效。固体脂质纳米粒具有提高难溶性药物生物利用度等优点[1]。本文以水飞蓟素中水飞蓟宾为指标,考察了尾静脉注射水飞蓟素溶液及 SM-SLN胶体溶液的在大鼠体内的药动学过程,采用3P97软件,对平均血药浓度-时间曲线进行拟合,并计算主要药动参数。

1 仪器、试药与动物

1.1 仪器

高效液相色谱仪 (Agilent 1100型,美国安捷伦公司);电子分析天平(FA2004N型,上海恒平科学仪器有限公司);台式高速冷冻离心机(TGL-16M型,长沙平凡仪器仪表有限公司);超声波清洗器(KQ-400KDB型,昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

水飞蓟宾对照品(批号:10082633,天津一方科技有限公司);内标1-萘酚 (天津一方科技有限公司);甲醇(色谱醇,天津市科密欧化学试剂有限公司);冰醋酸(天津市恒兴化学试剂制造有限公司);无水乙醚(天津市科密欧化学试剂有限公司)。

1.3 动物

Wistar种大鼠,体重为 (220±20)g,雌雄各半,生产许可证号:SCXK(辽 )2008-0002。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱:C18(250mm×4.6mm,5 μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸=50:50:0.5;流速:1.0mL˙min-1;柱温:室温;检测波长:287nm;进样量:5 μL;内标:1-萘酚。

2.2 血浆样品处理

精密吸取200μL血浆置于具塞离心管中 ,加入磷酸盐缓冲液 (pH=5)200μL,内标 (1-萘酚 )50 μL,涡旋混匀,加入无水乙醚萃取两次 (2mL/次 ),涡旋 5min,16000r˙min-1离心10min,分离醚层,合并乙醚层,40℃水浴下空气吹干[2]。残渣用 100 μL流动相溶解 ,超声 5min,涡旋 5min混匀 ,16000r˙ min-1离心 5 min,取上清液 10μL进样。

2.3 方法专属性

取空白血浆 200 μL按“血浆样品处理”项下操作,进样10 μL,得色谱图,见图1(A);将一定浓度的水飞蓟宾标准溶液(含内标 )加入空白血浆,按“血浆样品处理”项下操作,进样10 μL,得色谱图,见图1(B);取给药后收集的血浆样品 ,按“血浆样品处理”项下操作,进样10μL,得色谱图,见图1(C)。

图1 空白血浆(A);空白血浆加入水飞蓟宾和内标(B);静脉注射后 SM-SLN(C)

2.4 标准曲线的绘制

精密量取空白血浆200μL共6份,加入水飞蓟宾对照品系列溶液和内标液 ,精密配制成浓度为 0.04、 0.2、0.5、 1、2、 4 μg˙mL-1的含药血浆。按“血浆样品处理”项下操作,进样10μL,以空白血浆样品中水飞蓟宾浓度 (C)为横坐标,水飞蓟宾与内标1-萘酚的峰面积比值(As/Ai)为纵坐标,绘制标准曲线。标准曲线方程为 As/Ai= 0.3537C+ 0.0145,r=0.9964。结果表明 ,该标准曲线在 0.04～ 4μg˙mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度

取大鼠空白血浆,加入不同浓度水飞蓟宾标准品溶液,按“血浆样品处理”项下操作 ,制成 0.2 μg˙mL-1、 1 μg˙mL-1、 4 μg˙mL-1三种不同浓度的水飞蓟宾血浆样品 ,三种浓度样品一天内分别测定5次,计算日内精密度;将水飞蓟宾血浆样品放入冰箱(4℃)保存,连续测定 5d,计算日间精密度。结果表明,低、中、高三种浓度的日内精密度 RSD分别为8.82%、7.12%、3.18%,日间精密度 RSD分别问10.16%、9.42%、10.27%。

2.6 萃取回收率

精密量取不同量的水飞蓟宾标准溶液,稀释成0.2μg˙ mL-1、 1μ g˙mL-1、 4μg˙mL-1三种不同浓度的溶液 ,分别取10 μL进样 ,记录峰面积 A1。另取大鼠空白血浆200 μL,加入不同浓度的水飞蓟宾标准溶液 ,配制成0.2 μg˙mL-1、1μg˙ mL-1、 4 μg˙mL-1的血浆样品 ,按“血浆样品处理”项下操作 ,分别取 10μL进样,记录峰面积 A2。按公式计算萃取回收率,萃取回收率=(A2/A1)×100%。结果表明,萃取回收率 RSD分别为4.10%、3.62%、3.18%。

2.7 给药方案与样品采集

12只 Wistar大鼠,随机分成两组。水飞蓟素溶液为对照组,另外一组尾注射 SM-SLN胶体溶液,实验前禁食12h,尾静脉注射两种制剂,剂量为2 mg˙kg-1[3]。于给药后0.083、0.25、0.5、1、 2、 4、 8、 12、 24h眼眶 静脉丛取血 0.5mL,置于肝素抗凝管中,3000rpm离心10min分离血浆,置-20℃冰箱冷藏待用。

2.8 血药浓度测定

对照组水飞蓟素溶液尾静脉注射后血药浓度见表1。

表1 静脉注射水飞蓟素溶液后大鼠血浆中水飞蓟宾浓度(n=6)

制剂组 SM-SLN胶体溶液尾静脉注射后血药浓度见表2。

表2 静脉注射水飞蓟素固体脂质纳米粒后大鼠血浆中水飞蓟宾浓度(n=6)

2.9 平均血药浓度时间曲线

根据测得的血浆中药物的浓度,绘制制剂组与对照组的平均血药浓度-时间曲线 ,曲线见图2。

图2 大鼠尾静脉注射水飞蓟素溶液和 SM-SLN胶体溶液后的药-时曲线

2.10 药动学参数

采用 3P97软件拟合,大鼠尾静脉注射给药后 ,药动学过程符合二室模型,(权重系数为1/C2),药动学参数结果见表3。

3 讨论

本实验结果表明,通过拟合后,平均血药浓度-时间曲线在大鼠体内符合二室模型。大鼠尾静脉注射 SM-SLN后,与对照组水飞蓟素溶液相比,生物利用度有所提高,且SM-SLN具有一定的缓释作用。

表3 SM溶液及 SM-SLN药动学参数

[1] Hu L,Tang X,Cui F.Solid lipid nanoparticles(SLNs)to improve oarl bioavailability of poorly soluble drugs[J].J Phamr Phamracol,2004,56(12):1527-1535

[2] 于敏,石晓滢,霍继明,等.扶正口服液在家兔体内的药代动力学研究 [J].黑龙江医药科学,1999,22(2):4-5

[3] 李杰滨,李学彬,谭秀敏.肝泰乐注射液对小鼠体内对乙酰氨基酚代谢作用的研究 [J].黑龙江医药科学,2002,25(4):4