抗凝护心Ⅱ号对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图的影响

陈波，冯莉，翟铁军

(1．黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040;2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

近年来，随着药物溶栓及冠心病介入治疗，冠脉旁路移植术等的临床应用，实现冠脉再通已不是难题。但人们很早就注意到心肌缺血再灌注时易引起一系列心脏与血管的不良事件，如严重的再灌注心律失常、心肌缺血损伤加重［1］。西医通过电复律及药物(如α－受体阻滞剂、利多卡因、Ca2+拮抗剂等)防治再灌注心律失常，而本实验选用复方中药抗凝护心Ⅱ号观察该药对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图的影响。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 实验动物

清洁级Wistar大鼠50只(黑龙江中医药大学动物实验中心提供)，体质量(250±40)g，雌雄各半。

1．1．2 实验用药

抗凝护心Ⅱ号:川芎、黄芪、红花、桃仁、当归、赤芍、党参、川牛膝、枳壳、地龙、水蛭等组成，购自黑龙江省药材公司，由黑龙江中医药大学附属第一医院煎药室水煎浓缩而成。

通心络胶囊(石家庄以岭药业股份有限公司，批号:080822);乌拉坦(上海化学试剂采购站分装厂，批号:080220);蒸馏水由黑龙江中医药大学附属第一医院临床分子生物实验室提供。

1．1．3 主要仪器及设备

小动物呼吸机(DH－50型，浙江大学仪器厂);心电机(6511型，上海KOHDEN电子有限公司);电子分析天平［梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司］。

1．2 实验方法

1．2．1 实验分组

50只清洁级Wistar大鼠，随机分为5组，假手术组、模型组、抗凝护心Ⅱ号高剂量组、抗凝护心Ⅱ号低剂量组、通心络组，每组各10只，相同条件下分笼饲养。

1．2．2 给药方法

假手术组:灌服生理盐水，每天10ml/kg。模型组:灌服生理盐水，每天10ml/kg。抗凝护心Ⅱ号高剂量组:灌服浓度0．72g/ml抗凝护心Ⅱ号，每天10ml/kg。抗凝护心Ⅱ号低剂量组:灌服浓度0．24g/ml抗凝护心Ⅱ号，每天10ml/kg。通心络组:灌服通心络，浓度为0.05g/ml，每天10ml/kg。各组于术前14天依照给药方法分别进行灌胃，末次给药30min后进行手术。1．2．3 模型制备

大鼠急性心肌梗死模型的制备［2］:用20%乌拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧固定于鼠板上，将心电仪针状电极分别插入四肢皮下，标准肢体Ⅱ导联记录心电图。分离颈总动脉，气管插管，呼吸机控制呼吸(呼吸频率55～60次/分)，经左侧第3～5肋间开胸暴露心脏，剪开心包，于左心耳与肺动脉圆锥下方找到冠状动脉左前降支，在冠状动脉下进针，以0号线穿过心肌表层后出针，稳定后将直径1．5mm的硅胶管置于结扎线与所取血管心肌表层之间，拉紧结扎线使硅胶管压迫左冠状动脉，造成闭塞(假手术组仅在左冠状动脉穿线，但不结扎冠脉，心脏旷置，时间等同其他组)，记录结扎前后心电图。结扎30min后，拔去引线使冠状动脉再通，并观察心电图有无再灌注心律失常。模型(除假手术组外)成功标准:中断血流后供血区心肌颜色由鲜红转为暗紫，心电图示ST段抬高与T波融合，呈弓背向上单向曲线，抬高大于0．5mv为结扎成功的指标。30min后解除压迫，心电图出现Q波，为造模成功。

1．2．4 心电图的处理

1．2．4．1 分别描记各组再灌注后Ⅱ导联的ST段，观察Ⅱ导联室性心律失常的发生率。

1．2．4．2 ST段测量方法与ST段保护率的计算

ST段振幅，是以两个相邻且齐平的T－P段为基线，测量这两个相邻T－P段之间的ST段值，∑ST增幅指ST段抬高的总和。ST段保护率=［(模型组∑ST－假手术组∑ST)－(处理组∑ST－假手术组∑ST)］÷(模型组∑ST－假手术组∑ST)×100%。所有观察指标的数据均来源于心电图记录文件的Ⅱ导联。1．2．4．3 T 波的测量方法与 T 波保护率的计算［3］

本实验对心肌缺血程度的观察指标为T波的变化。T波高度测量:分别选取缺血前、缺血中、再灌注后Ⅱ导联体表心电图，选择清晰波形分析测量导联T波振幅，以P－R段为基线，每时间点测5个连续波形，取其平均值。记录并计算T波的变化值(△T=缺血中、缺血后T波值－缺血前T波值)，无论升高或降低，均取变化的绝对值。

