中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展

2012-04-29王文文宗晓娟陈立伟王甲威魏海蓉徐丽严雪瑞刘庆忠

湖北农业科学 2012年18期

王文文宗晓娟陈立伟王甲威魏海蓉徐丽严雪瑞刘庆忠

摘要：综述了近年来中国对甜樱桃（ＰｒｕｎｕｓａｖｉｕｍＬ．）病毒病及其检测技术的相关报道，介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害及特性，主要包括：李属坏死环斑病毒（ＰＮＲＳＶ）、李矮缩病毒（ＰＤＶ）、苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）、樱桃锉叶病毒（ＣＲＬＶ）、樱桃病毒Ａ（ＣＶＡ）、樱桃绿环斑驳病毒（ＣＧＲＭＶ）、樱桃小果病毒（ＬＣｈＶ）；阐述了甜樱桃病毒检测中所用的方法、技术，包括指示植物法（生物学鉴定法）、电子显微镜技术、血清学方法、分子生物学技术方法等。

关键词：甜樱桃（ＰｒｕｎｕｓａｖｉｕｍＬ．）；病毒；特性；检测技术

中图分类号：Ｓ６６２．５；Ｓ４３６．６２９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）18－3929-05

ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＳｗｅｅｔＣｈｅｒｒｙＶｉｒｕｓｅｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎ Cｈｉｎａ

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（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Sｈｅｎｙａｎｇ１１０８６６，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｏｍｏｌｏｇｙ，Ｔａｉａｎ２７１０００，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｈａｎｄｏｎｇ KｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｏｍｏｌｏｇｙＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｉａｎ２７１０００，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Tｈｅｒｅｃｅｎｔｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｉｎ Cｈｉｎａ was reviewed，ｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｔｈｅｍａｉｎｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｎｄｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｓｅｖｉｒｕｓｅｓ were introduced．ＴｈｅｓｅｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｌｕｄｅｄＰｒｕｎｕｓｎｅｃｒｏｔｉｃｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｐｒｕｎｕｓｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ，Ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｃｈｅｒｒｙ rａｓｐ lｅａｆ vｉｒｕｓ，ＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡ，Ｃｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓ，Ｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｄｅｓｃｒｉｂｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｉｎｄｉｃａｔｏｒｐｌａｎｔ，ｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙ（ＰｒｕｎｕｓａｖｉｕｍＬ．）；ｖｉｒｕｓ；ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

甜樱桃（ＰｒｕｎｕｓａｖｉｕｍＬ．）又名大樱桃，属蔷薇科李属樱亚属植物，原产于欧洲黑海沿岸和亚洲西部［１］，于２０世纪９０年代初引入中国，因其经济效益高、管理简单，成为中国近年来果树产业结构调整的重要树种。２００７年中国甜樱桃栽培面积约９．７万ｈｍ２，产量４０万ｔ左右，主要集中在环渤海湾的辽宁、山东一带［２］。甜樱桃果实酸甜可口，且营养丰富，还有很高的医用价值，被誉为“果中珍品”［３］。近年来随着无性繁殖代数的越来越多，病毒病逐渐成为影响甜樱桃产量和质量的关键因素［１］。

据国外报道，目前核果类病毒中樱属病毒主要有６８种，其中可以侵染甜樱桃的病毒约有３４种，比较常见的甜樱桃病毒主要有２０种［１］。中国自开展甜樱桃病毒病的研究以来，已经先后检测并报道了７种病毒，分别是李属坏死环斑病毒（ＰＮＲＳＶ）［４，５］、李矮缩病毒（ＰＤＶ）［６］、苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）［６］、樱桃锉叶病毒（ＣＲＬＶ）［７］、樱桃病毒Ａ（ＣＶＡ）［８］、樱桃绿环斑驳病毒（ＣＧＲＭＶ）［９］、樱桃小果病毒－２（ＬＣｈＶ－２）［１０］。目前已初步明确了中国甜樱桃主产区病毒病的种类、危害，并在病毒检测方面取得了一定的进展，本研究结合自己的研究成果，综述了中国甜樱桃病毒病及其检测技术的研究进展，期望为今后甜樱桃病毒病的研究提供参考。

１甜樱桃主要病毒、危害及特性

１．１李属坏死环斑病毒（Ｐｒｕｎｕｓｎｅｃｒｏｔｉｃｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，ＰＮＲＳＶ）

ＰＮＲＳＶ是１９３２年由Ｖａｌｌｅａｕ［１１］在李和桃树上首次发现的，它可以引起环斑病害，随后在世界范围内广泛传播。该病毒主要侵染欧洲甜樱桃、酸樱桃（Ｐ．ｃｅｒａｓｕｓ）、桃（Ｐ．ｐｅｒｓｉａ）、苹果（Ｍａｌｕｓｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）、杏（Ｐ．ａｒｍｅｎｉａｃａ）和洋李（Ｐ．ｄｏｍｉｓｔｉｃａ）等李属和蔷薇属植物［１２］，寄主多达１８０多种植物。

