非小细胞肺癌患者癌组织中的ERCC1、EGFR、K-ras表达与其预后的关系

张晶晶，吕喜英，毛淑芳，李青山

(1承德医学院附属医院，河北承德067000;2承德医学院预防医学教研室)

近年来，肺癌发病率持续上升，其病死率居癌症之首，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占85%。目前，术后化疗是NSCLC综合治疗的主要手段之一，铂类联合第三代药物的标准方案有效率仅为25% ～35%，患者总生存率仅提高约4.1%［1］。有研究表明，切除修复交叉互补基因1(ERCC1)与顺铂(DDP)耐药有关;对耐DDP的NSCLC患者检测表皮生长因子受体(EGFR)和原癌基因Kirsten-Rous肉瘤病毒(K-ras)基因突变，选择性给予EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)分子靶向治疗，可提高其疗效，延长生存时间。本研究采用免疫组化法检测了97例NSCLC患者癌组织中的ERCC1、EGFR、K-ras蛋白表达，旨在探讨三者与NSCLC患者预后的关系，以指导其个体化治疗。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择承德医学院附属医院胸外科2008年6月～2010年12月住院的NSCLC手术患者97例，男72例、女25例，年龄38～80岁、中位年龄58岁，患者术后恢复较好，KPS评分＞70分。术后用铂二联(DDP+依托泊苷/吉西他滨/长春瑞滨)方案化疗4个疗程50例(化疗组)，未化疗47例(非化疗组)。取97例患者的癌组织蜡块作为观察组，其中30例患者的癌旁组织蜡块作为对照组。自入院当日至2011年11月，采用门诊复查、电话或信件结合的方式进行随访，随访时间5～41个月、中位随访时间19个月。生存时间从手术日到随访截止日(或复发、转移而死亡日)。

1.2 检测方法 取观察组、对照组组织蜡块，切片厚5 μm，用抗原修复，以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照;滴加小鼠抗人ERCC1、EGFR、K-ras一抗(1∶50、1∶100工作液)、二抗，行DAB显色、苏木素复染封片。采用免疫组化法检测各组ERCC1、EGFR、K-ras表达，ERCC1、EGFR、K-ras、MaxVision免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。每张切片随机观察5个高倍(×400)视野，每个视野计数100个肿瘤细胞。①按显色强度分为4级:阴性(不着色)、弱阳性(淡黄色)、阳性(棕黄色)、强阳性(棕褐色)，分别计0、1、2、3分;②阳性肿瘤细胞百分比:无:0;1%～9%:0.1;10%～50%: 0.5;＞50%:1.0。以显色强度评分与阳性肿瘤细胞百分比的乘积(半定量H值)作为蛋白表达相对强度，以中位H值判断结果，ERCC1、EGFR的中位H值≥1.5为阳性，＜1.5为阴性;K-ras的中位H值≥2.0为阳性，＜2.0为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件，用χ2检验及确切概率法分析ERCC1、EGFR、K-ras阳性率与 NSCLC患者临床生物学特征的关系，用Spearman等级相关分析分析 ERCC1、EGFR、K-ras的相关性。采用Kaplan-Meier法行生存分析，组间比较用Log-Rank检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组、对照组ERCC1、EGFR、K-ras表达比较 观察组ERCC1阳性表达于肿瘤胞核，阳性率为29.9%(29/97);EGFR阳性表达于肿瘤胞膜和胞质，阳性率为22.7%(22/97);K-ras阳性表达于肿瘤胞膜，部分表达于胞质，阳性率为32.0%(31/ 97)。对照组ERCC1、EGFR、K-ras阳性率分别为0、3.3%(10/30)、0。两组ERCC1、EGFR、K-ras阳性率比较，P均＜0.05。

2.2 NSCLC患者癌组织ERCC1、EGFR、K-ras表达与其生物学特征的关系 见表1。

2.3 ERCC1、EGFR、K-ras的相关性 ERCC1与EGFR、K-ras无明显相关性。EGFR、K-ras均阳性表达0例，均阴性表达44例;EGFR阳性而K-ras阴性表达22例，EGFR阴性而K-ras阳性表达31例;EGFR与K-ras呈负相关(r=－0.371，P＜0.01)。

