解毒化瘀散结汤抗肝纤维化的实验研究

牛亚辉，王见宾，孙晓凤

(1.邯郸市传染病医院，邯郸 056600； 2.河北工程大学附属医院，邯郸 056601； 3.邯郸市第一医院，邯郸 056000)

解毒化瘀散结汤为本院治疗慢性乙型肝炎肝硬化的经验方，临床和实验表明，该药对慢性乙肝肝硬化的治疗具有较好的疗效。笔者采用动物实验的方法，观察了解毒化瘀散结汤对CCl4诱导大鼠实验性肝纤维化的影响，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1实验动物 Wistar大鼠，体质量(180±20) g ，雌雄兼用，由河北医科大学医学实验动物中心提供。

1.2药物与试剂 解毒化瘀散结汤的药物组成: 黄芪30 g、白术15 g、金钱草30 g、郁金30 g、鳖甲15 g、丹参30 g、水蛭10 g、生甘草10 g等，加水400 ml，水煎20 min，取液200 ml；二煎加水300 ml，水煎20 min，取液150 ml，将两次药液混合，装瓶备用。安络化纤丸(森隆药业有限责任公司生产，主要成分：地黄、三七、水蛭、地龙、牛黄、白术等)。CCl4(郑州化学试剂二厂生产，批号20110906)。橄榄油(上海化学试剂站分装，批号20110106)。Hyp试剂盒由南京建成生物制品研究所提供。

1.3实验方法 将实验动物随机分成正常组、模型组、解毒化瘀散结汤组、安络化纤丸组，每组10只。除正常组外，其余各组均采用CCl4高脂低蛋白复合因素制造大鼠肝纤维化模型。按0.3 ml/100 g体质量皮下注射40 % CCl4橄榄油溶液，每周2次，共6周。在整个实验中，正常大鼠饲以全价颗粒饲料，其余各组均以饲料配方Ⅰ(79.5%纯玉米粉+ 20%猪油+ 0.5%胆固醇压制成颗粒饲料)喂养2周，继以饲料配方Ⅱ(89. 5%纯玉米粉+ 10 %猪油+ 0. 5 %胆固醇压制成颗粒饲料)喂养至第6周末。另以30 %乙醇按1 ml/100 g体质量灌胃，每周2次，共6周。造模成功后第2日开始定时灌胃给药，正常组和模型组给予生理盐水5 ml/kg ，解毒化瘀散结汤组给予解毒化瘀散结汤5.8 ml/kg ，安络化纤丸组给予安络化纤丸200 mg/kg ，1次/d，共6周。

1.4检测指标与方法 于给药结束后第2日，击昏大鼠断头取血5 ml ，离心分取血清。剖腹，于肝右叶取小块肝组织，以中性甲醛固定做病理检查。同时取肝左叶组织约1 g ，称质量，用生理盐水制成10 %肝组织匀浆，离心分取上清液，分别检测:血清谷丙转氨酶(ALT) 、谷草转氨酶(AST) ，采用赖氏法；血清白蛋白(ALB) ，采用溴甲酚绿法；肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量，按试剂盒说明书操作。肝组织标本经10 %甲醛溶液固定，石蜡包埋制片，苏木精- 伊红染色和Masson染色，光镜下观察肝组织学改变和胶原纤维增生情况，按文献[ 1]分级分期标准判定肝纤维化程度(s) 。

2 结果

2.1各组大鼠血清ALT、AST、ALB和肝组织Hyp含量的变化 大鼠造模后，血清ALT和AST显著升高，解毒化瘀散结汤和安络化纤丸均能使实验动物的肝功能指标恢复至接近正常水平，解毒化瘀散结汤组较安络化纤丸组效果更为明显(P<0.05) 。解毒化瘀散结汤还能明显升高大鼠血清ALB ，降低肝组织Hyp含量。结果见表1。

表1 各组大鼠血清ALT、AST、ALB和肝组织Hyp含量的变化

注: *与模型组比较， *P<0.01；与安络化纤丸组比较，△P<0.05

2.2肝组织病理学变化 苏木精- 伊红染色标本观察:正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，无变性坏死。模型组大鼠肝小叶结构严重破坏，肝细胞广泛脂肪变性，大部分标本可见程度、范围不等的肝细胞坏死，肝组织中有炎性细胞浸润。解毒化瘀散结汤组肝小叶结构基本正常，肝小叶周边肝细胞有轻度脂肪变性，汇管区偶见少量淋巴细胞浸润。安络化纤丸组肝细胞脂肪变性，汇管区及肝小叶内有炎性细胞浸润。Masson染色标本观察:模型组肝组织内有大量纤维组织增生形成纤维间隔，胶原纤维从汇管区向小叶内延伸，其破坏界板，分割、包绕肝小叶，部分标本内可见完整的假小叶。安络化纤丸组肝组织内胶原纤维增生明显减轻，无假小叶形成。解毒化瘀散结汤组部分标本有轻度纤维组织增生，主要散在于中央静脉和汇管区。各组大鼠肝纤维化程度分期见表2。

表2 各组肝组织病理学变化情况 例

注：与模型组比较， *P<0.05；**P<0.01；与安络化纤维丸组比较，△P<0.05。

3 讨论

肝纤维化是慢性肝病的一种组织学诊断，是多种慢性肝病向肝硬化发展的必经途径[ 2]。自著名肝病学家Rogking提出了人的肝纤维化可以逆转的论述以来，抗肝纤维化的研究不断深入。中药在抗肝纤维化方面有很好疗效，认为血瘀是肝纤维化的基本病机，治疗方法为疏肝健脾、活血化瘀、软坚散结[3，4]。解毒化瘀散结汤就是按照该原则组方的，具有抗肝纤维化的理论基础。本研究采用CCl4诱导大鼠实验性肝纤维化。大鼠经6周CCl4皮下注射和高脂低蛋白饲料喂养等复合因素刺激后，其肝组织结构受到严重破坏，肝细胞严重坏死、脂肪变性和广泛炎性细胞浸润，由胶原纤维构成的纤维间隔正在形成或已经形成，其病理表现特征与人肝纤维化的形态特征相近。经解毒化瘀散结汤治疗后，大鼠肝组织结构基本正常，无胶原纤维增生或仅在汇管区和中央静脉有少量增生纤维组织，其肝纤维化程度与模型组比较有非常显著性差异，且优于安络化纤丸。血清生化指标检测表明，解毒化瘀散结汤组大鼠血清ALT、AST水平显著低于模型组，接近正常水平，且血清ALB升高，说明解毒化瘀散结汤对CCl4中毒引起的肝细胞损伤有较好的保护作用。测定肝组织Hyp含量是推断胶原纤维含量的常用方法[5]。本实验观察到，模型组Hyp含量显著升高，而解毒化瘀散结汤组明显下降，这与肝组织形态学观察反映出的各组肝纤维化程度相一致。

1 张育轩. 肝硬化临床诊断、中医辨证和疗效评定标准(试行方案). 中国中西医结合杂志，1994 ，14(4) :237

2 屈克义，黄继海，李文胜，等. 冷饭团抗肝纤维化的实验研究. 中国中西医结合消化杂志，2002 ，9(2) :86

3 中华医学会传染病与寄生虫病学分会·肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案. 中华肝脏病杂志，2000 ，8(6) :324

4 王吉耀. 加强对肝硬化及其并发症防治的研究. 中华医学杂志，2002，82(17) :1153

5 谢仕斌，姚集鲁，郑树森，等. 血清纤维化指标水平与肝组织纤维图像分析的关系. 中华肝脏病杂志，2000 ，8(6) :203