HPLC法测定羚羊感冒颗粒中的牛蒡子苷含量

2012-06-14吴伯英

中药与临床 2012年3期

吴伯英

羚羊感冒颗粒具有清热解表之功能，用于流行性感冒，伤风咳嗽，头晕发热，咽喉肿痛等症[1]，处方由羚羊角、金银花、桔梗、连翘、牛蒡子、荆芥穗、淡豆豉、淡竹叶、甘草、薄荷脑、薄荷素油等11味中药组成。原标准中无含量测定指标，为了有效控制产品的内在质量，保证其疗效，我们对该品种进行标准提高研究，由于牛蒡子具有疏散风热，宣肺透疹，解毒利咽的作用，是羚羊感冒颗粒的主要药味。故选择牛蒡子中所含牛蒡苷作为指标成分，本文采用高效液相色谱法测定其含量，获得满意的结果，方法准确可靠。

1 试剂与试药

高效液相色谱仪（美国Waters公司），配置（Waters2695泵，Waters2487检测器，Empower色谱工作站，色谱柱Kromasil C18150mm×4.6mm，5μm），电子分析天平（塞多利斯Sartorius BP-210D型，十万分之一）。牛蒡子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供, 批号 110819 -200505)；羚羊感冒颗粒样品共7批：黑龙江省济仁药业有限公司提供3批中试样品（批号060101、060102、061101），太极集团重庆桐君阁制药厂提供4批中试样品（批号77060001、77060002、77060003、010404001）；缺牛蒡子阴性对照样品：自制。流动相用甲醇为色谱纯（SIGMA-ALDRICH 批号S93191），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱: Kromasil C18（100mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-水（25∶75）；检测波长：278nm；进样量：10μl；柱温：35℃；流速：0.5mL.min-1。

2.2 供试品溶液的制备

取本品颗粒约2.5g，精密称定，置具塞瓶中，精密加入50 %甲醇，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取牛蒡子苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，摇匀，即得。

2.4 阴性对照品的制备

取羚羊角0.5g，研成细粉，淡豆豉10g，用60%乙醇、25%的乙醇作溶剂进行渗漉；漉液蒸至无乙醇味，浓缩成稠膏，备用；连翘24g、荆芥穗12g，蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与金银花24g、桔梗16g、淡竹叶12g、甘草10g用蒸馏后的水溶液加水煎煮二次，每次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液与清膏合并，浓缩至约98mL，静置24小时，取上清液，浓缩至相对密度为1.38～1.40(80℃)的清膏。取清膏、蔗糖粉42.5g、淀粉42.5g及羚羊角细粉，混匀，制成颗粒，干燥，加入薄荷脑0.1g，薄荷素油0.1mL及上述连翘等挥发油，混匀，制成100g，即得缺牛蒡子的阴性对照品。

2.5 方法学考察

图1 羚羊感冒颗粒(缺牛蒡子)HPLC图谱

图2 牛蒡子苷对照品HPLC图谱

2.5.1 专属性考察取缺牛蒡子的阴性对照品，按上述规定的方法进样分析。试验结果表明，缺牛蒡子的阴性对照品色谱中，在与牛蒡子苷对照品色谱峰相同保留时间处无色谱峰（见图1、图2），说明本方法无阴性干扰，专属性强。

2.5.2 稳定性考察按上述规定的方法将新配制的牛蒡子苷对照品溶液精密进样10μL以及新制备的供试品溶液（批号：060101）精密进样10μL，测定峰面积，以后每间隔一定时间测定一次，记录牛蒡子苷色谱峰面积的变化。结果见表1。试验结果表明：对照品溶液的RSD和供试品溶液的RSD均小于2.0%，说明对照品溶液与供试品溶液均在24h内均稳定。

表1 稳定性考察结果

2.5.3 精密度考察精密吸取供试品溶液和牛蒡子苷对照品溶液10μL，重复进样6次，记录牛蒡子苷色谱峰峰面积，结果见表2。结果表明，仪器的精密度良好。

表2 精密度考察结果

2.5.4 线性关系考察按照上述规定的方法，将牛蒡子苷对照品溶液，精密稀释成系列浓度，注入液相色谱仪，测定，以牛蒡子苷色谱峰峰面积（Y），对进样量（X）直线回归，得回归方程Y =1279543.1X+28914.3 ( r=0.9999，n=6)。结果见表3。

表3 牛蒡子苷线性关系考察结果

试验结果表明，线性关系良好，线性范围为0.29888μg～3.7360μg。2.5.5 重复性考察取同一批号羚羊感冒颗粒样品（060101）6份，按上述规定的方法，将供试品溶液平行制备6份，分别进样10μL，同时取对照品溶液(0.03976 mL.min-1) 10μl进样测定，测定牛蒡子苷含量并计算RSD，结果见表4。