ＰＮＲＳＶ是分布最广、经济上危害最严重的李属病毒。常见的危害症状包括坏死环斑、碎叶、带状叶、粗花叶，有时还会产生耳突，病叶出现坏死斑，中间部分坏死、脱落形成穿孔。该病毒主要通过种子、花粉、线虫等传播，也可以通过机械调运进行远距离传播［１］。ＰＮＲＳＶ对大樱桃危害严重，各国对其非常重视，１９９２年中国将其列为入境检疫危险性有害生物［１３］。

ＰＮＲＳＶ属于雀麦花叶病毒科（Ｂｒｏｍｏｖｉｒｉｄａｅ），等轴不稳环斑病毒属（Ｉｌａｒｖｉｒｕｓ）成员。病毒粒体球形，直径约为２３ｎｍ，线形正义ｓｓＲＮＡ分子，三分体基因组（ＲＮＡ１、ＲＮＡ２、ＲＮＡ３）。其中，ＲＮＡ１和ＲＮＡ２为单顺反子，分别编码病毒的复制酶蛋白Ｐ１和Ｐ２，ＲＮＡ３为双顺反子，编码病毒的运动蛋白（ＭＰ或者ＯＲＦ３ａ），亚基因组ＲＮＡ４参与病毒的外壳蛋白（ＣＰ或者ＯＲＦ３ｂ）的表达。２００１年Ｔｅｒｌｉｚｚｉ等［１４］又发现ＰＮＲＳＶ病毒粒子里还包含有ＲＮＡ５。根据血清学反应，将ＰＮＲＳＶ分为３种血清型，即ＣＨ３、ＣＨ９、ＣＨ３０［１５］和2种致病型Ｍ和Ｒ［１１］（温和致病型和皱缩花叶病型）。按照分子生物学及其序列同源性分析，ＰＮＲＳＶ又可分为组Ｉ（ＰＶ３２）、组Ⅱ（ＰＶ９６）和组Ⅲ（ＰＥ５）［１３－１５］３组，其中，皱缩花叶病型株系分在组Ｉ；温和致病型株系分在组Ⅱ；组ＩＩＩ中的株系既有温和致病型的株系也有引起严重症状的类型［１６］。

１９９６年Ｚｈｏｕ等［４］利用血清学试剂盒在中国首次报道了ＰＮＲＳＶ的发生；同年李青等［５］利用ＥＬＩＳＡ法对北京地区的桃、樱桃上ＰＮＲＳＶ的发生情况进行了检测；１９９８年阮小凤等［６］对甜樱桃上ＰＮＲＳＶ等病毒感染情况进行ＥＬＩＳＡ检测，ＰＮＲＳＶ感染率为２１．４％。２０００年侯义龙［１７］率先在国内建立起李属植物ＰＮＲＳＶ及ＰＤＶ的ＲＴ－ＰＣＲ分子检测体系；代红艳等［１８］完成了甜樱桃茎尖组培苗中ＰＮＲＳＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测。２００５年李明福等［１９］在北京甜樱桃上发现了ＰＮＲＳＶ。２０１１年本课题组在借鉴前人的基础上，开发了新的ＰＮＲＳＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测方法，并对山东地区甜樱桃常见病毒的发生情况进行调查检测［１３］，其中ＰＮＲＳＶ感染率为３８％（此结果未发表）。

１．２李矮缩病毒（Ｐｒｕｎｕｓｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ，ＰＤＶ）

１９３６年由Ｔｈｏｍａｓ［２０］首次报道，分布在欧洲、美洲、日本、澳大利亚和新西兰等李属果树种植区。主要侵染欧洲甜樱桃、洋李、桃、圆叶樱桃（Ｐ．ｍａｈａｌｅｂ）、樱花（Ｐ．ｓｅｒｒｕｌａｔａ）、梨（Ｐｙｒｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）等植物。

ＰＤＶ可引起樱桃黄花叶病、樱桃褪绿环斑病，与ＰＮＲＳＶ侵染植物的症状相似，叶片细长畸形、产生褪绿坏死环斑、黄化花叶等症状。ＰＤＶ与ＰＮＲＳＶ

２种病毒常常造成复合侵染，从而造成更严重的危害。ＰＤＶ主要通过嫁接、种子、花粉传播［１］。

ＰＤＶ为雀麦花叶病毒科等轴不稳环斑病毒属成员。球状病毒粒子，直径约为２２ｎｍ［２１］。基因组有３条正义ｓｓＲＮＡ，ＲＮＡ１和ＲＮＡ２编码病毒转录和复制的蛋白，ＲＮＡ３编码ＭＰ和ＣＰ蛋白，ＣＰ蛋白由ＲＮＡ４表达，ＲＮＡ４和ＲＮＡ３一起被包裹。

ＰＤＶ在全世界普遍发生，为中国入境检疫危险性有害生物。在国内，１９９６年李青等［５］首次报道甜樱桃感染有ＰＤＶ。２０００年侯义龙［１７］应用ＲＴ－ＰＣＲ方法在国内建立起ＰＤＶ的分子生物学检测体系，２００５年在北京、大连地区的桃、樱桃及樱桃组培苗中检测到ＰＮＲＳＶ、ＰＤＶ［２２，２３］。２００９年赵世恒等［２４］再次从北京怀柔地区检测到ＰＤＶ。２０１１年宗晓娟等［２５］建立了新的ＰＤＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测方法，在山东地区甜樱桃果园中检测到甜樱桃的ＰＤＶ感病植株。