表1 NSCLC患者癌组织ERCC1、EGFR、K-ras表达与其生物学特征的关系［例(%)］

2.4 ERCC1、EGFR、K-ras表达与患者的生存时间

化疗组ERCC1阳性、阴性患者的生存时间分别为5～33、9～42个月，非化疗组ERCC1阳性为8～42个月;EGFR阳性而K-ras阴性、EGFR阴性而K-ras阳性患者分别为7～42、5～30个月。Kaplan-Meier分析显示，化疗组ERCC1阳性者的生存时间有低于阴性者的趋势(P＞0.05)，非化疗组ERCC1阳性者的生存时间长于化疗组ERCC1阳性者(P＜0.05); EGFR阳性而K-ras阴性者的生存时间长于EGFR阴性而K-ras阳性者(P＜0.05)。

3 讨论

ERCC1在核苷酸切除修复系统(NER)中起限速或调节作用［1］。ERCC1过表达通过NER途径可使停滞在G2/M期的损伤DNA迅速修复，导致肿瘤细胞对铂类耐药。本研究97例NSCLC患者的ERCCl阳性率为29.9%，略低于国外报道［2］;其中化疗组ERCC1阳性者生存时间低于阴性者，非化疗组ERCC1阳性者生存时间长于化疗组。ERCC1对NSCLC术后生存有双重效应，ERCC1高表达可减少肿瘤复发危险，亦可致DDP耐药;Ⅰ期患者术后ERCC1高表达主要为保护作用，而Ⅱ～Ⅲ期高表达主要导致铂类耐药或抵抗。ERCC1高表达提示NSCLC患者的生存结果更佳［2，3］，但对铂化疗效果不佳［2，4］，其原因主要是对一线化疗药物耐药和(或)严重的化疗毒副反应。

EGFR-TKI(包括吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼)的NSCLC分子靶向治疗是肺癌治疗史上重大的突破。EGFR突变状态未知时，亚裔非吸烟女性肺腺癌患者是 TKI治疗的优势人群;IPASS、SLCG等［5，6］大型临床研究显示，EGFR突变的高选择人群TIK一线治疗的有效率为70.6%～74.5%，中位生存期为10.6～14.0个月。本研究显示，NSCLC患者EGFR阳性率为22.7%，其在女性、腺癌患者中高表达，而男、女性腺癌患者的EGFR表达无统计学差异，其原因可能与样本较少、不能准确反映真实情况有关。K-ras基因突变是EGFR-TKI原发性耐药的重要预测指标，是靶向治疗的负性预测因子。本研究显示，NSCLC患者K-ras阳性率为32.0%，其与吸烟的腺癌患者(尤其是细支气管肺泡癌)密切相关，与文献报道［7］一致;且无论化疗与否，EGFR阳性而K-ras阴性者的生存时间均明显长于EGFR阴性而 K-ras阳性者。表明 K-ras突变不仅预示NSCLC患者的生存结果较差，还提示其对铂类/长春瑞滨化疗无效［8，9］。

近年研究发现，EGFR、K-ras突变在同一肺肿瘤中互相排斥(几乎不会同时出现)，二者呈负相关。对EGFR阴性而K-ras阳性的NSCLC患者，通常提示其对TKI的疗效甚差或无效，预后不良。因此，检测ERCC1高表达、行耐铂类化疗患者的EGFR、K-ras突变状态，可指导其有效的EGFR-TKI靶向治疗。本研究发现，ERCC1与EGFR、K-ras无明显相关性，但EGFR与K-ras呈负相关。提示对NSCLC术后患者常规检测ERCC1、EGFR、K-ras基因及蛋白突变状态，有利于指导其个体化治疗。

综上所述，ERCC1是预测NSCLC疗效的生物标志物，也是判定患者生存预后的指标;EGFR基因突变是TKI治疗必要而充分的预测指标;K-ras基因突变是生存预后指标。三者可影响化疗药物及方案的选择，对制定个体化治疗有重要意义。

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