温毒清浸膏对肉鸡免疫功能的影响

2012-02-24汤法银吴玉臣

中国兽医杂志 2012年7期

汤法银，吴玉臣，郭爽

（1.郑州牧业工程高等专科学校药物工程系，河南郑州 450011；

2.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002）

随着社会的发展和人们生活水平的提高，越来越多的人关注食品卫生与安全。这也要求畜牧业在发展的过程中，对疾病的预防和治疗必须少加或不加抗生素，以减少其残留对人的危害。许多学者认为中药可以提高机体的抵抗力，抵抗多种细菌和病毒的攻击。温毒清浸膏是以2005年版《中国兽药典》收载温毒清散为基础，进行加减化裁，并经过现代浸提技术、浓缩技术和膏剂成型技术制成的用于饮水的浸膏剂，主要成分由黄芩、金银花、连翘、黄连、栀子、黄芪、板蓝根、赤芍、甘草、石膏、知母、杏仁等12味中药组成，具有清热解毒、泻火除烦、凉血止痢、扶正祛邪之功效，为进一步验证其功效，笔者考察了其对艾维茵肉鸡免疫功能的影响，为该制剂临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 温毒清浸膏制备温毒清浸膏由本校药物工程系中兽医药实验室研制，每1毫升相当于原药材3 g。

1.2 试验动物与分组选1日龄艾维茵肉鸡400羽，由河南农业大学种鸡场提供。将试验鸡随机分为四组，每组25羽，试验组3组，对照组1组，每组设4个重复。

1.3 试验动物的处理试验肉鸡的饲养按正常标准进行饲喂，自由饮水。试验组肉鸡的饮水中分别加入3个不同剂量的温毒清浸膏，分别为高剂量组（1 500 g／t），中剂量组（1 000 g／t），低剂量组（500 g／t）；对照组正常饮水。各组在7日龄接种新城疫疫苗（购自中牧实业股份有限公司），14日龄第2次免疫。各组在10、20、30 d和40 d每组选5羽试验鸡无菌采血后称重宰杀，取其腔上囊、脾脏、胸腺分别称重。

1.4 测定指标

1.4.1 免疫器官指数测定取1、10、20、30 d和40 d宰杀后的试验鸡腔上囊、脾脏、胸腺，用滤纸吸干血液后称重，并计算其免疫器官指数。免疫器官指数（g／kg）＝器官重量／体重。

1.4.2 淋巴细胞转化率测定刀豆蛋白（ConA）与MTT，均购自Sigma公司；RP1640培养基，购自Invitrogen公司。采用 MTT法检测淋巴细胞转化率［1］。1.4.3 血清中抗体水平测定采用半微量血凝抑制试验法（HI）［2］，HI抗体效价以 Log2X 表示。

2 试验结果

2.1 免疫器官指数测定结果

2.1.1 对试验鸡腔上囊指数的影响温毒清浸膏对腔上囊指数的影响见表1。

表1 温毒清浸膏对腔上囊指数的影响（g／kg）

从表1可以看出，10 d试验鸡腔上囊指数对照组显著低于各试验组（P＜0.05），各试验组间差异不显著（P＞0.05）；20 d试验鸡腔上囊指数对照组显著低于低剂量组和中剂量组（P＜0.05），极显著低于高剂量组（P＜0.01），低剂量组和中剂量组差

异不显著（P＞0.05），但低剂量组和中剂量组显著低于高剂量组（P＜0.05）；30 d和40 d试验鸡腔上囊指数，对照组极显著低于各试验组（P＜0.01），各试验组间差异不显著（P＞0.05）。

2.1.2 温毒清浸膏对试验鸡胸腺指数的影响见表2。

表2 温毒清浸膏对胸腺指数的影响（g／kg）

从表2可以看出，10 d试验鸡胸腺指数对照组显著低于各试验组（P＜0.05），各试验组间差异不显著（P＞0.05）；20、30、40 d试验鸡胸腺指数对照组极显著低于各试验组（P＜0.01），各试验组间差异不显著（P＞0.05）。