１．３苹果褪绿叶斑病毒（Ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，ＡＣＬＳＶ）

在中国ＡＣＬＳＶ发生普遍，对苹果、甜樱桃等造成严重影响，感染病毒后会使其生长量减少１６％～３６％，产量降低１６％～６０％，极大地危害果品产量和质量。ＡＣＬＳＶ可以单独感染，也可以与其他病毒复合感染果树，引起果树衰退病，苗木及嫁接的根、新梢、叶、花、果均表现出症状。例如，ＡＣＬＳＶ可以和ＰＮＲＳＶ协同侵染，会造成樱桃坏死线纹病，染病叶片上出现呈带状的褪绿斑最终坏死。ＡＣＬＳＶ可以经机械传播、嫁接传播或通过无性繁殖材料传播，也可通过种子传播［１］。

ＡＣＬＳＶ为纤毛病毒属（Ｔｒｉｃｈｏｖｉｒｕｓ）重要成员之一，其病毒粒体呈弯曲的线状，病毒粒子为螺旋对称结构，长约７２０ｎｍ，直径约１２ｎｍ，病毒为线形正义ｓｓＲＮＡ，长约７５５５ｎｔ。单分体基因组ＲＮＡ含有３个部分重叠的开放读码框（ＯＲＦｓ），最大的ＯＲＦ编码复制酶（２１６．５ｋＤａ），其余２个可能编码移动蛋白（５０．４ｋＤａ）和外壳蛋白（２１．４ｋＤａ）［２６，２７］。

洪霓等［２８］利用苹果分离株制备的ＡＣＬＳＶ抗血清对田间果树样品进行检测，结果成功检测出桃树和梨树上的ＡＣＬＳＶ。早期阮小凤等［６］利用ＥＬＩＳＡ法对陕西甜樱桃病毒病发生情况进行调查，发现ＰＮＲＳＶ、ＰＤＶ、ＡＣＬＳＶ发生率较高，李春敏等［２９］对昌黎甜樱桃上的苹果褪绿叶斑病毒进行ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测，１４株甜樱桃树上苹果褪绿叶斑病毒感染率为４７．１％。２０００年侯义龙［１７］建立了包括ＡＣＬＳＶ在内的主要果树病毒的ＲＴ－ＰＣＲ检测体系，并对其进行了系统研究。

１．４樱桃锉叶病毒（Ｃｈｅｒｒｙ rａｓｐ lｅａｆ vｉｒｕｓ，ＣＲＬＶ）

Ｂｏｄｉｎｅ等［３０］首次在野生樱桃上发现该病毒。樱桃锉叶病的症状是多样性的，正常叶的叶面为左右对称，叶片呈椭圆形，病叶表现明显的叶缘皱缩，严重的缺刻现象，形状变得极不规则。在田间条件下，侵染还会诱发其他症状，包括：小叶、节间断缩、失绿黄化、叶脉白化、果实小、叶片背面突起等。对中国樱桃实生砧的５年生甜樱桃的衰弱症状检查发现，枝条韧皮部和形成层发生褐变，短枝很快枯死，大枝逐步死亡，最后整株枯死［７］。ＣＲＬＶ自然寄主有欧洲甜樱桃、圆叶樱桃和苹果等，观赏性樱花可作为锉叶病毒的中间寄主，在甜樱桃栽培区不宜种植。主要通过线虫传播（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａａｍｅｒｉｃａｎａ），也可经嫁接、花粉、昆虫和螨类传播，包括叶螨、叶蝉等［３１，３２］。

ＣＲＬＶ属于豇豆花叶病毒科线虫多面体病毒属（Ｃｏｍｖｉｒｉｄａｅ nｅｐｏｖｒｉｕｓ）。病毒粒子二十面体，呈等轴对称结构，直径约３０ｎｍ。二分体基因组，ＲＮＡ１长６９９２ｎｔ，ＲＮＡ２长３２７４ｎｔ［３２］。２００２年谭海东等［７］通过电镜观察和紫外分光光度计的检测方法，首次报道了樱桃锉叶病在中国的发生情况，并提纯到该病毒。

１．５樱桃病毒Ａ（ＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡ，ＣＶＡ）

ＣＶＡ是１９９５年由Ｊｅｌｋｍａｎｎ［３３］在克隆ＬＣｈＶ的ｃＤＮＡ时意外发现的，会与ＬＣｈＶ复合发生，但并不影响ＬＣｈV的症状的表达［３４］。ＣＶＡ最初仅在英国发生，后来陆续传播到德国、加拿大和波兰等地［３５］。ＣＶＡ主要侵染欧洲甜樱桃、酸樱桃和杏等李属植物。ＣＶＡ作为一种典型的潜隐性病毒，寄主无明显症状，可通过嫁接传播。

