正交试验优选丹芍通络片的提取工艺

陕西省咸阳市渭城区食品药品监督管理局 庞 瑞 （咸阳 702000）

丹芍通络片是由丹参、赤芍、制何首乌、山楂、葛根、郁金、三七等药物组成的中药复方制剂，具有活血化瘀、散结通脉之功，用于冠心病、心绞痛的治疗。其中丹参、赤芍、制何首乌、山楂、葛根五味药材采用水提取的工艺。为了有效控制提取工艺，本文将采取正交试验法，以丹酚酸B、芍药苷含量结合干膏得率为评价指标，优选水提取工艺条件。

1 仪器与试药

1.1 试药 丹参、赤芍、制何首乌、山楂、葛根等中药均购自陕西省药材公司，经检验均符合《中国药典》2010年版一部的规定;［1］丹酚酸 B对照品 （批号 111562－201110，供含量测定用）;芍药苷对照品 （中国药品生物制品检定所，批号:110736－200833，供含量测定用）均购自中国药品生物制品检定所。所用化学试剂为分析纯 （天津富宇化学试剂厂）、液相用试剂为色谱纯 （美国Fisher scintific）、水为娃哈哈纯净水 （杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 仪器 高效液相色谱仪 ［Lab Alliance型恒流泵;Waters966二极管阵列检测器，活德国际贸易 （上海）有限公司;Millennium 32色谱工作站］、C18色谱柱 （Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超声波清洗机 （H66025T）、TGL－16G离心机 （上海安亭科学仪器厂）、HCTP11B10托盘药物天平 （北京市宣武区天平厂）、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）。

2 方法与结果

2.1 提取工艺正交设计 为了确定最佳的提取参数，拟采用正交试验对提取工艺中所涉及的条件进行优选，通常情况下:加水量、提取时间、提取次数对提取结果影响较大，因此，以加水量、提取时间、提取次数作为影响因素，各选择3个水平，以L9（34）表安排试验，筛选最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

表1 因素水平表

2.2 评价指标的确定 丹参、赤芍为方中君药，丹酚酸B、芍药苷为其主要有效成分，且其含量测定有成熟方法，因此选择以丹酚酸B、芍药苷的含量并结合干膏得率作为评价指标。

2.3 样品溶液的制备 按处方比例量称取提取工艺部分的药材 （丹参、赤芍、制何首乌、山楂、葛根）102 g，共9份，按正交实验表下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。

2.4 出膏率测定方法 取各正交试验号浓缩液100 mL，于干燥蒸发皿中水浴蒸干，80℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，称重，计算出膏率。

2.5 含量测定

2.5.1 丹酚酸B含量测定［2－3］

2.5.1.1 色谱条件:色谱柱:C18色谱柱 （Diamosil 4.6×250 mm，5μm）;流动相:乙腈－甲醇－ （甲酸︰水）［10︰30︰60（1︰59）］;流速1.0 mL/min;检测波长286 nm;柱温25℃;进样量10μL。

2.5.1.2 对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.152 6mg的溶液，摇匀，即得。

2.5.1.3 供试品溶液的制备:分别精密吸取各提取液7.5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜 （0.45μm）滤过，即得。

2.5.1.4 测定法:分别吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入色谱仪，测定并计算。

2.5.2 芍药苷含量测定［4－5］

2.5.2.1 色谱条件:色谱柱:C18色谱柱 （Diamosil4.6×250 mm，5μm）;流动相:甲醇－水 （30:70）;流速1.0 mL/min;检测波长230 nm;柱温25℃;进样量10μL。

2.5.2.2 对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.052 6mg的溶液，摇匀，即得。

2.5.2.3 供试品溶液的制备:分别精密吸取各提取液7.5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜 （0.45μm）滤过，即得。

2.5.2.4 测定法:分别精密吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入色谱仪，测定并计算。

2.6 结果及分析 正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 L9（34）正交试验表及结果

表3 方差分析表

试验结果:由正交试验结果以及方差分析结果综合考虑，最佳工艺为A3B2C3。即:加12倍量水煎煮提取3次，每次1.5 h。

2.7 验证试验 按处方量称取各药材共102 g，共3份，按照所选提取条件试验，并测定丹酚酸B、芍药苷的含量以及干膏得率。结果见表4。

表4 验证试验结果

3次验证试验表明，检测指标接近或者高于正交表中最优值，说明优选的提取条件基本可行。

3 讨论

3.1 在对提取工艺条件进行优选时，我们同时考察了丹酚酸B、芍药苷的含量以及干膏得率，这比采取单一指标对提取工艺进行评价更加科学和合理。

3.2 根据本实验优选的最佳工艺，经3批验证，结果产品质量稳定，适合工业化大生产。

［1］ 国家药典委员会.中国药典一部［S］.北京:人民卫生出版社，2010.29－312

［2］ 江川，黄玉芳，邓美珠.HPLC法测定康达心口服液中丹酚酸B的含量［J］．海峡药学，2010，22（9）:75－76

［3］ 刘元，莫海涛，宋志钊，等.HPLC法测定千斤脑康宁胶囊中丹酚酸 B的含量 ［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16（4）:37－38

［4］ 侯林中，裴玉书，张熙洁，等.HPLC法测定宽心口服液中芍药苷的含量［J］．中国药房，2011，22（31）:2 933－2 934

［5］ 郑建锋，郑阿利，盖轲.HPLC法测定冠心康颗粒中芍药苷的含量［J］．中国药事，2011，25（4）:377－381

（2012－05－28 收稿）