高效液相色谱法（HPLC测定）烟酰胺的含量

上海现代哈森（商丘）药业有限公司，河南商丘 476000

烟酰胺为水溶性维生素，是辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ的组成部分，在生物氧化呼吸链中起着递氢的作用，可促进生物氧化过程和组织新陈代谢，对维持正常组织（特别是皮肤、消化道、神经系统）的完整性具有重要作用。此外，尚有防治心脏传导阻滞，提高窦房结功能及抗快速型实验性心律失常作用。主要用于防治糙皮病、口炎、舌炎等，也可用于治疗冠心病、病毒性心肌炎、风湿性心脏病等。

1 仪器与试药

1.1 仪器安捷伦 1200型高效液相色谱仪；BP211D型十万分之一电子分析天平；BSA224S型万分之一电子分析天平；AS5150型超声仪；各种校验的玻璃容器（如移液管、容量瓶等）。

1.2 试药烟酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100115-200703）；烟酰胺原料药（天津中瑞药业有限公司生产提供，批号为 110306、110705、111103）；甲醇为色谱级，天津星马克科技发展有限公司生产；水为纯化水。

2 色谱条件与系统性试验

色谱柱，日本资生堂生产的（A4AD04276）C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（35:65）；流速：1.0ml/min；检测波长为：261nm；进样体积20μl；理论塔板数按烟酰胺峰计算不低于3000。

3 溶液制备

3.1 对照品贮备液取烟酰胺对照品 0.02g，精密称定，置于 20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.0mg的烟酰胺溶液，作为对照品贮备液（1.0mg/ml）。

3.2 对照品溶液取“3.1”项下的对照品贮备液1ml，置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含20μg的烟酰胺溶液，作为对照品溶液（20μg/ml）。

3.3 供试品溶液取本品0.2g，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml，置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含烟酰胺20μg的溶液，作为供试品溶液（20μg/ml）。

4 方法与结果

4.1 精密度试验取上述“3.2”项下的对照品溶液，连续进样 6次，测定峰面积，计算 RSD=0.45%（n=6），表明精密度良好。

4.2 重复性试验取同一批号（批号为111103）的烟酰胺样品，按“3.3”项的方法，制备6份供试品溶液，按“4.1”项下方法测定含量，烟酰胺含量测定结果的RSD为0.66%（n=6），方法重复性良好。

4.3 稳定性试验取上述其中一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10小时测样，测得峰面积，计算RSD=0.38%，表明样品溶液在10小时内稳定。

4.4 线性关系考察精密量取“3.1”项下对照品贮备液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml分别置 50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成10、20、30、40、50、60μg/ml的溶液，进样 20μg，记录色谱峰面积。以烟酰胺浓度（C）对峰面积（S）进行线性回归，得回归方程为S=1.0107C+1.9745，r=0.9991（n=6）。结果表明，烟酰胺在 10μg～60μg/ml范围内，浓度与峰面积成良好的线性关系。

4.5 回收率试验精密称取同一批（111103）烟酰胺样品，分别制成每 1ml中含 16μg、20μg、24μg的溶液（即供试品溶液浓度的80%、100%、120%）各2份，分别加入浓度为15.025μg/ml的对照品溶液，依法测定，结果6份样品的回收率，见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）

4.6 样品含量测定取“3.3”项下的供试品溶液及“3.2”项下的对照品溶液各20μl，按上述色谱条件测定。按外标法峰面积计算样品烟酰胺含量，并与《中国药典》2010年版高氯酸非水滴定法测定的含量进行比较（表2）。

表2 烟酰胺含量测定结果比较(%)

5 讨论

《中国药典》2010年版测定烟酰胺方法是高氯酸非水滴定法，由于是靠颜色判断终点滴定，终点不易观察，不同人员测定结果相差较大。笔者通过多次实验，证明本实验条件下的HPLC法可以更好的检验、控制烟酰胺的含量。

[1]吴楣,陈媛,宋新康,等.高效液相法测定复方烟酰胺沙星软膏中烟酰胺含量[J].中国社区医师:医学专业,2008,10(14).