紫外分光光度法测定缬草中总缬草素类成分的含量

罗喜荣 苑天红 杨军 余德顺

摘要：采用紫外分光光度法测定缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）中总缬草素的含量。结果表明，缬草素在５～２５ μｇ／ｍＬ范围内，其浓度与吸光度呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９ ８），该方法回收率为９８．９４％～１０１．０７％，准确、快速、重复性好，可用于缬草中总缬草素含量的测定。

关键词：紫外分光光度法；缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）；总缬草素

中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）18－4111-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ oｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｂｙ ＵＶ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＬＵＯ Ｘｉ－ｒｏｎｇ１，ＹＵＡＮ Ｔｉａｎ－ｈｏｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｊｕｎ２，ＹＵ Ｄｅ－ｓｈｕｎ２

（１．Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ University， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ sｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ revealed a ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５～２５ μｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ８）． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ rate ｗａｓ ９８．９４％～１０１．０７％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ waｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Vａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ

缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）为败酱科缬草属，多生于海拔８００～２ ５００ ｍ的山坡草地和林下，是一种多年生耐寒开花植物，分布于中国西南及东北地区，具有镇静催眠、神经保护、保护肾脏、调节循环系统、抗抑郁和抗肿瘤等药理活性［１］。缬草素类成分（Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ）是缬草的主要活性成分，具有镇静、催眠、抗焦虑、抗病毒、抗胃癌、解痉和舒张血管等药理作用［２－７］。缬草化学成分复杂，不同来源缬草有效成分组成和含量均有差异，目前缬草中缬草素类成分含量的测定方法有ＨＰＬＣ法和电位滴定法［８，９］，这类方法通常操作复杂，分析成本高。本试验采用紫外分光光度法测定缬草药材中总缬草素含量，旨在为建立缬草素快速分析方法提供参考。

１材料与方法

１．１材料

缬草采自贵州某地，粉碎后过６０目筛，待用。

缬草素标准品（四川维克奇生物科技公司）；分析纯甲醇和乙酸乙酯。

１．２仪器

Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、ＫＱ５２００超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

１．３方法

１．３．１标准品制备称取适量缬草素，用甲醇配制成１００ μｇ／ｍＬ的标准贮备液，分别取不同体积（０．２５～１．２５ ｍＬ）的缬草素标准贮备液于５ ｍＬ比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成系列浓度的标准工作溶液。

１．３．２样品制备准确称取缬草粉０．５ ｇ于具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯５０ ｍＬ，浸泡２４ ｈ后，超声提取４０ ｍｉｎ，过滤，用乙酸乙酯定容至５０ ｍＬ，取滤液０．２ ｍＬ挥干，用甲醇溶解后定容于５ ｍＬ比色管中。

１．３．３测定以甲醇作空白试剂，在最大吸收波长处测定标准工作液的吸光度，绘制工作曲线，以相同条件测定样品液吸光度，计算样品中的含量。

２结果与分析

２．１测定波长的选择

在２００～４００ ｎｍ范围内分别扫描缬草素标准溶液及样品溶液，由图１可知缬草素标准溶液在２５６ ｎｍ处有最大吸收，故选择测定波长为２５６ ｎｍ。

２．２工作曲线

按试验方法绘制缬草素的工作曲线，结果表明吸光度Ａ与缬草素浓度Ｃ在５～２５ μｇ／ｍＬ范围内具有良好的线性关系，其线性回归方程为Ａ＝０．０３８ ３ Ｃ＋０．００４ ２，ｒ＝０．９９９ ８。

