survivin在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

聂祝青 田小林 朱小宝

（桂林医学院附属医院胃肠外科 广西桂林 541001）

结直肠癌是常见恶性肿瘤，发病率以平均每年4.2%的速度上升［1］。研究发现，凋亡抑制蛋白家族成员中，survivin是最强的凋亡抑制因子［2］，其选择性表达于癌组织中，且在正常组织中几乎不表达［3］。国内外针对此因子与结直肠癌物学特性及临床特点之间的关系的研究较多，绝大部分是运用免疫组织化学方法，其结论尚不一致。本次实验旨在通过检测survivin m RNA在结直肠癌组织中的表达情况，探讨其与结直肠癌发生、发展及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料 标本取自2010年6月至2011年6月在桂林医学院附属医院住院行根治性手术的60例原发性结直肠癌患者，所有标本均有明确的病理诊断结果，术前均未经化疗、放疗或免疫治疗。其中男27例，女33例；结肠癌35例，直肠癌25例；低分化癌24例，中高分化癌36例；有淋巴结转移29例，无淋巴结转移31例；Dukes A期12例，B期19例，C期26例，D期3例。并取40例患者癌旁正常组织（距肿瘤边缘10cm以上）各1块。取下组织后用DEPC水处理，并立即置于液氮中冷冻，再转移至－80℃低温冰箱中保存。

1.2 试剂 RNA提取试剂盒和反转录试剂盒购自北京艾德莱生物科技有限公司，RT-PCR检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.3 引物的设计及合成 参见表1。

表1 引物序列

1.4 总RNA的提取 从－80℃冰箱取出组织，约50mg，在液氮中快速研磨成粉末状，再转移至EP管中，按RNA抽提试剂盒说明抽提总RNA。取部分RNA测定OD值，检测其浓度。并行RNA琼脂糖凝胶电泳，以检测RNA纯度及完整性。100例标本经检测后，OD值均在1.8以上。可以进行下步实验。

1.5 cDNA合成 取1ug总RNA，以 Oligo（d T）18为引物，按反转录试剂盒说明在TUREEscript HRTase作用下合成cDNA。

1.6 survivin基因及β-actin的扩增 参见表2。

表2 survivin扩增条件

1.7 统计学分析 应用SPSS17.0统计软件对结果进行方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 结直肠癌组织与正常组织survivin m RNA表达情况 将扩增产物经琼脂糖电泳，经荧光成像系统分析。结果现示：60例结直肠癌标本中，survivin mRNA阳性表达58例，阳性率为96.7%，而癌旁正常组织标本中几乎不表达，癌组织表达水平较正常组织明显升高，有统计学意义（见表3）。所有标本中，β-actin均稳定表达（见图1）。

表3 结直肠癌组织与正常组织survivin mRNA表达

图1 正常组织及癌组织survivin m RNA PCR电泳结果

2.2 survivin基因表达与结直肠癌临床病理特征的相关性 经统计软件spss17.0统计分析，结果显示：结直肠癌组织中survivin基因的表达与患者性别、肿瘤大小、肿瘤部位及组织学分化程度均无明显相关性（P＞0.05），而与Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关（P＜0.05，见表4）。

表4 结直肠癌组织中survivin mRNA表达与临床病理关系

3 讨 论

survivin基因不仅具有细胞保护性，同时对细胞分裂也有基本的保护作用。在体外实验中发现，survivin直接与染色体转运蛋白相互作用，例如：aurora-B激酶、着丝粒内蛋白等。这些蛋白相互作用，在有丝分裂时候形成一个复合体，染色体转运复合物。这个复合物是染色体运动、纺锤体固有点检测和细胞分裂所需要的［4］。survivin在肿瘤中过度表达可能会使这些细胞凋亡检测点消失，让已经发生不同程度改变的细胞顺利完成分裂、增殖。研究发现，survivin过度表达与肿瘤的侵袭性相关，并且能减少患者的存活时间［5］。

目前，运用免疫组织化学技术对survivin在结直肠癌组织中的表达的研究结论尚未取得一致［6～8］。本次实验应用RT-PCR 技术测得60例结直肠癌组织标本和40例癌旁正常组织标本中survivin基因的表达情况。统计学结果显示：①survivin在结直肠癌组织中表达显著升高，而在癌旁正常组织中几乎不表达。但Suga［9］等通过研究发现60%正常组织有该基因表达。我们可以从本次实验结果再次证明survivin与结直肠癌的发生、发展有着密切关系，并且在结直肠癌的演变过程中发挥重要作用。②survivin在不同性别、不同年龄、不同部位肿瘤及不同分化程度的表达差异均无统计学意义，但与肿瘤的Dukes分期及淋巴结是否转移有关（P＜0.05），且 A、B、C、D四期survivin表达依次升高（P＜0.05）。有淋巴结转移的病例，survivin表达明显高于对照组。进而我们可以推断：survivin的表达可能与结直肠癌的生物学特性有关。

综上所述，survivin在结直肠癌的发生、发展过程中发挥重要作用，通过检测survivin的表达，可为判断预后提供一定的依据。

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