高效和超高效液相色谱法测定乐脉丸中丹酚酸B含量的比较

王 慧，况 刚，封海霞，徐小利，袁祥慧，邓开英

(重庆市食品药品检验所，重庆 400015)

乐脉丸由丹参、川芎、赤芍、红花、香附、木香、山楂等中药组方，具有行气活血、化瘀通脉的功效。笔者分别采用超高效液相色谱(UPIC)法和高效液相色谱(HPLC)法对乐脉丸中丹酚酸B进行含量测定，并对测定结果进行比较，旨在为乐脉丸质量控制提供新方法。

1 仪器与试药

Waters Acqui－UPLC超高效液相色谱仪;岛津2010型高效液相色谱仪。乐脉丸(批号分别为 110101，110201，110202，康美保宁(四川)制药有限公司);丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111562－201110，供含量测定用);甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 HPLC 法[1]

2．1．1 色谱条件

色谱柱:迪马 C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －乙腈 －17%甲酸(27∶4∶69);流速:1．0 mL/min;检测波长:286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。

2．1．2 溶液制备

取本品装量差异项下的包衣小丸适量，研细，取约0．3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用75%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0．1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2．1．3 方法学考察

专属性试验:取按处方比例及制法制备缺丹参阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液，并依法进行测定，结果阴性对照品溶液无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取质量浓度为0．100 548 g/L的丹酚酸 B 对照品溶液 2，5，10，15，20，25 μL，进样，测定峰面积，以峰面积对进样量进行回归，得方程为Y=1 157 993X+823．9，r=0．999 5(n=6)。结果表明，丹酚酸 B 进样量在 0．201 10 ～2．513 70 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL。结果的RSD=0．2%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批号样品，按依法分别制备6份供试品溶液并测定丹酚酸B含量。结果的RSD=1．0%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h 时进样5 μL，测定丹酚酸B的峰面积。结果的RSD=0．4%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

回收率试验:取已知含量的样品(批号为110101，含量为16．94 mg/g)6份各约 0．15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，每份精密加入丹酚酸B对照品2．026 64 mg，按供试品溶液制备方法操作，测定丹酚酸B的含量，计算回收率。结果平均回收率为97．9% ，RSD为 0．4%(n=6)。

2．1．4 样品含量测定

取本品3批(批号分别为110101，110201，110202)，按含量测定方法进行测定，外标法计算供试品中丹酚酸B的含量，结果分别为 16．94，12．06，6．84 mg/g。

2．2 UPLC 法

2．2．1 色谱条件

色谱柱:Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm ×2．1 mm，1．7 μm);流动相:甲醇－乙腈－17%甲酸(20∶1∶79);流速:0．6 mL/min;进样量:1 μL;检测波长:286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。在此条件下，色谱图见图2。

图2 超高效液相色谱图

2．2．2 溶液制备

同2．1．2项下方法制备。

2．2．3 样品含量测定

取本品 3批(批号分别为 110101，110201，110202)，按含量测定方法进行测定，外标法计算供试品中丹酚酸B的含量，结果分别为 16．93，12．06，6．84 mg/g。

3 讨论

在HPLC法的基础上，考察了UPLC法不同比例的甲醇－乙腈－17%甲酸系统，结果表明，将甲醇－乙腈－17%甲酸(27∶4∶69)调整为甲醇－乙腈－17%甲酸(20∶1∶79)时，分离度及峰形均较好。本试验比较了UPLC法与HPLC两种方法的检测条件和检测结果，HPLC流速为1 mL/min，进样量为5 μL，主峰出峰时间为45 min，分析检测时间为55 min;UPLC流速为0．6 mL/min，进样量为1 μL，出峰时间约为1 min，样品检测时间2 min内完成。两种方法的检测结果无明显差异。将HPLC定量方法转换并优化为UPLC方法，在保证含量测定结果准确的前提下，提高了色谱峰的分离度，节省了分析时问，减少了溶剂损耗及废液处置费用，提高了分析效率。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:70－71．