ＣＶＡ属于发形病毒属（Ｃａｐｉｌｌｏｖｉｒｕｓ），病毒呈弯曲线状，长６４０～７００ｎｍ。基因组ＲＮＡ含有２个开放性阅读框（ＯＲＦｓ），其中ＯＲＦ１编码包含着复制酶蛋白的多聚蛋白，约为２６６ｋＤａ。ＯＲＦ２可能编码病毒的运动蛋白，约为５２ｋＤａ［１］。

２００９年在云南昆明的甜樱桃样品上检测发现到ＣＶＡ［８］，这是该病毒在中国甜樱桃上的首次报道。２０１０年在北京等地的甜樱桃果树上也发现ＣＶＡ的存在［３６］，发生较为普遍。２０１１年本课题组在山东地区病毒病的调查中，发现ＣＶＡ感染率约为６０％（此结果未发表）。

１．６樱桃小果病毒（Ｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓ，ＬＣｈＶ）

樱桃小果病严重危害欧洲甜樱桃和酸樱桃，发生普遍，最初发现于加拿大英属哥伦比亚东部［３７］，在欧洲大部分地区和北美均有相关病例报道。２００４年波兰首次报道发现了ＬＣｈＶ－１［３５］。

ＬＣｈＶ引起樱桃小果病症状复杂多变，表现程度常依季节、地区和果园的不同有很大的差异。典型症状有叶片边缘轻微卷曲，发病叶片在夏末和秋季变为红色或青铜色［３７］，侵染果实会使其不能完全成熟，着色不完全，产生斑点，果实小，畸形，收获时只有正常果实的１／２～１／３大小。受影响的果实呈现暗红色、三角状，口味下降，果实成熟过晚，据报道更易侵害具有暗红色果实的栽培品种［３８］。ＬＣｈＶ通过汁液和昆虫介体传播，１９８６年在加拿大发现新的传播介体为苹果粉蚧（Ｐｈｅｎａｃｏｃｃｕｓａｃｅｒｉｓ）［３９］。

樱桃小果病主要与2个分离物ＬＣｈＶ－１、ＬＣｈＶ－２有关，都为长线形病毒科（Ｃｌｏｓｔｅｒｏｖｉｒｉｄａｅ）长线形病毒属（Ｃｌｏｓｔｅｒｉｏｖｉｒｕｓ），单分体基因组，病毒核酸为单分子线形正义ｓｓＲＮＡ。病毒粒子呈弯曲的长线型，螺旋对称结构，长１２５０～２０００ｎｍ，宽１２ｎｍ［４０］。

樱桃小果病的病原研究进展很慢，直到１９９７年ＬＣｈＶ的全序列被测出［４０］，对ＬＣｈＶ的研究才有了突破性的进展。２０１１年中国首次在云南昆明樱花和甜樱桃中发现ＬＣｈＶ－２［１０］，这是ＬＣｈＶ－２在中国的首次系统报道。中国至今未有ＬＣｈＶ－１和ＬＣｈＶ－２在甜樱桃上共同侵染的报道。

１．７樱桃绿环斑驳病毒（Ｃｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓ，ＣＧＲＭＶ）

１９３７年在美国密歇根州的酸樱桃上首次发现了ＣＧＲＭＶ，可侵染几种李属植物，包括酸樱桃、甜樱桃、樱花、桃、杏。该病毒在北美、欧洲、新西兰、非洲和亚洲等地区分布极广［４１］。

ＣＧＲＭＶ属于凹陷病毒属（Ｆｏｖｅａｖｉｒｕｓ），是单分子线形正义ｓｓＲＮＡ，无ＤＮＡ阶段，其基因组长８３７２ｎｔ，除３′端ｐｏｌ（Ａ）尾巴外，含５个开放阅读框架（ＯＲＦｓ）［４１］。ＯＲＦ１编码依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶；ＯＲＦ２是1个三基因框，编码解旋酶；ＯＲＦ３编码衣壳蛋白；其余２个的作用还未确定［４２］。Ｚａｇｕｌａ等［４３］分离出１个ＣＧＲＭＶ墨西哥分离物，得知病毒粒子长约１０００～２０００ｎｍ，直径５～６ｎｍ，有１个２．５×１０６Ｄａ的ｓｓＲＮＡ，２５ｋＤａ衣壳蛋白。

ＣＧＲＭＶ感染酸樱桃导致叶片黄化、次脉周围暗色斑驳等症状，但在甜樱桃及其他李属作物上为潜隐性病毒，侵染后通常无症状。Ｚｈａｎｇ等［４２］从美国密歇根州的酸樱桃中检测到ＣＧＲＭＶ；Ｉｓｏｇａｉ等［４４］在日本甜樱桃上报道了ＣＧＲＭＶ；Ｋｏｍｏｒｏｗｓｋａ［４５］等从波兰甜樱桃、Ｓｉｐａｈｉｏｇｌｕ等［４６］从土耳其甜樱桃中分离到病毒分离株；２０１１年我国首次利用ＲＴ－ＰＣＲ检测技术在甜樱桃等李属植物中发现了ＣＧＲＭＶ［９］。

