抑癌基因PTEN与凋亡抑制因子Livin在乳腺癌中的表达及相关性

陈亮 戴殿禄 崔国忠 李杰 杨猛

乳腺癌的发生及发展过程复杂，其中一个重要因素是相关癌基因的激活和抑癌基因的失活。继p53基因之后，新发现的抑癌基因PTEN是在人类肿瘤细胞中缺失和突变率最高的抑癌基因，它的缺失和突变与人类恶性肿瘤的发生普遍相关。而组织细胞凋亡失衡，细胞凋亡被抑制是肿瘤发生的另一重要机制。Livin蛋白是近些年发现的细胞内凋亡抑制蛋白，而PTEN则能起到诱导细胞凋亡的作用［1］。本课题通过检测PTEN与Livin在乳腺癌中的表达及两者的相关性，以探讨乳腺癌的发生规律，阐述这些指标对乳腺癌诊断及预后的重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2000年8月至2001年5月我院经手术治疗及病理材料齐全的50例乳腺癌患者的蜡块，患者均为女性;年龄28～78岁，平均年龄54.6岁;组织学分级:Ⅰ级15例，Ⅱ级26例，Ⅲ级9例;临床分期:Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期10例;腋下淋巴结转移者35例。并将收集到的20例癌旁非癌乳腺组织及10例正常乳腺组织作为对照组。

1.2 方法 免疫组化SP法，苏木精-伊红染色。以SP免疫组化试剂盒说明书为依据进行操作。PTEN及Livin单克隆抗体均为来源于美国UCL公司。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知PTEN、Livin阳性结肠癌组织作为阳性对照。

1.3 结果判定 PTEN、Livin蛋白为阳性以细胞浆出现棕黄色颗粒为特征。采取以每一切片中随机选取10个高倍镜视野及每个高倍镜视野计数100个细胞的方法判定。染色强度分为三等级:浅黄染1分，中度黄染2分，强度黄染3分;阳性细胞的百分率:阳性细胞≤5%0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分;将两者的结果综合分析:0分为阴性(－)，1～2为弱阳性(+)，3～4为中度阳性(++)，5～6为强阳性(+++);将PTEN和Livin蛋白的(－)、(+)组计为低表达组，将PTEN和Livin蛋白的(++)、(+++)组计为高表达组。

1.4 统计学分析 应用SPSS 16.0统计软件，计数资料采用χ2检验和Fisher’s检验，采用spearman等级相关分析进行两者相关性检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN与Livin蛋白在正常乳腺组织、癌旁组织及癌组织中的表达 PTEN在正常乳腺组织及癌旁组织中的阳性高表达率与在乳腺癌组织中的阳性高表达率仅为40.0%，前两者与后者比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。Livin在正常乳腺组织及癌旁组织中阳性高表达率与在乳腺癌组织中阳性高表达率比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表 1、2，图 1、2。

表1 PTEN蛋白在乳腺不同组织类型中的表达 例

表2 Livin蛋白在乳腺不同组织类型中的表达 例

图1 乳腺癌中Livin的阳性表达(SP×200)

图2 乳腺癌中PTEN的阴性表达(SP×200)

2.2 PTEN和Livin蛋白表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系 PTEN和Livin的表达均与组织学分级、临床分期及腋下淋巴结转移显著相关(P＜0.05)，PTEN和Livin的表达均与年龄、性别、肿瘤大小及远处转移无关(P＞0.05)。表3、4。

表3 PTEN蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系 例

表4 Livin蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系 例

2.3 PTEN与Livin在乳腺癌中表达的关系 PTEN低表达组中Livin高表达率为70.0%，而PTEN高表达组中Livin的高表达率仅仅为40.0%，两者呈负相关性(r=－0.298)。当PTEN表达率高时，Livin的表达程度低;而当PTEN表达率低时，Livin的表达程度升高。见表5。

表5 PTEN与Livin蛋白在乳腺癌中表达的关系 例

3 讨论

新发现的抑癌基因PTEN是继P53基因之后在人类肿瘤细胞中缺失和突变率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突变或缺失［2］，PTEN不但可抑制肿瘤细胞生长，而且能促进肿瘤细胞凋亡。

