高效液相色谱法测定妇科千金分散片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量

许 宁 ，廖亚琴 ，李喜平

(1．浙江省衢州市人民医院，浙江 衢州 324000; 2．浙江省衢州市衢江区人民医院，浙江 衢州 324000;3．浙江天昊药业有限公司，浙江 衢州 324002)

妇科千金分散片是由穿心莲、千斤拔、金樱根、当归、鸡血藤等组成的复方制剂，是按中药、天然药物注册分类第八类的要求研制的新药，具有清热除湿、益气化瘀之功效，临床上用于带下病、小腹疼痛、腰骶酸痛、神疲乏力及慢性盆腔炎、子宫内膜炎、慢性宫颈炎见上述证候者。其中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯等二萜内酯类[1]为妇科千斤分散片的有效成分之一，笔者建立了穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量测定，并进行方法学验证，现报道如下。

1 仪器与试药

UV－2100型紫外－可见分光光度计(Shimadzu公司);2F－I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);Waters2690－996系列高效液相色谱仪。穿心莲内酯对照品(含量测定用，批号为0797－200105)，脱水穿心莲内酯对照品(含量测定用，批号为110854－200305);妇科千金分散片，缺味样品(规格:0．7 g/片，批号为040601，浙江天昊药业有限公司);甲醇(优级纯，北京化工厂)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果[2]

2．1 色谱条件

色谱柱:Shimadzu VP－ODS柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(52∶48);检测波长:穿心莲内酯225 nm，脱水穿心莲内酯254 nm;流速:1．0 mL/min;柱温:30℃;理论板数按穿心莲内酯计算不低于3 000。高效液相色谱图见图1和图2。

2．2 溶液制备

精密称取穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含200．4 μg的溶液，即得对照品溶液;精密称取脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含117．2 μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下供试品，精密称定，取适量置容量瓶中，加甲醇，超声处理20 min，取出，放冷。加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。取除穿心莲外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺穿心莲的阴性样品，按样品测定项下样品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:精密量取穿心莲内酯对照品溶液(200．40 μg/mL)适量，加甲醇稀释配制成质量浓度为 20．04，60．12，100．20，140．14，200．40 μg/mL 的溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积Y，根据最小二乘法计算，以进样量X(μg)为横坐标、峰面积Y为纵坐标，回归方程为Y=15 283X+10 424，r=0．999 9，线性范围为0．200 4 ～2．040 0 μg。精密量取脱水穿心莲内酯对照品溶液(117．2 μg/mL)适量，加甲醇稀释配制成质量浓度为 11．72，23．44，35．16，58．60，70．32 μg/mL 的溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积Y，根据最小二乘法计算，以进样量X(μg)为横坐标、峰面积Y为纵坐标，回归方程为Y=21 349X+416．3，r=0．999 9，线性范围 0．117 2 ～0．702 4 μg。

精密度试验:取对照品溶液，按拟订的色谱条件，分别重复进样6次，测定峰面积。结果穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的RSD分别为0．16%和0．02%。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，4，8，12，24 h 时进样，测定峰面积。结果穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的RSD分别为 0．15%和 0．31%。

图1 高效液相色谱图

重现性试验:取同一批样品6份，按拟订的色谱条件测定。计算得穿心莲内酯的含量为2．02 mg/g，RSD=0．40%;脱水穿心莲内酯的含量为 0．45 mg/g，RSD=1．99%。

图2 高效液相色谱图

加样回收试验:取已知含量样品9份，各精密加入对照品适量，按拟订的色谱条件测定，分别计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2．4 样品含量测定

照2．2项下方法制备溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算即得。批号分别为 040601，040602，040603，040604 的样品含量分别为 1．72，1．74，1．69，1．73 mg/片。

3 讨论

为保证供试品中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯提取充分，分别对提取溶剂和提取时间进行了考察。结果以甲醇作为提取溶剂，超声时间20 min较佳。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯为穿心莲的主要成分，而穿心莲为方中的君药，其含量的高低与产品疗效有密切关系，故作为定量指标较适宜。本法简便、灵敏度高，可达控制产品质量的目的。

[1]肖树雄，王晓钰，郑剑红．穿心莲的成分及其分析方法研究概况[J]．中国药师，2002，5(11):693 －694．

[2]张嘉乐，罗晖明．妇科千斤微丸质量标准研究[J]．海峡医药，2006，18(1):73 －75．