HPLC法测定参蚁胶囊中人参皂苷Rg1的含量

2012-06-18孙小燕

实用药物与临床 2012年1期

孙小燕

参蚁胶囊由人参、蚂蚁等中药组成，是我院医院制剂，具有免疫调节作用，主要用于治疗白癜风，在多年的运用中取得良好效果。为了控制参蚁胶囊的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC法对参蚁胶囊中人参皂苷Rg1的含量进行测定。经方法学考察证实，该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。

1 实验部分

1.1 仪器与试药 515高效液相色谱系统(美国Waters公司);SB22200超声波清洗器(上海Branson超声波仪器厂)。人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0703-200917);乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯;参蚁胶囊(江苏省如皋市皮肤病防治所，每粒0.5 g，每瓶100粒，批号:20100809、 20100914、 20101014、 20101225、20110221、20110324、20110425、20110526，其中前4批人参原料购自南通药材采购供应站，后4批人参原料购自南京中药饮片厂)。

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件及系统适用性［1-2］色谱柱为HangBang C18(200mm ×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(21∶79)，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，检测波长为203 nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于2×103，被测组分及杂质峰之间的分离度均大于1.5，处方中的其他成分及辅料无干扰(见图1)。

1.2.2 溶液的制备取参蚁胶囊12粒，称重，得出平均粒重，倾出胶囊内粉末，研匀，精密称取5 g，精密加入10mL流动相，精密称定，超声处理(功率300 W，频率50 Hz)45min，室温放置，精密称定，补充缺失的重量，用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

1.2.3 精密称取人参皂苷Rg1对照品12.65 mg，置100mL量瓶中，加适量流动相溶解并定容，即得126.5μg/mL的对照品溶液。按参蚁胶囊配方制备不含人参的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

1.2.4 线性关系的考察按“1.2.1”项的色谱条件，取对照品溶液分别进样 5、10、15、20、25、50μL，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标、人参皂苷Rg1的量为横坐标进行线性回归，得回归方程:Y=1.847×104X-9.636×102(r=0.9998)。结果表明，人参皂苷 Rg10.633～6.326μg时，与峰面积的线性关系良好。

1.2.5 精密度试验精密吸取10μL对照品溶液，连续进样5次，其峰面积的RSD=0.95%。

1.2.6 重复性试验取同一批参蚁胶囊，制备5份供试品溶液，分别进样，按“1.2.8”项的方法测定人参皂苷Rg1的含量，平均含量为0.2154 mg/粒，RSD=1.63%。

1.2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于制备后 0、2、4、6、8、12、24 h 进样 10μL，记录峰面积。其峰面积的RSD=0.82%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

1.2.8 回收试验分别精密称取5 g已测定含量的参蚁胶囊(含人参皂苷Rg10.2154 mg/粒)6份，分别精密加入 10、20、30mL 的126.5μg/mL人参皂苷Rg1对照品溶液，混匀后再按“1.2.7”项的方法测定人参皂苷Rg1的含量，其平均回收率为98.99%，RSD=0.56%(见表1)。

图1 人参皂苷Rg1阴性样品(A)、对照品(B)和样品(C)溶液的色谱图

表1 回收率测定结果

1.2.9 样品的测定取参蚁胶囊，按“1.2.2”项的方法制备成供试品溶液，在“1.2.1”项色谱条件下，分别取10μL供试品溶液和对照品溶液，分别进样。以峰面积按外标法计算含量，测得8批样品的含量分别为0.2154 mg/粒、0.2241 mg/粒、0.2108 mg/粒、0.2187 mg/粒、0.2218 mg/粒、0.2356 mg/粒、0.2191 mg/粒、0.2103 mg/粒，平均含量为0.2195 mg/粒，RSD=0.66%。