２．３精密度

取样品溶液按试验方法重复测定６次，结果吸光度的ＲＳＤ为０．０８％，表明仪器精密度良好。

２．４稳定性

取样品溶液按试验方法在５ ｈ内每隔１ ｈ测定１次，结果吸光度的ＲＳＤ为１．９３％，表明样品溶液在５ ｈ内稳定性良好。

２．５重复性

取同一样品溶液按试验方法平行测定６次，结果其总缬草素含量的ＲＳＤ为１．９６％，表明方法重现性良好。

２．６回收率

为验证试验的准确性，在样品溶液中加入缬草素标准溶液进行回收试验并计算回收率，由表１可知加样回收率为９８．９４％～１０１．０７％，试验结果准确度高，符合分析要求。

２．７样品测定结果

取贵州不同产地缬草药材按试验方法测定样品中总缬草素含量，结果见表２。

３讨论

缬草素是构成缬草疗效的有效成分，也是各种缬草共有的特征化合物［８］，缬草素、乙酰缬草素和异缬草素均在２５６ ｎｍ处有最大吸收。以缬草素为对照品，应用紫外分光光度法测定缬草中总缬草素的含量，方法学的线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率结果都较满意，具有简便易行、结果稳定可靠、分析费用低等优点，可作为测定缬草中总缬草素含量的一种方法。

参考文献：

［１］ 殷勇冠，朱全红，王彩云．缬草的研究进展［Ｊ］．医药导报，２００６，２５（３）：２３０－２３１．

［２］ 陈磊，康鲁平，秦路平，等．总缬草素的质量标准和镇静催眠活性研究［Ｊ］．中成药，２００３，２５（８）：６６３－６６５．

［３］ 王延丽，石晋丽，郭建友，等．缬草素抗焦虑活性研究［Ｊ］． 中国实验方剂学杂志，２０１１，１７（６）：１２６－１２８．

［４］ ＴＡＭＵＲＡ Ｓ，ＳＨＩＭＩＺＵ Ｎ，ＦＵＪＩＷＡＲＡ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ ｏｆ ｖａｌｔｒａｔｅ， ａｎｔｉ－ＨＩＶ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｅｘｐｏｒｔ ｏｆ Ｒｅｖ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，２０１０，２０（７）：２１５９－２１６２．

［５］ 叶建明，胡品津，易粹琼，等．缬草波春诱导ＭＫＮ－４５胃癌细胞凋亡［Ｊ］．世界华人消化杂志，２００７，１５（１）：２２－２８．

［６］ ＯＣＣＨＩＵＴＯ Ｆ， ＰＩＮＯ Ａ， ＰＡＬＵＭＢＯ Ｄ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｌａｘｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｎｏｎ－ｐｒｅｇｎａｎｔ ｕｔｅｒｉｎｅ ｍｕｓｃｌｅ ［Ｊ］． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００９，６１（２）：２５１－２５６．

［７］ ＥＳＴＲＡＤＡ－ＳＯＴＯ Ｓ， ＲＩＶＥＲＡ－ＬＥＹＶＡ Ｊ， ＲＡＭ?魱ＲＥＺ－ＥＳＰＩＮＯＳＡ Ｊ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｅｄｕｌｉｓ ｓｓｐ． ｐｒｏｃｅｒａ（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ） ａｎｄ ｉｔｓ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｓ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ［Ｊ］． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，６２（９）：１１６７－１１７４．

［８］ 黄仁泉，张立，杨建丽．不同种缬草中缬草三酯和缬草烯酸类成分的ＨＰＬＣ分析和比较［Ｊ］．中草药，２００２，３３（１１）：１０００－１００１．

［９］ 陈建伟，武孔云，梁光义，等．两点法测定宽叶缬草中总缬草素的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（３）：６０７－６０８．

（责任编辑周有祥）

收稿日期：２０１２－０７－０２

基金项目：贵州省科技基金项目［黔科合Ｊ字（２０１１）２２８８号］，贵州省中药现代专项项目［黔科合ＺＹ字（２０１２）３０１０号］

作者简介：罗喜荣（１９７３－），女，贵州松桃人，副教授，硕士，主要从事天然药物化学研究，（电话）０８５１－６９０８５６８（电子信箱）ｌｕｏｘｉｒｏｎｇｙｊ＠１２６．ｃｏｍ；

通讯作者，杨军（１９７２－），男，副研究员，主要从事天然药物化学研究，（电话）１３９８４０１０１９２（电子信箱）ｙｊｓｆｅ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。