山楂籽黄酮提取物抗实验性心律失常作用的研究

唐小荷，陈震翼

(湛江市第二人民医院，广东 湛江 524003)

山楂(Crataegus pinnatifida)，别名红果，蔷薇科山楂属植物，广泛分布于我国大多数省份。山楂果肉、种子及叶均具有很高的药用价值和保健作用，是最早被列入食药兼用的植物之一，具有消食化滞、行气散瘀的功效［1］。对于山楂果肉和叶的化学成分及其对心血管保护作用已有较多研究［2～4］，但对其种子的化学成分及心血管相关的药理作用鲜有报道。本实验通过研究山楂籽黄酮提取物(Hawthorn seed flavonoids，HSF)抗化学物质诱导的心率失常作用，可为进一步开发山楂抗心率失常有效部位群提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 实验动物 KM小鼠(雌雄各半)，40只，体重28～32g;SD大鼠(雌雄各半)，体重260～320g，32只，均由广东医学院实验动物中心提供，动物合格证号:SYXK(粤)2008－0007。

1.1.2 试剂 山楂籽总黄酮提取物(干山楂籽500g，8倍量乙醇85℃水浴浸提3次，每次2 h，回收乙醇至无醇味，以双蒸水配成含生药浓度为2g·mL－1的母液备用，以芦丁为对照，其总黄酮含量不低于10mg·mL－1)。三氯甲烷(AR，广东光华);乌头碱(中国药品生物制品检定所);维拉帕米(山东鲁能制药);水合氯醛(上海国药);Medlab生物信号采集处理系统(南京美易科技公司)。

1.2 方法

1.2.1 三氯甲烷诱发的小鼠心律失常模型建立 取40只KM小鼠，雌雄各半，将小鼠随机分为4组(n=10)，分别给予以下处理:①模型组:给予生理盐水;②阳性对照组:给予10mg·kg－1维拉帕米;③高、低剂量组:分别给予 50、100mg·kg－1山楂籽黄酮提取物。以上各组均灌胃给药，每日一次，连续给药5 d。于末次给药30min后，将小鼠放入浸有4mL三氯甲烷的棉球500mL烧杯内，密封，小鼠呼吸停止5 s后，立即取出，采用Medlab系统的标准肢体Ⅱ导联，记录心电图曲线并观察小鼠的室颤(ventricular fibrillation，VF)发生率。

1.2.2 乌头碱诱发的大鼠心律失常模型 取SD大鼠32只，随机分为4组(n=8)，分别给予以下处理:①模型组:给予生理盐水;②阳性对照组:给予维拉帕米10mg·kg－1;③高、低剂量组:分别给予50、100mg·kg－1山楂籽黄酮提取物。以上各组均灌胃给药，每日一次，连续给药5 d。于末次给药30min后，水合氯醛2.5mL·kg－1腹腔注射麻醉，仰卧位固定，从舌下静脉以2 μg·min－1恒速输入新鲜配制的乌头碱溶液至室性早搏出现，用Medlab系统的标准肢体Ⅱ导联记录心电图曲线，观察室性早搏(ventricular premature beats，VPB)、室性心动过速(ventricular tachycardia，VT)的发生次数，以及心律失常持续时间。

2 结果

2.1 山楂籽黄酮提取物对抗三氯甲烷诱导的小鼠心律失常的作用 与模型组相比，维拉帕米组和山楂籽黄酮提取物组均能降低小鼠的室颤发生率，且山楂籽黄酮提取物对小鼠室颤发生率的抑制呈剂量依赖性，结果见表1。

表1 山楂籽黄酮提取物对三氯甲烷诱发小鼠室颤的影响(n=10)

2.2 山楂籽黄酮提取物对乌头碱诱导的大鼠心律失常的作用 与模型组相比，维拉帕米组和山楂籽黄酮提取物各组均可明显增加引起乌头碱诱发心律失常的消耗量。维拉帕米可明显降低乌头碱诱发的VPB、VT发生次数及心率发生的持续时间，但山楂籽黄酮提取物各组对这几项指标均无明显改善，结果见表2。

表2 山楂籽黄酮提取物对乌头碱诱发大鼠心律失常的影响(n=8)

3 讨论

心律失常是临床最常见的一种心血管疾病，主要由器质性病变导致的心肌缺血再灌注损伤及药物中毒引起。以往的研究已发现山楂黄酮提取物能减轻乳鼠缺血缺氧损伤后心肌细胞心律失常的程度，延缓心肌停搏时间，且能减轻心肌损伤的程度［5］，但能否对抗药源性引起的心率失常尚无相关报道。

目前的研究认为，三氯甲烷诱发的小鼠室颤可能与三氯甲烷刺激植物性神经释放神经递质或肾上腺髓质释放大量儿茶酚胺、继而激动肾上腺素β受体有关［6］。β－受体激动后可通过促进受体依赖性的胞内Ca2+大量释放，导致胞内Ca2+贮存库耗竭，后者触发细胞外Ca2+内流，最终使胞内钙超载而诱发心律失常［7］。我们的实验结果发现，山楂籽黄酮提取物能明显降低三氯甲烷诱导的小鼠心率失常发生率，提示了山楂籽黄酮提取物抗心律失常作用可能与抑制细胞膜上的Ca2+通道有关。

乌头碱是川乌、附子等中药中的有毒成分，每年都有不少因误饮含乌头碱药酒的中毒事件发生，由乌头碱诱发的心率失常则是致死的主要原因之一。乌头碱引发心律失常主要以激活心肌细胞的快Na+通道，使心肌快Na+通道开放，加速心肌细胞Na+内流，促细胞膜发生去极化，提高心房传导组织和房室束－蒲肯野系统等快反应细胞自律性，加速起搏点自律，诱发多源性异位节律点，缩短心肌不应期，导致心律失常［8］。奎尼丁能与通道蛋白质相结合，适度抑制Na+内流，减慢传导速度，延长不应期。本实验结果显示，山楂籽黄酮提取物对降低乌头碱诱发的大鼠VPB及VF的发生次数均无明显改善，但在明显推迟室性早搏发生时间的同时，增加了诱发心率失常所需乌头碱的消耗量。提示了山楂籽黄酮提取物对乌头碱中毒的心脏有保护作用，意味着有更多的时间抢救患者生命。这表明了山楂籽黄酮提取物具有进一步开发成抗心脑血管药物的良好前景。

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