HPLC法分析注射用阿洛西林钠中的高聚物

柴明青 许菲菲 朱俏玲

HPLC法分析注射用阿洛西林钠中的高聚物

柴明青 许菲菲 朱俏玲

应用Sephadex G-10色谱柱，以磷酸盐缓冲液为流动相，设置UV检测器波长为254nm，建立注射用阿洛西林钠中高聚物分析的高效液相色谱法。高聚物浓度在0.006～4mg/L内呈良好线性关系，相关系数为0.9999。该方法操作简单、检出限低、准确度高。

HPLC;注射用阿洛西林钠;高聚物

抗生素是临床用量最大和较易发生不良反应的药物。其中最常见的一类不良反应就是过敏反应。注射用阿洛西林钠为无菌冻干粉针剂，因其抗菌谱广、抗菌活力强而在临床上广泛使用。多年来的研究证明［1，2］，在β-内酰胺类抗生素所致的速发型过敏反应中，药物分子本身只是半抗原，药物中存在的高分子聚合物才是引发速发型过敏反应的真正过敏原，因此严格控制抗生素中高分子聚合物的含量有着重要的意义。

目前国内外对β-内酰胺类抗生素中高聚物的分析研究主要有离子交换色谱法、反相高效液相色谱法、凝胶过滤色谱法。离子交换色谱法分离时间长，操作繁琐。反相高效液相色谱法因不易确定高聚物的准确位置而难以准确测定含量。凝胶色谱法因标准品很难完全同质而难以推广。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂 Agilent1100型高效液相色谱仪，上海安捷伦仪器有限公司。蓝色葡聚糖2000，西安沃尔森生物技术有限公司。磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，分析纯，上海国药试剂有限公司。水为蒸馏水。

1.2 溶液的制备

1.2.1 蓝色葡聚糖2000溶液 精密称取10mg蓝色葡聚糖2000，置10m l容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.2.2 供试品溶液 精密称取10mg阿洛西林钠，置5ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.2.3 对照品溶液 精密称取10mg阿洛西林钠对照品，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.3 检测条件的确定

1.3.1 色谱柱 根据β-内酰胺类抗生素和其高分子杂质分子量的特点选用Sephadex G-10作为高分子杂质分离色谱系统的凝胶介质，色谱柱内径为1cm，长为30cm的玻璃柱作为色谱柱。

1.3.2 流动相 分别选用pH7.0的0.1mol/L、0.05mol/L和0.025mol/L磷酸盐缓冲液分别作为流动相，结果0.05mol/L磷酸盐缓冲液作为流动相时，检测灵敏度较0.1mol/L和0.025mol/L磷酸盐缓冲液大，故选用pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液作为流动相。

1.3.3 分离度试验 称取阿洛西林钠约400mg置10m l量瓶中，用0.04mg/m l的蓝葡溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，进样100μl，用流动相进行测定，记录色谱图进行分析，得高聚物峰的含量为0.229%，计算分离度为3.6。

1.3.4 理论板数与拖尾因子 应用上述的色谱条件进行试验，理论板数为792、773，拖尾因子为1.37、1.16。理论板数及拖尾因子均符合要求。

2 结果

2.1 线性及检测限 按1.2.3分别配制成0.006-4mg/L的对照品溶液进行分析，溶液浓度与测得的峰面积呈良好的线性关系，回归方程 Y=0.0095X+0.0143，相关系数 r=0.9999。将对照品溶液进行稀释，阿洛西林钠中高聚物的检测限(S/N=3)为0.9μg/m l。

2.2 阿洛西林对照溶液F值测定的重复性 参照阿洛西林对照溶液测定方法测定，F值为阿洛西林对照溶液浓度(mg/m l)与峰面积的比值，重复测定F值，日内RSD在1.2% ～4.4%之间;日间平均F值为104.2618×10-3，RSD为2.8%(n=3)。

2.3 样品取样量与聚合物测定结果的相关性考察 分别称取为约200mg，300mg和400mg样品置3个10ml量瓶中，按样品测定方法测定，结果表明，供试品溶液在20.48mg/ml～39.22mg/ml范围内，溶液浓度与聚合物峰面积呈良好线性关系，相关系数r=1。

2.4 重现性 每隔一周对同一批样品进行分析，得结果见表1。

表1 重现性试验结果

2.5 不同厂家和公司不同时期生产的注射用阿洛西林钠同时期检测聚合物结果，测试结果见图1。

图1 不同厂家和公司不同时期生产的注射用阿洛西林钠同时期检测聚合物结果

3 小结

HPLC法分析注射用阿洛西林钠中的高聚物，该方法测试满足中国药典对高聚物检测的有关要求，该方法快速简单、灵敏度高、准确度高，可用于注射用阿洛西林钠的质量控制。

［1］ JING SH，HU C Q．Advacement of allergic responses on β-lactam antibiotics．Chin JNew Drugs，1994，3(4):38-41．

［2］ ZHANG J，ZHU JP．Sephadex chromatographic system for determination of polymer in piperacillin sodium/tazobactam sodium for injection．Chin JMod App;Pharm，2010，27(5):452-454．

Determ ination of high polymers in azlocillin sodium for injection by HPLC

CHAIMing-qing，XU Fei-fei，ZHU Qiao-ling．Kang’enbei Biopharmaceutical Co Ltd in Jinhua，Jinhua 322000，China

A Sephadex G-10colum was used with the phosphate buffer solution and the UV detection wavelength was 254nm．Develop HPLC testmethod for the determination of high polymers in azlocillin sodium for injection．The calibration curve was linear in the range of 0.006～4mg/L．Themethod is simple and reliable．

HPLC;Azlocillin sodium for injection;High polymers

322000浙江金华康恩贝生物制药有限公司(柴明青);义乌出入境检验检疫局(许菲菲 朱俏玲)

book=26,ebook=255