高效液相色谱法检测食品中碱性橙染料

佟永薇

（天津市食品研究所有限公司，天津301609）

1 试剂和材料

实验用水：一级水。

碱性橙染料标准储备液：碱性橙21：1.076 mg/mL；碱性橙22：1.094 mg/mL；碱性橙2：1.036 mg/mL；碱性橙标准工作溶液（使用时配置）：碱性橙21：2.152、10.76、21.52、32.28、43.04 μg/mL，碱 性 橙2：2.188、10.94、21.88、32.82、43.76 μg/mL，碱 性 橙2：2.072、10.36、20.72、31.08、41.44 μg/mL。

高效液相色谱仪；TJIE-29 天平：感量为0.1 mg；TJIE-56 超声波旋转蒸发仪；离心机；TJIE-10 氮吹仪；电热板。

2 方法

2.1 试样制备

将固体样品放入搅拌机中搅碎至匀粉状，液体样品混匀，含油样品混匀，分别进行前处理。

2.2 试样前处理

采用文献[1]中的前处理方法对固体样品、液体样品、含油样品分别进行提取及净化。

2.3 液相色谱条件

色谱柱：C18 粒径5 μm，150 mm×4.6 mm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

柱温：30 ℃；流动相：甲醇65 mL＋乙酸铵35 mL；检测波长：碱性橙2：449 nm；碱性橙21、碱性橙22：485 nm。

2.4 测定公式

分别吸取样液注入液相色谱仪，测得其峰面积，代入式（1）中求得样液中碱性橙的含量[3]。

式中：X 为试样中每种碱性橙燃料的含量，（mg/kg）；C 为由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度，（μg/mL）；V 为样品最终定容体积，mL；m为试样质量，g。

3 测定

3.1 校准曲线绘制

碱性橙21：2.152、10.76、21.52、32.28、43.04 μg/mL；进液相色谱仪进行分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线[2]。碱性橙21 标准曲线见图1，标准浓度、峰面积见表1。

碱性橙22：2.188、10.94、21.88、32.82、43.76 μg/mL；进液相色谱仪进行分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。碱性橙22 标准曲线见图2，标准浓度、峰面积见表2。

表1 碱性橙21 的标准浓度、峰面积Table 1 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 21

表2 碱性橙22 的标准浓度、峰面积Table 2 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 22

碱性橙2：2.072、10.36、20.72、31.08、41.44 μg/mL；进液相色谱仪进行分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。碱性橙2 标准曲线见图3，标准浓度、峰面积见表3。

表3 碱性橙2 的标准浓度、峰面积Table 3 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 2

4 样品测定及加标回收

4.1 样品测定

检测结果见表4。

表4 辣椒粉中碱性橙的检测结果Table 4 The test results of Chili powder in alkaline orange

4.2 加标回收率

加标回收率实验结果见表5。

表5 辣椒粉中碱性橙2 加标回收率Table 5 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 2

表6 辣椒粉中碱性橙21 加标回收率Table 6 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 21

表7 辣椒粉中碱性橙22 加标回收率Table 7 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 22

由表7 结果显示，测定的的回收率为95%～115%，试验数据表明本方法有很好的回收率。

4.3 检出限

计算最低浓度的加标回收样液信噪比S/N，三倍信噪比时为检出限，十倍信噪比时为定量低限。在样品中添加标准物质碱性橙2：0.126mg/kg，碱性橙21：0.127mg/kg；碱性橙22：0.153 mg/kg；按方法步骤进行前处理，提取液经液相色谱分析，其碱性橙2，S/N=47，计算S/N=3时所对应的检出限为0.008 mg/kg，其碱性橙21，S/N=47，计算S/N=3 时所对应的检出限为0.008 mg/kg，其碱性橙22，S/N=45，计算S/N=3 时所对应的检出限为0.01 mg/kg，满足方法的检出限0.01 mg/kg 要求。

5 结论

利用高效液相色谱法对样品进行检测分析，在样品中添加标准物质碱性橙2：0.126 mg/kg；碱性橙21：0.127 mg/kg；碱性橙22：0.153 mg/kg；提取液经液相色谱分析，测定的的回收率为95%～115%，其碱性橙2检出限为0.008 mg/kg，碱性橙21 检出限为0.008 mg/kg，碱性橙22 检出限为0.01 mg/kg。

[1] 湖北省产品质量监督检验研究院.GB/T 23496-2009 食品中禁用物质的检测碱性橙染料[S].北京：中国标准出版社,2009-07-03

[2] 徐新盛.一种治疗荨麻疹、湿疹的药物组合物及其制备工艺：中国,CN200610086473.3[P].2007-01-17

[3] 宋小兰,刘强.HPLC 法测定红花罂粟中蒂巴因的含量[J].分析测试技术与仪器,2005(2):66-68