T波保护率=［(模型组∑△T－假手术组∑△T)－(处理组∑△T－假手术组∑△T)］÷(模型组∑△T－假手术组∑△T)×100%

1．2．5 统计分析

2 实验结果

通心络组两只大鼠造模失败，死亡。

2．1 心电图的改变

2．1．1 各组大鼠∑ST和ST段保护率的变化

缺血后各组无显著差别(P＞0．05);再灌注后各组与模型组比较有显著差别(P﹤0．05);中药高剂量组与通心络组比较无显著差别(P＞0．05);中药低剂量组与通心络组组比较有显著差别(P﹤0．05);中药高剂量与中药低剂量组比较有显著差别(P﹤0．05)，结果见表1。

表1 各组大鼠缺血再灌注损伤心电图∑ST及ST段保护率(±s)

表1 各组大鼠缺血再灌注损伤心电图∑ST及ST段保护率(±s)

注:与模型组比较，*P﹤0．05;与通心络组比较，△P﹤0．05;中药高剂量组与低剂量组比较，#P＜0.05。

组别∑ST mV ST段保护率%缺血后 再灌注后假手术组 － － －模型组 0．26±0．03 0．26±0．03 －中药高剂量组 0．23 ±0．03 0．12 ±0．03*# 53．85中药低剂量组 0．25±0．04 0．20±0．03＊△ 23．08通心络组 0．25 ±0．03 0．14 ±0．02*46．15

2．1．2 各组大鼠△T和T波保护率的变化

大鼠冠状动脉左前降支结扎后再灌注，可以引起大鼠的心肌缺血再灌注损伤，表现心电图的T波发生改变;抗凝护心Ⅱ号和通心络可显著抑制再灌注大鼠心电图△T的改变，具有很明显的T波保护作用。缺血前各组∑△T无明显差异;缺血中，与假手术组相比，模型组和各药物组△T明显增大，具有统计学意义(P＜0．05);与模型组相比，各药物组△T改变明显减小(P＜0．05)。再灌注后，与假手术组相比，模型组和各药物组△T明显增大(P＜0．05);与模型组相比，各药物组△T明显减小(P＜0．05);与各药物组△T没有明显差异(P＞0．05)，见表2。

表2 各组大鼠缺血再灌注损伤心电图△T及T波保护率(±s)

表2 各组大鼠缺血再灌注损伤心电图△T及T波保护率(±s)

注:与模型组比较，◇P﹤0．05;与假手术组比较，△P﹤0．05;同组内与缺血中比较，#P﹤0．05。

组别△TmV T波保护率%缺血后△T 灌注后△T模型组 0．141 ±0．015 0．088 ±0．015#－假手术组 0．003±0．005◇ 0．003±0．005◇# －通心络组 0．111 ±0．015◇△ 0．057 ±0．012◇△# 35．88中药低剂量组 0．118 ±0．014◇△★ 0．066 ±0．013◇△★# 25．88中药高剂量组 0．114 ±0．016◇△★ 0．056 ±0．012◇△★#37．65

2．1．3 各组对大鼠心肌再灌注损伤后室性心律失常发生率的影响

抗凝护心Ⅱ号高、低剂量组以及通心络组的室性心律失常发生率明显低于模型组(见表3)。

表3 各组室性心律失常发生率

3 讨论

心肌缺血再灌注损伤主要与钙超载、氧自由基的损害有关。钙超载是心肌缺血再灌注诱发心肌顿抑及心律失常的重要发生机制。由于Ca2+波动激活内向离子流，引发延迟后除极，当舒张期膜电位的波动达到阈值就可激发早搏，加上缺血与非缺血区之间传导速度不一致形成折返冲动导致心律失常。心肌细胞内高Ca2+对心肌细胞的损伤，细胞内高Ca2+导致线粒体摄钙增加，消耗ATP，并与磷酸根结合干扰氧化磷酸化，使ATP生成减少;Ca2+升高可激活磷脂酶引起细胞膜和细胞器膜的损伤，ATP酶加速ATP消耗，蛋白酶促进细胞膜和结构蛋白的分解，核酶激活引起染色体损伤。氧自由基的损伤是因缺血再灌注时通过黄嘌呤氧化酶途径产生大量的氧自由基，导致体内氧自由基聚集，使细胞膜通透性、流动性增加，表现为心肌细胞电活动紊乱而产生心律失常［4－5］。

本实验结果表明，抗凝护心Ⅱ号高、低剂量组以及通心络组的室性心律失常发生率明显低于模型组，而ST段及T波保护率明显高于模型组。表明抗凝护心Ⅱ号对缺血再灌注损伤的心肌有保护作用。因此，推测抗凝护心Ⅱ号可能有以下作用:1)抑制钙超载可以减少室性心律失常的发生率，进一步减少钙超载对心肌顿抑的影响;2)清除氧自由基的作用，减轻氧自由基对心肌的损害，减少室性心律失常的发生率，发挥保护受损心肌。

［1］张丽，张麟．缺血再灌注损伤与心肌细胞凋亡研究进展［J］．中国现代临床医学杂志，2006，5(10):43 －45．

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