２甜樱桃病毒检测技术

２．１指示植物检测法

草本指示植物法：该方法一般采用汁液接种法。昆诺藜、烟草可作为李属植物病毒常用指示植物［４７］。中国利用黄瓜、南瓜和美丽猪屎豆作为草本指示植物，对ＰＤＶ、ＰＮＲＳＶ在不同指示植物上的症状表现进行了检测和研究，并首次利用生物学方法检测出ＰＤＶ［４８，４９］；木本指示植物法：目前国际上通过的用于田间鉴定的指示植物有５种［５０］，分别为山樱桃的Ｓｈｉｒｏｆｕｇｅｎ和Ｋｗａｎｚａｎ，甜樱桃的滨库（Ｂｉｎｇ）、赛姆（Ｓａｍ）、凯弥戴柯斯（Ｃａｎｎｉｄｅｘ）。根据指示植物和所鉴定病毒对温度的要求，在控制温度的温室条件下也可进行鉴定。常用的标准李属指示植物有桃ＧＦ３０５、Ｅｌｂｅｒｔａ、山樱桃Sｈｉｒｏｆｕｇｅｎ［５１］。

２．２电子显微镜技术

电子显微镜能直接观察到病毒粒子的形态特征，可将病毒提纯后对病毒粒体直接观察。在电子显微镜检测的基础上，又发展起来的免疫吸附电镜技术和胶体金免疫电镜技术，使病毒检测的灵敏性和直观性大幅度提高。但由于果树病毒浓度低，分布不均匀，因此电镜在果树病毒检测中应用较少。

２．３酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）

目前，在植物病毒的检测上应用最广泛的检测方法是酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）。此方法通过抗原—抗体的特异性识别反应来进行检测。最早ＥＬＩＳＡ为直接双抗体夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）。应用该技术已成功检测出ＡＣＬＳＶ［５］、ＰＮＲＳＶ［５，６］、ＰＤＶ［６］。后来又出现了Ａ蛋白夹心－ＥＬＩＳＡ法（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）［５２］和间接双抗体夹心法［５０］，其准确率比ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ高。虽然酶联免疫吸附法精确度较高，但有一定的局限性。例如，在某些情况下有的病毒缺乏外壳蛋白，而类病毒则没有外壳蛋白，无法运用酶联免疫法检测；受病毒系统和复合侵染的木本植物，无法完成纯化病毒和制备抗血清；寄主植物中低浓度的病毒也无法检测。

２．４分子生物学技术

分子生物学技术是通过检测病毒核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）来证实病毒的存在。此技术比ＥＬＩＳＡ灵敏度高，特异性强、快速，可用于大量样品的检测，适应范围广，其应用对象为ＲＮＡ病毒、ＤＮＡ病毒及类病毒。目前，常用的分子生物学技术主要包括核酸分子杂交技术、多聚酶链式反应技术（ＰＣＲ）、双链ＲＮＡ电泳技术（ｄｓＲＮＡ）等。国外许多学者采用ＰＣＲ技术检测果树病毒，并取得了很好的效果。新发展的ＲＴ-ＰＣＲ技术是以ＰＣＲ技术为基础衍生出的病毒检测方法，可以检测ｆｇ（１０-１５）数量级的植物病毒及大规模的样品［８－１０，１７－１９］。近年来，在ＲＴ-ＰＣＲ基础上又发展了ＩＣ-ＲＴ-ＰＣＲ和多重ＩＣ-ＲＴ-ＰＣＲ，实时荧光定量ＰＣＲ等，目前应用较多的是ＲＴ－ＰＣＲ检测技术。２０００年侯义龙［１７］应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测出ＡＣＬＳＶ、ＰＮＲＳＶ、ＡＳＧＶ及ＡＳＰＶ４种病毒，同时调查发现８年生甜樱桃品种巨红ＡＣＬＳＶ感染率高达８８％，ＰＮＲＳＶ感染率为７６％。实时荧光定量ＰＣＲ技术也将进一步用于果树病毒的研究中。分子生物学技术在病毒检测上的应用将会有更广阔的前景。

３存在的问题与展望

１）在当今技术水平下，对于甜樱桃病毒病的防治尚无有效的化学药剂，建立快速有效的检测方法，加强病毒检疫检验是防治病毒病的惟一途径。目前分子生物学方法特别是核酸分子杂交技术、双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）电泳技术、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）的发展和应用极大地推动了甜樱桃病毒病的检测和研究。近年来，在ＰＣＲ基础上又出现了免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）技术、实时荧光ＰＣＲ（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ）技术等，快速、精确的检测技术有待进一步发展与应用于中国甜樱桃产业中。

２）目前国际上已确定的樱桃病毒病有３4种，而中国有报道的侵染甜樱桃的病毒仅有７种，中国对甜樱桃病毒病病原的研究还不够全面。有必要对中国的甜樱桃病毒病的株系种类、分布和危害进行详细的调查。明确中国甜樱桃病毒病的种类、发生和分布情况，进一步为田间甜樱桃病毒病的检测和防治提供依据。