2.1.3 温毒清浸膏对试验鸡脾脏指数的影响见表3。

表3 温毒清浸膏对脾脏指数的影响（g／kg）

从表3可以看出10、20、30、40 d试验鸡胸腺指数对照组均极显著低于各试验组（P＜0.01），各试验组间差异均不显著（P＞0.05）。

2.2 淋巴细胞转化率测定结果见表4。

表4 温毒清浸膏对试验鸡淋巴细胞转化率的影响（%）

由表4可以看出，10 d和20 d试验肉鸡其淋巴细胞转化率对照组极显著低于各试验组（P＜0.01），低剂量组显著低于中剂量组和高剂量组（P＜0.05），中剂量组和高剂量组间差异不显著（P＞0.05）；30 d试验肉鸡其淋巴细胞转化率对照组显著低于低剂量组（P＜0.05），极显著低于中剂量组和高剂量组（P＜0.01），中剂量组和高剂量组间差异不显著（P＞0.05）；40 d试验肉鸡其淋巴细胞转化率对照组显著低于低剂量组（P＜0.05），极显著低于中剂量组和高剂量组（P＜0.01），各试验组间差异显著（P＜0.05）。

2.3 血清中抗体水平检测经半微量血凝抑制试验检测血清中ND的抗体效价，其结果见表5。

表5 温毒清浸膏对血清中ND的抗体效价的影响

由表5可以看出，试验鸡10 d时，各组间抗体效价无明显差异（P＞0.05）；20、30、40 d时对照组与试验组间差异极显著（P＜0.01），各试验组间差异不显著（P＞0.05）。

3 分析与讨论

3.1 温毒清浸膏对免疫器官指数的影响胸腺是禽类细胞免疫的中枢器官，是T细胞分化发育的主要场所。若切除新生动物的胸腺，该动物则缺乏T细胞，免疫功能将明显降低。腔上囊是禽类特有的体液免疫中枢器官，是B细胞分化发育的主要场所。胚胎后期或刚孵化的雏禽切除腔上囊后，相应的免疫功能降低或消失，细胞（分泌抗体）减少或消失，抗原刺激后不能产生特异性抗体，体液免疫受到抑制。脾脏是禽类最大的外周免疫器官，家禽的脾脏体积较小，主要参与体液免疫和细胞免疫。因此，免疫器官的发育情况与机体免疫功能的强弱有着密切的联系。目前常用胸腺、脾脏、腔上囊指数来反映机体免疫功能的状态。

此次试验结果表明，饮用温毒清浸膏10 d、20 d可显著或极显著提高其免疫器官指数，饮用温毒清浸膏30 d、40 d后可极显著提高其免疫器官指数。叶小芳等（2008）研究证明，口服中药复方多糖及其均一组分、黄芪多糖250 mg／kg可显著提高肉雏鸡免疫器官指数［3］，与本试验一致。吴玉臣（2008）等曾用黄芪等中药方以小鼠为试验动物进行试验，发现此配方对小鼠的免疫器官指数无明显影响［4］。这可能是由于试验动物不同所致。

3.2 温毒清浸膏对试验肉鸡淋巴细胞转化率的影响本研究表明，低剂量组可显著或极显著提高10、20、30、40 d淋巴细胞转化率，中剂量组和高剂量组可极显著提高各日龄淋巴细胞转化率。司昌德等（2008）在饲料中添加0.1%和0.3%黄芪多糖，结果表明，温毒清浸膏能显著提高血清淋巴细胞转化率［5］，与本试验一致。马得莹等（2005）研究表明，女贞子、五味子、四君子汤和六味地黄丸均可显著提高雏鸡脾淋巴细胞转化率［1］。

3.3 温毒清浸膏对血清中抗体水平的影响本试验证明，饮用各剂量组温毒清浸膏后可极显著提高机体注射ND疫苗一段时间后的抗体水平。司昌德等（2008）研究表明，黄芪多糖可显著提高肉仔鸡血清抗ND抗体水平［5］，与本报道一致。