本研究结果显示:10例正常乳腺组织PTEN阳性率为100%，说明PTEN基因可能对于乳腺细胞正常功能的维持产生影响，并对乳腺细胞的正常新陈代谢、细胞分裂和增殖进行调控;癌旁乳腺组织PTEN阳性高表达率为90.0%，开始存在PTEN基因的少量缺失，乳腺细胞的正常功能因此受到影响，其潜在癌变的可能性增大;而乳腺癌中PTEN阳性高表达率为40.0%，提示PTEN蛋白表达在乳腺癌组织中呈现进一步的下降和减弱，可能是由于抑癌基因PTEN出现了进一步缺失和突变，从而引起癌变。据Vitolo等［3］研究报道，约在50%至75%的乳腺癌患者中出现了PTEN的表达缺失或PI3K的激活，说明PTEN的表达缺失在乳腺癌发生中具有重要作用。本研究结果还显示:PTEN蛋白表达水平与患者年龄和肿瘤大小无关，但与临床分期、组织学分级及腋下淋巴结转移呈负相关，提示随着PTEN蛋白丢失程度的增加，相应乳腺癌的恶性程度及侵袭能力也加强，浸润和转移的倾向更大。可能是随着PTEN基因的逐渐缺失，PTEN抑制肿瘤细胞生长及促进肿瘤细胞凋亡的能力进一步减弱，并逐渐失去了调控能力。这与Ressel等［4］在研究动物乳腺癌时发现PTEN蛋白的丢失随肿瘤分级及分期增加而增加相一致。由此可以得出，PTEN的低表达可能参与了是乳腺癌恶性演变过程。

Livin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子之一，其为IAPs家族的新成员，目前已是国际研究的热点。据Nedelcu等［5］报道，Livin蛋白的过度激活及表达存在于众多的恶性肿瘤之中，如膀胱癌、恶性黑色素瘤、神经母细胞瘤及卵巢癌等。而王亚利等［6］报道，在乳腺良性组织、乳腺不典型增生、乳腺导管内原位癌和乳腺浸润性癌4组病例中Livin表达分别为1.0%，28.5%，57.1%，71.1%。本组结果也显示，Livin 蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率58.0%，显著高于乳腺癌旁组织(40.0%)及正常组织(0.0%)，说明乳腺癌组织中不仅存在Livin的异常表达，而且随着病理类型恶性度的逐渐加重，其表达逐渐升高，提示Livin可能与乳腺癌的发生发展有关。本组还显示:Livin蛋白表达与乳腺癌的临床分期、组织学分级及腋下淋巴结转移有相关性，而与肿瘤大小和年龄无关。说明Livin的表达在乳腺癌的不同发展阶段差异明显，乳腺癌的进展越严重，病情越晚，其表达越高，提示随着Livin表达增加，其凋亡抑制作用越强，可能对乳腺癌细胞的凋亡产生了巨大的抑制作用，从而促进了乳腺癌的进一步发展，因此Livin可能是乳腺癌恶性演变的另一重要标志。

在本研究中还显示PTEN和Livin的表达均与远处转移无关，同时又提示远处转移者较未远处转移者比较，PTEN的缺失更加严重，而远处转移者Livin的异常表达又明显高于未远处转移者，尽管差异无统计学意义，但并不能说明PTEN和Livin的表达一定与远处转移无关，这可能与研究的样本数太少有一定关系，造成结果产生偏差，如果增加样本量，有可能获得存在差异的结果。

50例乳腺癌中PTEN与Livin蛋白表达呈负相关，这与倪建华等［7］在研究肾细胞癌时发现PTEN蛋白的表达与Livin蛋白表达呈负相关相一致。PTEN低表达的乳腺癌患者中Livin呈现高表达，PTEN高表达的乳腺癌患者中Livin呈现低表达，说明PTEN蛋白丢失及Livin的异常高表达共同参与了乳腺癌发生发展过程，提示预后不良。但两者是独立的不相关联的通路还是存在着基因调控关系，目前尚不明确。

综上所述，联合检测PTEN与Livin这两项指标对判断乳腺癌的发生发展、侵袭转移及预后可能具有重要的临床意义。

1 刘红霞，王蕾，李兰梅.PTEN蛋白与雌激素受体α亚型在子宫内膜癌中的表达及意义.河北医药，2010，32:42-43.

2 Liu JL，Mao Z，La Fortune A，et al.Cell cycle-dependent nuclear export of phosphatase and tensin homologue tumor suppressor is regulated by the phosphoinositide－3-kinase signaling cascade.Cancer Res，2007，67:11054-11063.

3 Vitolo MI，Weiss MB，Szmacinski M，et al.Deletion of PTEN Promotes Tumorigenic Signaling，Resistance to Anoikis，and Altered Response to Chemotherapeutic Agents in Human Mammary Epithelial Cells.Cancer Res，2009，69:8275-8283.

4 Ressel L，Millanta F，Caleri E，et al.Reduced PTEN Protein Expression and Its Prognostic Implications in Canine and Feline Mammary Tumors.Veterinary Pathology，2009，46:860-868.

5 Nedelcu T，Kubista B，Koller A，et al.Livin and Bcl-2 expression in highgrade osteosarcoma.Cancer Res Clin Oncol，2008，134:237-244.

6 王亚利，王中卫，王西京.Livin、survivin在乳腺癌中的表达及其与caspase-3和临床病理的相关性.西安交通大学学报，2009，30:466-469.

7 倪建华，辛军，伍伯聪.Livin和PTEN在肾细胞癌中的表达及其临床意义.实用癌症杂志，2011，26:42-44.