３）近几年随着甜樱桃苗木引种和调运，甜樱桃新病毒病随着苗木传入国内，并在国内各地区逐渐发生，凸显了苗木病毒检疫存在的问题。应该加大苗木进出口检疫监管力度，加强苗木国内调运检测检验工作，严格控制有害病毒广泛传播。

４）加强果树脱毒与无病毒苗木繁殖，建立无病毒苗木良种繁育体系，是保证甜樱桃产量和提高品质的基本措施。

参考文献：

［１］董薇，宋雅坤，吴明勤，等．大樱桃病毒病研究进展［Ｊ］．中国农学通报，２００５，２１（５）：３３２－３３６．

［２］苏佳明．苹果和樱桃主要病毒调查及脱毒苗培育研究［Ｄ］．泰安：山东农业大学，２０１０．

［３］纪彦，吴海东，王宁．大樱桃脱毒及检测技术研究进展［Ｊ］．大连民族学院学报，２００４，６（５）：５３－５５．

［４］ＺＨＯＵＹＹ，ＲＵＡＮＸＦ，ＷＵＣＬ，ｅｔａｌ．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９６，８０（１２）：１４２９．

［５］李青，覃兰英，李明福，等．酶联免疫法检测核果果树病毒［Ｊ］．北京农业科学，１９９６，１４（４）：３３－３５．

［６］阮小凤，杨勇．甜樱桃病毒病的ＥＬＩＳＡ检测研究［Ｊ］．山东农业大学学报（自然科学版），１９９８，２９（３）：２７７－２８２．

［７］谭海东，李树英，赵姝华，等．樱桃锉叶病毒的初鉴定和防治［Ｊ］．北方果树，２００２，３（３）：６－８．

［８］ＲＡＯＷＬ，ＺＨＡＮＧＺＫ，ＬＩＲ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡｉｎｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｔｒｅｅｓｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００９，９３（４）：４２５．

［９］ＺＨＯＵＪＦ，ＷＡＮＧＧＰ，ＫＵＡＮＧＲＦ，ｅｔａｌ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆＣｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓｏｎｃｈｅｒｒｙａｎｄｐｅａｃｈｇｒｏｗｎｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１１，９５（１０）：１３１９．

［１０］ＲＡＯＷＬ，ＬＩＦ，ＺＵＯＲＪ，ｅｔａｌ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆＬｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓ２ｉｎｆｌｏｗｅｒｉｎｇａｎｄｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｔｒｅｅｓｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１１，９５（１１）：１４８４．

［１１］ＶＡＬＬＥＡＵＷＤ．Ａｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅｏｆｐｌｕｍａｎｄｐｅａｃｈ．Ｂｕｌｌ－ｋｙ－Ａｇｒｉｃ－Ｅｘｐ－Ｓｔｎ［Ｍ］．Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｔａｔｉｏｎ，１９３２．

［１２］ＭＩＮＫＧＩ，ＨＯＷＥＬＬＷＥ，ＣＯＬＥＡ，ｅｔａｌ．ＴｈｒｅｅｓｅｒｏｔｙｐｅｓｏｆＰｒｕｎｕｓｎｅｃｒｏｔｉｃｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｕｇｏｓｅｍｏｓａｉｃ－ｄｉｓｅａｓｅｄｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｔｒｅｅｓｉｎＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９８７，７１（１）：９１－９３．

［１３］中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录［Ｓ］．

［１４］ＴＥＲＬＩＺＺＩＢＤ，ＳＫＲＺＥＣＺＫＯＷＳＫＩＬＪ，ＭＩＮＫＪＩ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＲＮＡ５ｏｆＰｒｕｎｕｓｎｅｃｒｏｔｉｃｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓｉｓａｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｉｎａｃｔｉｖｅｃｏｐｙｏｆｔｈｅ３－ＵＴＲｏｆｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＲＮＡ３［Ｊ］．ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ，２００１，１４６（４）：８２５－８３３．

［１５］ＨＡＬＫＥＬ，ＨＳＵＨＴ，ＡＥＢＩＧＪ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｍｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔｔｈｒｅｅｉｌａｒｖｉｒｕｓｅｓａｎｄａｌｆａｌｆａｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓａｎｄｔｈｅｉｒｕｓｅｉｎｓｅｒｏｙｐｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈ，１９８４，７４（３）：３６７－３７２．

［１６］ＨＡＭＭＯＮＤＲＷ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＰｒｕｎｕｓｎｅｃｒｏｔｉｃｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓｆｒｏｍｔｈｅ iｌａｒｖｉｒｕｓ rｉｎｇｔｅｓｔａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｒｏｕｐ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｆｅａｔｏｕｒｓｅ［Ｊ］．ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ，２００３，１４８（６）：１１９５－１２１０．

［１７］侯义龙．果树主要病毒ＲＴ－ＰＣＲ检测体系的建立、优化及病毒特异ＤＮＡ片段克隆测序研究［Ｄ］．沈阳：沈阳农业大学，２０００．

［１８］代红艳，张志宏，吴禄平，等．甜樱桃茎尖培养及ＰＮＲＳＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测［Ｊ］．园艺学报，２００３，３０（１）：８７－８９．

