急性白血病患儿外周血IL-17水平变化及意义

陈燕丽，曾意茹，陈福雄，吴丽萍，吴泽霖

(广州医学院第一附属医院，广州510120)

近20多年来，儿童急性白血病的完全缓解率和5年无病生存率已经得到明显提高，但因疾病本身和化疗所造成的免疫微环境的紊乱使得患儿病程中易出现各种感染，严重影响患儿的存活率。最新发现的辅助性T细胞(Th细胞)亚群中的Th17细胞，可通过分泌特征性细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在自身免疫性疾病、炎症、移植排斥反应及恶性肿瘤中发挥重要作用。目前已证实，在肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌等常见实体肿瘤患者外周血、癌组织中存在 Th17细胞及其分泌的IL-17，并且与肿瘤的发生发展相关，但其与白血病的关系研究较少。为此，本研究观察了急性白血病患儿外周血IL-17的水平变化。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011年5月～2012年4月在广州医学院第一附属医院住院的急性白血病患儿43例，男28例，女15例;年龄5个月～12岁。所有病例符合急性白血病的诊断标准［1］，其中急性淋巴细胞白血病33例，急性髓系白血病10例。采用相应的规范化治方案进行治疗。43例患儿中，化疗后15例尚未达到完全缓解(未缓解组)、28例已经达到完全缓解(缓解组)，化疗后正处于骨髓抑制期19例(骨髓抑制组)、已度过骨髓抑制期24例(非骨髓抑制组)。22例正常儿童作为对照组，男12例，女10例;年龄8个月～13岁;无肿瘤及自身免疫疾病史。1.2 IL-17检测方法 所有研究对象于清晨空腹抽取外周静脉血1～2 mL，肝素或EDTA抗凝。血液抽取后30 min内以1 000 r/min离心15 min，取其上层血浆，－80℃保存备检，避免反复冻融。采用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)。实验所需IL-17捕获微球B5，PE检测试剂，IL-17标准品，仪器设置微球A1、A9、F1、F9，PE仪器设置微球F1及PE阳性质控检测剂，相应的检测稀释剂及洗涤缓冲液，均购于BD公司;流式细胞仪型号为BDFACSCanto。在相应流式管中分别加入稀释好的标准品和待测样本、捕获微球、PE检测试剂，各50 μL/管，避光孵育，洗涤后每管加300 μL洗涤缓冲液重悬微球，上机检测(每个检测管上机前需震荡)。所得结果用CBA专门分析软件进行分析，可得到检测样本中IL-17的浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。多组计量资料比较用单因素方差分析，两组计量资料比较用t检验，两变量间的相关性分析用Peason相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

未缓解组、缓解组、骨髓抑制组和非骨髓抑制组IL-17分别为(7.45±2.77)、(9.73±1.95)、(8.06 ±3.13)、(9.62±2.16)pg/mL，与对照组的(12.53 ±4.63)pg/mL相比，P均＜0.05;缓解组与未缓解组相比，P＜0.05;骨髓抑制组与非骨髓抑制组相比，P＜0.05。

3 讨论

Harrington等［2］在研究自身免疫性疾病中发现一种可分泌IL-17的不同于Th1和Th2细胞的新型细胞——Th17细胞，它的分化发育具有独特的机制。在TGF-β和IL-6同时存在时，经由STAT-3通路活化 Th细胞型细胞的特异性转录因子RORγt，诱导初始细胞分化为Th17细胞，并分泌特征性细胞因子IL-17［3］。Th17细胞与介导免疫耐受的Treg细胞都来源于初始T细胞，两者的功能和分化过程相互拮抗，两者保持平衡有利于机体免疫稳定状态的维持。低浓度的TGF-β和IL-6协同作用能诱导RORγt的产生，促进Th17细胞的分化，而高浓度的TGF-β能够上调Foxp3的表达，促进Treg细胞的分化。细胞因子调节的RORγt/Foxp3平衡决定了初始T细胞受抗原刺激后向Th17细胞或Treg细胞方向分化［4］。STAT5促进Treg细胞的发育和功能维持，抑制Th17细胞的分化;而STAT3则抑制Treg细胞的发育，促进Th17细胞的分化［5］。研究［6］证实，Treg细胞可以抑制、识别自身肿瘤细胞的效应细胞，在介导机体肿瘤免疫耐受中起重要作用，Treg细胞的数量与肿瘤的预后呈负相关。Wang等［7］发现，急性白血病患者Treg细胞占外周血T细胞的比例较正常对照组明显增加，而且与患者的病程、疾病的预后有明显相关性。Wu等［8］研究发现，急性白血病患者外周血中Th17细胞数量高于健康志愿者，经治疗后达到完全缓解的患者其Th17细胞数量显著下降，在评估急性白血病化疗疗效、化疗后机体的免疫状态有重要的参考价值。

本研究发现，急性白血病患儿外周血中IL-17水平下降，且化疗后未缓解者和化疗后骨髓抑制者水平更低，都低于健康对照者，与文献［9］报道相符。提示Th17细胞可能通过分泌IL-17参与了儿童急性白血病的发生及病情发展。未缓解患者体内肿瘤负荷高，Treg细胞、Th1细胞和Th2细胞等分泌抑制Th17细胞分化的细胞因子的作用更强，而白血病患者由于经过化疗，机体免疫系统遭到破坏，因此初始T细胞数量减少，所分化的Th17细胞也少;当白血病经过化疗达到缓解时，虽然Th17细胞的功能有所恢复，但上述抑制Th17的细胞功能也有所恢复，综合作用的结果则抵消了 Th17数量和功能的提高［10］，故外周血中IL-17水平仍然低于健康对照者。另外，IL-17是Th17细胞分泌的功能性细胞因子，可以诱导许多促炎因子和趋化因子表达，与多种免疫应答性疾病相关，可清除体内存在的病原体如细菌、真菌等。苏梅芳等［11］研究认为，IL-17可作为白血病患者的感染风险判别指标。然而，在急性白血病患儿外周血中，与Th1和Th2类细胞因子相比，IL-17的表达水平较低，若利用传统的ELISA方法来检测，需经过体外刺激外周血单个核细胞后收集上清液来提高检出率。CBA是在流式细胞术基础上发展起来的液相多重蛋白定量技术，具有敏感度高、快速、精确、所需标本量少且可同时检测多个细胞因子及获得多个参数等特点，并且直接取患者血浆作为检测标本而不需要经过体外刺激单个核细胞后取培养上清液，所得结果更能反映体内真实水平。通过CBA检测技术可快速、准确检测白血病患儿血浆中低水平的IL-17，为进一步研究Th17细胞及其分泌的特征性细胞因子IL-17在肿瘤免疫机制中的作用提供依据。

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