九牛胆提取物的抗氧化活性研究

杨政敏+刘仪伟+韩忠耀

【摘 要】 目的：研究九牛胆提取物的体外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，以VC为对照品，测定九牛胆不同溶剂提取物对DPPH、羟基自由基和ABTS自由基的清除能力。结果：九牛胆不同溶剂提取物对三种自由基均具有一定清除作用，九牛胆甲醇提取物对DPPH和羟基自由基的抑制较强，其IC50为别0.61 g/L和0.41g/L。结论：九牛胆甲醇提取物是一种较好的天然抗氧化剂。

【关键词】 九牛胆；抗氧化活性；紫外分光光度法

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）12-0035-02

Abstract：Objective The aim of this study is to investigate the antioxidant activity in vitro of different extract from the Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep.. Methods UV spectrophotometric method was used to the scavenging capacities of different extract from the Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep. on DPPH， ·OH and ABTS+· were assayed in contrast with VC. Results The experimental results indicated that methanol extract has effect of scavenging on DPPH and ·OH， the IC50 were 0.61g/L and 0.41g/L respectively. Conclusion Methanol extract is a good natural antioxidant.

Keywords：Tinospora sagittata（oliv.） Gagnep.； antioxidant activity； extract

自由基医学领域的深入研究，使人们越来越关注各种自由基对人体的损伤，从自然界中寻找对自由基具有较强清除能力的天然植物具有重要意义[1]。九牛胆为防己科植物青牛胆Tinospora sagittata（Oliv.） Gagnep.或金果榄T. capillipes Gagnep.的干燥块根[2]，具有清热解毒、利咽止痛之功效，临床应用治疗咽喉肿痛、痈疽疔毒、泄泻、痢疾、脘腹热痛等，具有重要的经济价值 [3-4]。研究采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、水为溶剂，对九牛胆进行提取，对提取物的体外抗氧化活性进行研究，对开发利用九牛胆丰富的药物资源提供参考数据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 ABL-224型电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；DFD-700型电子恒温水浴锅、DZ-2BCⅡ型真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；759型紫外可见分光光度计（上海仪电分析仪器有限责任公司）。

1.2 材料 九牛胆购买于贵阳中药市场；对氨基苯磺酸、2，2-联氮基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）均购于上海晶纯生化科技股份有限公司；乙醇、硫酸亚铁、水杨酸、高硫酸钾、双氧水（30%）、盐酸、L-抗坏血酸（VC）均为分析纯。

2 方法

2.1 九牛胆提取物的制备 称取10.0g干燥的九牛胆粉末，按固液比1∶10的比例加入100ml蒸馏水，60恒温水浴回流3h后，过滤。滤液用旋转蒸发仪减压蒸馏，回收溶剂，残留物低温真空干燥，得九牛胆水提取物。同法制备甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿提取物。提取物4℃冰箱保存备用。

2.2 DPPH自由基清除率的测定[5]分别移取浓度为（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 g/L）的样品溶液和物质的量浓度为2×10-4mol/L的DPPH溶液。分别移取2ml不同浓度的样品溶液与2ml的DPPH溶液于具塞试管中，混匀，在30℃下恒温30min，在525nm处测定其吸光度，同时以VC为对照品。其清除率的计算公式：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%。其中，Ai为样品与DPPH混合溶液的吸光度，Aj为样品溶液的吸光度，Ac为DPPH溶液的吸光度。

2.3 羟基自由基清除率的测定[6]分别移取1ml不同浓度（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4g/L）的样品溶液于10ml具塞试管中，向各试管中加入9mmol/L的硫酸亚铁溶液1ml，9mmol/L的水杨酸-乙醇溶液1mL，用蒸馏水定容至5ml，然后分别加入1ml 6mmol/L的H2O2溶液，启动反应，置于37℃温度下反应10min，在510nm下测定其吸光度，以VC为对照品。其清除率的计算公式：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%。其中，Ai为加入样品溶液、硫酸亚铁、水杨酸-乙醇、过氧化氢溶液的吸光度，Aj为不加过氧化氢溶液的吸光度，Ac为不加样品溶液的吸光度。

2.4 ABTS自由基的清除试验[7]将5ml 7mmol/L ABTS和88μl 140mmol/L过硫酸钾溶液混合，在室温、避光条件下静置过夜，形成ABTS自由基储备液，该储备液在室温、避光的条件下表现稳定，使用前用无水乙醇稀释成工作液，要求其在734nm波长下的吸光度为0.70±0.02。分别移取0.1ml不同浓度（0.15、0.3、0.6、1.2、2.4g/L）的样品溶液于10ml具塞试管中，向各管中加入4.9ml稀释后的ABTS溶液，混匀，30℃静置反应10min后在752nm下测定吸光度。以VC为对照品。其清除率的计算公式：清除率=（1-Ai/Ao）×100%。其中，Ai为样品与ABTS混合溶液的吸光度，Ao为ABTS溶液的吸光度。

3 结果与分析

3.1 清除DPPH自由基的试验结果 由图1可知，九牛胆五种提取物对DPPH自由基均具有一定的清除的能力，只有甲醇提取物的清除能力最接近VC。在所试验的浓度范围内，水和氯仿提取物清除DPPH自由基的作用未达到50%；甲醇、乙醇和乙酸乙酯对DPPH自由基的清除率达50%时，其浓度（IC50）分别为0.61g/L、0.65g/L和1.63g/L。五种提取物对DPPH自由基的清除的能力顺序为：甲醇提取物>乙醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>水提取物。

3.2 清除羟基自由基的试验结果 由图2可知，九牛胆五种提取物对羟基自由基均具有一定的清除的能力。其清除的能力顺序为：甲醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醇提取物>水提取物。在所试验的浓度范围内，乙酸乙酯、甲醇和氯仿提取物清除羟基自由基的作用均可达到50%，其IC50分别为0.41g/L、0.43g/L和1.82g/L。

3.3 清除ABTS自由基的试验结果 由图3可知，九牛胆五种提取物对ABTS自由基均具有一定的清除的能力，但在所试验的浓度范围内，清除能力都较弱，未有一种提取物能达到50%的清除能力。

4 讨论

研究以甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、水等为溶剂分别对九牛胆进行提取得到相应的提取物，对其进行体外抗氧化活性研究。实验结果表明，九牛胆不同溶剂提取物对三种自由基均具有一定清除作用，其中九牛胆甲醇提取物对自由基的清除能力最强，成分预试表明其主要含生物碱类物质，提示九牛胆甲醇提取物是一种较好的天然抗氧化剂。为进一步开发九牛胆资源提供了一定的参考。

参考文献

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（收稿日期：2016.4.20）