［１９］李明福，张永江，黄冲，等．北京怀柔地区樱桃上发现李属坏死环斑病毒［Ｊ］．植物病理学报，２００５，３５（６）：５５２－５５４．

［２０］ＴＨＯＭＡＳＨ．ＡｎｅｗｖｉｒｕｓｉｎＰｒｕｎｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａｆｒｏｍｔｈｅＵ．Ｓ．Ａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈ，１９３６，２６：１１４５－１１４６．

［２１］ＢＡＣＨＭＡＮＥＪ，ＳＣＯＴＴＳＷ，ＸＩＮＧ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｐｒｕｎｅｄｗａｒｆｉｌａｒｖｉｒｕｓＲＮＡ３：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｍｅｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｉｌａｒｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９４，２０１（１）：１２７－１３１．

［２２］侯义龙，张开春，杨俊玲．应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测桃和樱桃及其组培苗上的ＰＮＲＳＶ和ＰＤＶ［Ｊ］．果树学报，２００５，２２（３）：２９２－２９３．

［２３］侯义龙，杨俊玲，李春敏．李矮缩病毒ＲＴ－ＰＣＲ方法建立及检测应用［Ｊ］．中国农业科学，２００５，３８（２）：４２５－４２７．

［２４］赵世恒，王进忠，李明福，等．北京怀柔地区李矮缩病毒的检测鉴定［Ｊ］．中国植保导刊，２００９，２９（２）：５－７．

［２５］宗晓娟，王文文，陈立伟，等．两种主要甜樱桃病毒ＲＴ－ＰＣＲ检测方法的改进［Ｊ］．植物保护学报，２０１１，３８（３）：２８５－２８６．

［２６］洪健，李德葆，周雪平．植物病毒分类图谱［Ｍ］．北京：科学出版社，２００１．

［２７］洪霓，王国平．苹果褪绿叶斑病毒生物学及生化特性研究［Ｊ］．植物病理学报，１９９９，２９（１）：７７－８１．

［２８］洪霓，王国平，ＢＯＳＣＩＡＤ，等．苹果褪绿叶斑病毒提纯及抗血清制备技术研究［Ｊ］．中国果树，１９９９（１）：１５－１８．

［２９］李春敏，吴雅琴，章德明，等．核果类果树苹果褪绿叶斑病毒的研究［Ｊ］．中国果树，１９９７（４）：１２－１３．

［３０］ＢＯＤＩＮＥＥＷ，ＮＥＷＴＯＮＪＨ．Ｔｈｅｒａｓｐｌｅａｆｏｆｃｈｅｒｒｙ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９４２，３２：３３３－３３５．

［３１］ＷＡＧＮＯＮＨＦ，ＴＲＡＹＬＯＲＪ，ＷＩＬＬＡＭＳＨＥ，ｅｔａｌ．ＡｐｈｉｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆＣｈｅｒｒｙｒａｓｐｌｅａｆｎｅｐｏｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅＲｅｐｏｒｔ，１９６８，５２：６１８－６２２．

［３２］ＪＡＭＥＳＤ，ＵＰＴＯＮＣ．ＧｅｎｏｍｅｓｅｇｍｅｎｔＲＮＡ－１ｏｆａｆｌａｔａｐｐｌｅｉｓｏｌａｔｅｏｆＣｈｅｒｒｙｒａｓｐｌｅａｆｖｉｒｕｓ：ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄＲＴ－ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｒｃｈＶｉｒｏｌ，２００５，１５０（７）：１４６９－１４７６．

［３３］ＪＥＬＫＭＡＮＮＷ．ＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡ：ｃＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇｏｆｄｓＲＮＡ，ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｓｅｒｏｌｏｇｙｒｅｖｅａｌａｎｅｗｐｌａｎｔｃａｐｉｌｌｏｖｉｒｕｓｉｎｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ，１９９５，７６（８）：２０１５－２０２４．

［３４］ＥＡＳＴＷＥＬＬＫＣ，ＢＥＲＮＡＲＤＹＭＧ．ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡｔｏｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｄｉｓｅａｓｅｉｎ bｒｉｔｉｓｈ cｏｌｕｍｂｉａ［Ｊ］．ＡｃｔａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，１９９８，４７２：３０５－３１３．

［３５］ＫＯＭＯＲＯＷＳＫＡＢ，ＣＩＥＳＬＩＮＳＫＡＭ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆＣｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓＡａｎｄｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓ－１ｉｎＰｏｌａｎｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Dｉｓｅａｓｅ，２００４，８８（８）：９０９－９１１．

［３６］郭颂，张福兴，怀晓，等．樱桃病毒Ａ北京分离物外壳蛋白的原核表达及抗血清制备［Ｊ］．植物病理学报，２０１０，４０（６）：５６８－５７３．

［３７］ＷELSH ＭＦ，ＣHENEY ＰＷ．Ｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｉｎ：ＶｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄｎｏｎｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｏｒｄｅｒｓｏｆｓｔｏｎｅｆｒｕｉｔｓｉｎＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ［Ｊ］．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ，１９７６，４３７：２３１－２３７．

