高脂血症恒河猴血清RETN与血脂的相关性分析

2012-02-03李艳艳和占龙杨凤梅禹文海陈丽雄王俊斌鲁帅尧

中国比较医学杂志 2012年11期

李艳艳，和占龙，赵远，杨凤梅，禹文海，陈丽雄，王俊斌，鲁帅尧

（中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所，云南省重大传染病疫苗研发重点实验室，昆明 650118）

高脂血症（hyperlipidemia）是脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常值的一种全身性疾病，其主要危害是导致动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病。大量研究表明，高脂血症是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死独立而重要的危险因素，也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危险因素。此外，高脂血症还可导致脂肪肝、胰腺炎，高尿酸血症等疾病，已严重威胁着人类的健康，深入研究其发病机理和相关因素具有一定的意义。抵抗素（resistin，RETN）是一种主要由脂肪细胞分泌的多肽类激素，已有的研究表明，RETN水平可能影响体内能量代谢和平衡，与糖代谢、脂代谢的关系更为密切。初期主要是研究其与肥胖、胰岛素抵抗和Ⅱ型糖尿病之间的关系［1］。目前对其与高尿酸血症、高血压、冠心病、急性脑梗死等疾病的相关性研究较多［2-5］，而对于血清RETN与高脂血症的关系，报道较少。恒河猴在组织结构、生理和代谢功能等方面与人类极为相似，是人类疾病基础研究和临床前研究的理想动物模型。本实验通过检测恒河猴血清RETN及血脂，了解高脂血症恒河猴的血清RETN的水平，旨在探讨高脂血症恒河猴血清RETN水平与血脂是否存在相关性，为人类高脂血症及脂类代谢疾病的研究提供实验数据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

实验恒河猴由中国医学科学院医学生物学研究所医学灵长类研究中心提供，普通级恒河猴实验动物生产许可证号：SCXK（滇）2010-0006；实验动物使用许可证号为：SYXK（滇）2010-0009，并按实验动物使用的3R原则给予人道的关怀。

1.2 仪器设备及试剂

移液器（eppendorf 100μL）、离心机（Thermo LEGEND MICRO 21R）、酶标仪（BIO-RAD680）、罗氏全自动生化分析仪（P800）、human-resistin ELISA定量检测试剂盒（上海依科赛生物制品有限公司，批号：ZIAZBZZ101）。

1.3 方法

1.3.1 动物分组：随机挑选正常饲养的成年健康恒河猴16只，分为两组，饲喂正常饲料为对照组，饲喂高脂饲料为实验组；前期的实验结果表明，经4个月后实验组恒河猴血脂水平发生显著变化，符合高脂血症的临床特征，说明已初步建立了实验性高脂血症恒河猴模型。

1.3.2 血清样品采集：采血前受试动物禁食12 h以上，后肢静脉采血2 m L，分装在一次性自动定量采血管中，3000 r/min离心30 min，分离血清后收集，于-20℃冻存备用。

1.3.3 检测项目：TC、TG采用氧化酶法测定，HDL-C、LDL-C采用直接法测定。

1.3.4 血清RETN测定：由于先前研究结果表明，人类与恒河猴的RETN氨基酸序具有较高的同源性，并且赵远等［6］的实验结果已证实人RETN ELISA试剂盒可用于恒河猴RENT的检测，且测定结果具有较好的稳定性。因此本实验采用Humanresistin ELISA定量检测试剂盒测定恒河猴血清RETN水平。

1.4 数据统计分析

2 结果

2.1 血脂及血清RETN测定结果

实验组恒河猴血清TC、LDL-C以及RETN水平与对照组比较，显著升高（P＜0.05）；实验组TG较对照组显著降低（P＜0.05）；HDL-C，两组比较差异不显著（P＞0.05）（表1）。

表1 对照组与实验组血脂及血清RETN的测定结果Tab.1 The determination Results of resistin and lipids of experimental group and control group

2.2 血清RETN与血脂的相关性分析结果

通过相关性分析得出，血清RETN水平与TC、 LDL-C呈直线正相关（回归方程为：y=0.0009x+ 0.4384，r=0.776，P＜0.001；y=0.001x-1.4385，r =0.791，P＜0.001），与TG呈直线负相关（y=-0.00006x+1.1162，r=-0.754，P=0.001），与HDL-C无相关性（表2）。线性关系（图1，图2，图3）。

表2 血清RETN与血脂的相关性分析Tab.2 Correlation analysis between serum resistin and lipids

图1 血清RETN与TC相关性Fig.1 Correlation between serum concentration of resistin and TC

图2 血清RETN与TG相关性Fig.2 Correlation between serum concentration of resistin and TG

图3 血清RETN与LDL-C相关性Fig.3 Correlation between serum concentration of resistin and LDL-C

3 讨论

非人灵长类动物与人的遗传物质有75％～98.5％的同源性，而恒河猴与人类基因组的同源性大于95％，显示了许多相似的生物学和行为学特征，用恒河猴作为实验动物可较好的研究人类相似的疾病及其发病机制，因此广泛用于传染病学、药理毒理学、生殖生理、营养代谢等方面的研究，也是研究人类高脂血症的理想动物模型。根据血清TC、TG和HDL-C的含量，高脂血症可分为四类：高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症即血清TC和TG含量均增高、低高密度脂蛋白血症。本研究中实验组恒河猴TC、LDL-C显著高于对照组，TG显著低于对照组，提示实验组恒河猴血脂代谢已经发生紊乱，符合部分高脂血症特征，说明已初步建立了恒河猴高脂血症动物模型。

RETN主要是由白色脂肪细胞分化产生的，是脂肪细胞特异性分泌的具有内泌激素性质的一种蛋白质［7］，有抵抗胰岛素的作用，可使血糖水平升高及脂肪细胞增生繁殖。所以近年来围绕RETN和肥胖、胰岛素抵抗及糖尿病的关系进行了大量研究，而糖代谢与脂代谢关系密切。有资料显示，RETN与脂代谢紊乱也有关［8］。本研究对高脂血症恒河猴血清RETN与血脂水平进行测定，发现高脂血症恒河猴血清TC、LDL-C、RETN水平均显著高于对照组，这与解金红［9］报道的高脂血症病人LDL-C及血清RETN水平明显高于正常人群的研究结果一致。相关性分析结果表明，血清RETN水平与TC、LDL-C呈显著正相关，与寇忠爱［5］，史艳［10］等报道的急性脑梗死、高血压患者血清RETN水平与LDLC呈正相关的观点相一致。有研究表明，RETN与血脂及载脂蛋白代谢相关［11］，而载脂蛋白A5的主要功能是降低血浆TG的水平，在血浆脂质动态平衡中起关键作用［12-14］，这可能是在本实验中高脂血症恒河猴血清RETN与TG呈负相关的结果产生的原因，但目前RETN影响载脂蛋白代谢的机制尚不清楚，是否因RETN的调控作用导致血清TG的降低还不能确定，有待进一步研究证实。

实验结果显示，RETN与血脂代谢密切相关，并与部分血脂指标呈现伴随状态，提示RETN对血清脂质代谢可能有较广泛的影响，很可能是脂代谢紊乱的一个早期标志性因子，但其具体机制有待进一步研究。RETN作为一种新发现的脂肪细胞分泌性细胞因子，不仅与肥胖、Ⅱ型糖尿病和炎症有关，与脂肪代谢也有密切关系，有可能为改善人类脂类代谢研究提供新的途径，对人类高脂血症的研究具有一定的意义。

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