HPLC法测定前列欣胶囊中芍药苷的含量

2012-05-01伦立军李强荣

药学研究 2012年6期

伦立军，李强荣

(1.济南宏济堂制药有限责任公司，山东济南 250100;2.山东中医药大学附属医院，山东济南 250011)

前列欣胶囊具有活血化瘀，清热利湿的功效。用于治疗瘀血凝聚，湿热下注所致的慢性前列腺炎及前列腺增生。前列欣胶囊中赤芍具有行瘀、止痛、凉血、消肿等功效，是主要药味之一。为确保前列欣胶囊的质量，我们对赤芍的有效成分芍药苷进行了含量测定方法的研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－20AT高效液相色谱仪配SPD－20A紫外检测器(岛津公司)、Mettler toledo电子天平(梅特勒公司)。

1.2 试药前列欣胶囊(批号:1001002、1003001、1005001、1005003、1005002、1006001，济南宏济堂制药有限责任公司);芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0736－200015);所用提取溶剂甲醇、乙醇、磷酸(分析纯，天津市广成试剂有限公司)，甲醇(色谱纯，天津市四有精细化学品有限公司)、乙腈(色谱纯，TEDIA)。

2 方法与结果

2.1 流动相的选择取本品内容物细粉约0.5 g，精密称定，精密加入甲醇20mL，回流提取30min，采用不同的流动相甲醇－0.05%磷酸二氢钾溶液(40∶65)［1］、乙腈－0.5% 磷酸二氢钾溶液(15∶85);乙腈－0.1%磷酸二氢钾(0.1%磷酸)溶液(15∶85);乙腈－0.1%磷酸二氢钾(0.1%磷酸)溶液(20∶80););甲醇－0.05% 磷酸溶液(15∶85)进行试验，通过比较采用流动相为乙腈－0.1%磷酸二氢钾(0.1%磷酸)溶液(15∶85)分离效果较好，故采用其作流动相。

2.2 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈－0.1%磷酸二氢钾(0.1%磷酸)溶液(15∶85)为流动相;检测波长为230 nm［1］。理论板数按芍药苷计算应不低于3000。

2.3 溶液制备

2.3.1 对照品溶液制备精密称取芍药苷10mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1mL溶液，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(1mL含0.02mg的溶液)。

2.3.2 供试品溶液的制备取本品内容物细粉约0.5 g精密称定，置60mL具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20mL，密塞，称定重量，超声提取30min，称重，用50%甲醇补足重量，过滤，滤液作供试品溶液。

2.3.3 阴性对照液的制备按供试品的处方比例和制备工艺，制成缺赤芍的阴性对照胶囊。取本品0.5 g，按2.3.2项下方法制成阴性对照溶液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性考察精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇分别制成每 1mL 含7.0312、14.0625、28.125、56.25、118.5 μg的对照品溶液，分别吸取20μL，按上述色谱条件测定，以芍药苷量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程:Y=11906 X+7249.9，r=0.9999。结果表明，芍药苷在7.0312 ～ 118.5 μg·mL－1范围内具有良好的线性关系。

2.4.2 专属性考察取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品液各20μL进样，结果阴性对照液在与对照品溶液、供试品溶液相应位置无相应色谱峰，结果表明，样品的其他成分对芍药苷测定无干扰，见图1。

图1 HPLC色谱图

2.4.3 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、24、28、32 h进样测定，计算相对标准偏差RSD为1.79%。

2.4.4 重复性试验对同一供试品分取6份，分别精密称定，按拟定的方法制备供试品溶液，测定含量，计算相对标准偏差，RSD为0.60%，结果见表1。

表1 重复性试验结果

2.4.5 准确度考察采用加样回收试验，精密称取对照品10.00023mg，置 20mL 容量瓶中，加 50% 甲醇制成 0.500mg·mL－1的标准加样液;另取已经测知含量的同一供试品内容物细粉6份约0.25 g，精密称定，分置60mL具塞锥形瓶中，精密加入芍药苷标准加样液0.5mL，再精密量取50%甲醇19.5mL，密塞，称定重量，超声提取 30min，称重，用50%甲醇补足重量，过滤，滤液作供试品溶液。按拟定的方法测定，计算平均回收率98.39%，RSD=1.37%，结果表明，本法具有良好的回收率，结果见表2。