［３８］ＢＡＪＥＴＮＢ，ＵＮＲＵＨＴＲ，ＤＲＵＦＦＥＬＫＬ，ｅｔａｌ．ＯｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｔｗｏｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｉｎＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＳｔａｔｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（２）：２３４－２３８．

［３９］ＲＡＩＮＥＪ，ＭＣＭＵＬＬＥＮＲＤ，ＦＯＲＢＥＳＲＤ．ＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅａｇｅｎｔｃａｕｓｉｎｇｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｄｉｓｅａｓｅｂｙｔｈｅａｐｐｌｅｍｅａｌｙｂｕｇＰｈｅｎａｃｏｃｃｕｓａｃｅｒｉｓａｎｄｔｈｅｄｏｄｄｅｒＣｕｓｃｕｔａｌｕｐｕｌｉｆｏｒｍｉｓ［Ｊ］．ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８６，８（１）：６－１１．

［４０］ＪＥＬＫＭＡＮＮＷ，ＦＥＣＨＴＮＥＲＢ，ＡＧＲＡＮＯＶＳＫＹＡＡ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｏｍｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｌｉｔｔｌｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓ，ａｍｅａｌｙｂｕｇ－ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅｃｌｏｓｔｅｒｏｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＪＧｅｎＶｉｒｏｌ，１９９７，７８：２０６７－２０７１．

［４１］ＷＡＮＧＬＰ，ＨＯＮＧＮ，ＷＡＮＧＧＰ，ｅｔａｌ．Ｆｉｒｓｔ rｅｐｏｒｔｏｆ cｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓｉｎＰｌｕｍ（Ｐｒｕｎｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ｉｎＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００９，９３（１０）：１０７３．

［４２］ＺＨＡＮＧＹＰ，ＫＩＲＫＰＡＴＲＩＣＫＢＣ，ＳＭＡＲＴＣＤ，ｅｔａｌ．ｃＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ，１９９８，７９（９）：２２７５－２２８１．

［４３］ＺＡＧＵＬＡＫＲ，ＡＲＥＦＮＭ，ＲＡＭＳＤＥＬＬＤＣ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｌｏｇｙ，ａｎｄｓｏｍｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅｖｉｒｕｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｉｎｐｅａｃｈａｎｄｃｈｅｒｒｙ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８９，７９：４５１－４５６．

［４４］ＩＳＯＧＡＩＭ，ＡＯＹＡＧＩＪ，ＮＡＫＡＧＡＷＡＭ，ｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｉｖｅｃｈｅｒｒｙｖｉｒｕｓｅｓｆｒｏｍｓｗｅｅｔｃｈｅｒｒｙｔｒｅｅｓｉｎＪａｐａｎ［Ｊ］．ＪＧｅｎＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌ，２００４，７０（５）：２８８－２９１．

［４５］ KOMOROWSKA B, CIE■LI■SKA M． First report of cherry green ring mottle virus on sweet cherry in Poland［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Dｉｓｅａｓｅ，２００５，８９（１２）：１３６３．

［４６］ＳＩＰＡＨＩＯＧＬＵＨＭ，ＵＳＴＡＭ，ＯＣＡＫＭ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆ cｈｅｒｒｙｇｒｅｅｎｒｉｎｇｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓｉｎＴｕｒｋｅｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２００８，５７（２）：３９２．

［４７］吴雅琴．果树病毒检测方法研究进展［Ｊ］．河北果树，２００５（３）：１－２，５．

［４８］李春敏，章德明．核果矮缩病毒的生物学检测研究［Ｊ］．河北林果研究，１９９８（增刊）：２６ｌ－２６３．

［４９］李春敏．利用指示植物检测核果坏死环斑病毒［Ｊ］．河北果树，２００３（４）：１４－１５．

［５０］覃兰英，李明福．核果类病毒识别鉴定及脱毒技术［Ｊ］．北京农业科学，１９９７，１５（５）：２３－２８．

［５１］刘庆忠，周佩珍．甜樱桃病毒病的鉴定及脱毒技术［Ｊ］．落叶果树，１９９１（４）：４０－４１．

［５２］吴雅琴，陈霜莹，王文慧，等．三种ＥＬＩＳＡ方法检测苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒的比较［Ｊ］．植物保护学报，１９９８，２５（３）：２４５－２４８．

收稿日期：２０１２－０２－０３

基金项目：农业部“９４８”项目（２０１１－Ｚ４０）；国家公益性行业（农业）科研专项（２００９０３０１９）；山东省农业良种工程［鲁农良种字（２０１０）６号］

作者简介：王文文（１９８６－），女，山东济宁人，在读硕士研究生，研究方向为园艺植物病理学，（电话）１５９５４７６２５８１（电子信箱）ｗａｎｇｗｅｎｗｅｎＢ＠１２６．ｃｏｍ；