夏枯草提取物的抗氧化活性

张 淼，董宝婧，苗 芳，周 乐

(1.西北农林科技大学生命科学学院，陕西 杨凌712100； 2.西北农林科技大学农学院，陕西 杨凌712100； 3.西北农林科技大学理学院，陕西 杨凌712100)

自由基可攻击生命大分子造成组织损伤，从而导致疾病与衰老。所以，寻找适当的外源性抗氧化剂，清除体内自由基，对治疗疾病和保护人体健康大有裨益。近年来，研发高效、低毒的天然抗氧化剂和抗衰老保健品，已成为新的研究热点之一[1]。

1 材料与方法

1.1试验材料 2010年7月底，在秦岭采集夏枯草全草，阴干后,粉碎,装袋备用。

1.2夏枯草不同溶剂提取物的制备 取夏枯草全草粗粉40 g，以70%乙醇，料液比为1∶20，45 ℃条件下进行超声提取2 h，提取3次，合并提取液，减压浓缩。加石油醚去除叶绿素后，依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，每级重复3次，得到乙酸乙酯、正丁醇和水提取物。

1.3夏枯草不同溶剂提取物抗氧化活性测定 抗氧化活性测定所用的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)购于上海阿拉丁试剂有限公司；酚嗪硫酸甲酯(PMS)、1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)购于美国Sigma公司；氮蓝四唑(NBT)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)购于国药集团化学试剂有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.4数据处理 采用SPSS V13.0和Excel软件对数据进行处理分析。

2 结果与分析

2.1夏枯草不同溶剂提取物对DPPH·的清除活性 夏枯草不同溶剂提取物对DPPH·均有清除能力，且在一定浓度范围内清除能力与浓度呈正相关。当提取物浓度达到一定值后，随着浓度的增加，对DPPH·的清除活性增加逐渐缓慢或趋于平缓。夏枯草3种溶剂提取物相比较，乙酸乙酯提取物对DPPH·的清除活性最强(IC50=0.154 mg·mL-1)，强于阳性对照BHT提取物(IC50=0.311 mg·mL-1)，正丁醇提取物的清除能力弱于乙酸乙酯提取物(IC50=0.204 mg·mL-1)，但也强于阳性对照BHT提取物，水提物清除活性(IC50=0.402 mg·mL-1)略弱于BHT提取物(图1)。夏枯草3种溶剂提取物及阳性对照BHT清除DPPH·的能力由强到弱依次为乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>BHT提取物>水提取物。

2.2夏枯草不同溶剂提取物对·OH的清除活性 夏枯草不同溶剂提取物都具有清除·OH的活性，且清除能力与浓度呈正相关。在正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和BHT提取物中，乙酸乙酯提取物的清除能力最强，在浓度为0.6 mg·mL-1时清除活性就已达到88.37%，正丁醇提取物活性稍差于乙酸乙酯提取物，在浓度为0.7 mg·mL-1时清除活性达到85.24%(图2)，而水提物对·OH的清除活性较弱，在0.3～0.7 mg·mL-1范围内清除活性不及10%(图2)。夏枯草3种溶剂提取物及阳性对照BHT清除·OH的活性由强到弱依次为BHT提取物(IC50=0.266 mg·mL-1)>乙酸乙酯提取物(IC50=0.406 mg·mL-1)>正丁醇提取物(IC50=0.538 mg·mL-1)>水提物(IC50=1.244 mg·mL-1)。

图1 夏枯草不同溶剂提取物对DPPH·清除活性Fig.1 DPPH·radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

图2 夏枯草不同溶剂提取物对·OH的清除活性Fig.2 Hydroxyl radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

图3 夏枯草不同溶剂提取物对的清除活性Fig.3 Superoxide radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

2.4夏枯草不同溶剂提取物的还原力 夏枯草不同溶剂提取物均具有还原力，且与提取物浓度呈剂量依赖关系。3种提取物相比较，乙酸乙酯提取物的还原能力最强，正丁醇提取物次之,水提物较差。各提取物还原力均低于阳性对照BHT提取物。夏枯草3种溶剂提取物及阳性对照BHT提取物还原力由强到弱依次为BHT提取物>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>水提物(图4)。

图4 夏枯草不同溶剂提取物的还原力Fig.4 Reducing power of different extracts of Prunella vulgaris

3 讨论

本研究采用4种评价方法对夏枯草不同溶剂提取物抗氧化活性进行了分析。结果表明，夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性。但由于抗氧化反应机制不同，不同评价方法中各提取物可能表现出不同的抗氧化活性。Su等[13]采用多方法体系对4种草药提取物的抗氧化活性进行评估发现，各方法测定结果有所差异，这种差异性主要表现在提取物具有良好的DPPH·清除活性和亚铁离子螯合活性，但还原能力较差。Chen等[14]从黑灵芝(Ganodermaatrum)子实体中提取并纯化出一种活性多糖，用多体系对其抗氧化活性进行测定，发现此种多糖在不同体系中均表现较高活性，从而证明其有显著抗氧化活性。马小媛和钱卫平[15]认为，单一的检测方法不能够综合评价某种物质的抗氧化能力。可见，有必要采用多体系综合评价有效物质的抗氧化活性。综合本研究各测定结果，夏枯草不同溶剂提取物在一定浓度范围内，其抗氧化活性与有效物质浓度呈正相关，但当提取物达到一定浓度后，便不再表现出更高的抗氧化能力，这是由于自由基消耗殆尽或反应趋于平衡。所以，抗氧化体系中抗氧化剂浓度的选用应考虑到实际条件和底物浓度，参照生物体内自由基浓度范围，使评价更有实际意义。

夏枯草乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物的抗氧化活性较强，尤其是乙酸乙酯提取物，这可能与夏枯草中黄酮类物质有关。有国内外学者研究发现，黄酮类物质具有很强的抗氧化能力。Kodama等[16]认为，黄酮类化合物儿茶素是绿茶中最主要的抗氧化成分。吴晓宁等[17]研究表明，乌蕨(Stenolomachusanum)黄酮类物质具有显著的还原力、抗脂质体氧化和清除自由基等作用。Bergman等[18]对菠菜(Spinaciaoleracea)水提物中的黄酮类物质进行研究分析，证实它有比一般人工抗氧化剂强的抗氧化能力。此外，王川等[19]证实夏枯草黄酮对猪油有抗氧化作用。但目前对夏枯草抗氧化物质研究较少，尚不能确定其种类及结构，需要进一步对各部分的成分进行深入研究。

夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性，加之植物药的天然低毒性，有开发为天然抗氧化剂和抗衰老保健品的潜力，具有广泛的发展前景。

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