欧李组织培养快繁技术

郭劲鹏

（牡丹江林科所，黑龙江 牡丹江 157009）

欧李（Prunus humilis Bge.）俗称山樱桃，属蔷薇科（Rosaceae）樱亚科（Prunoideae Focke）樱属（Prunus Linn）落叶小灌木。欧李是我国一个古老野生树种，但长期以来处于野生状态。20世纪80年代兴起的第三代水果开发热，其潜在价值才逐渐被人们认识。我们以抗寒性、丰产性、口感及果个为选种目标，对主要优良栽培品系进行了多年的引种栽培试验，由山西农业大学引进的欧李3号和4号，抗寒性强，果色鲜艳、汁液多、味极浓，丰产性好，适合在黑龙江省东南部浅山区大力推广。但在实际生产中，欧李通常采用分株繁殖和扦插繁殖，繁殖系数低，不能满足生产的要求。如何提高繁殖速度成为了制约欧李优良品系产业化发展的瓶颈问题，因此我们开展了欧李组织培养快繁技术研究，建立的欧李快繁体系具有繁殖系数高、操作方便、容易成活，成苗时间短，幼苗生长势强等特点，为欧李优良品系的栽培推广提供了较可靠的快繁技术。

1 外植体的选择与消毒

培养材料：4月上旬，取1年生休眠枝条在室内水培，当腋芽萌动时，剪成带有1～2个腋芽的茎段作为培养材料。

灭菌方法：剪好的带芽茎段在工作台上75%酒精浸泡20s后，0.1%升汞分2次浸泡8min，每次4min，中间用无菌水冲洗。灭菌后以无菌水冲洗5次，每次2min，解剖刀切除两端坏死部分后，接入初始培养基。升汞分2次浸泡，在保证灭菌效果的同时，可有效减弱消毒液对培养材料的毒害，有利于培养材料的生长发育。

2 无菌材料的试管培养

欧李快繁所采用的基本培养基为改良的MS培养基（大量元素及有机减半），灭菌后的培养材料接种到附加0.5mg／L 6BA 和0.025mg／L NAA的初始培养基上，培养基pH值调至5.8，外植体在24±2℃的控温培养室内培养，16／8h光暗周期，光照强度1000～3000 lx。接种7天后腋芽开始萌发，萌发率90%以上。26天后长出4～5cm的单枝，展开6～7片叶，腋芽生长旺盛，叶浓绿，无卷曲现象出现。

将初始培养得到的生长健壮的无菌小苗，在无菌工作台上截取成0.5cm左右的带芽茎段，接种到附加浓度为0.5mg／L 6BA 和0.01mg／L NAA的增殖培养基中，培养12天左右腋芽萌发开始生长，30天后长出5～7cm的单枝。增殖系数5～7倍，通过多次转瓶后可得到大量无菌小苗。

当增殖培养得到的无菌小苗到一定数量时，可选择生长健壮的小苗进行生根培养。在无菌工作台上将小苗截成2.5cm左右，带两轮以上叶的茎段，将叶片剪去一半后接入生根培养基。生根培养基加入0.2mg／L的IBA，接入时茎段不宜插入过深，茎段能直立即可。培养12天即可诱导出有效根，诱导率90%以上，25天后每株可诱导2～3条根，根长3cm左右，此时可对无菌小苗进行驯化移栽。

3 无菌苗的驯化移栽

对已生根的小苗进行驯化锻炼，在培养室内逐步打开瓶口，然后移至高湿、弱光、温度适宜并略低的环境2～3天，使其逐步适应自然环境后可进行移栽。

移栽基质：选用经高锰酸钾消毒后的草炭＋田园土＋粗沙（5∶2∶1）的混合培养基质。移栽方法：移栽基质做床、整平，用镊子划痕后，夹住根部插入至第一轮叶，用手压紧，保持温度21～25℃，经常浇水保湿。一周后小苗能够成活，成活率80%以上。

4 总结

4.1 欧李是黑龙江地区的乡土树种，用途广泛，果实营养丰富，具有极高的栽培价值和经济价值。引种试验表明：山西农业大学选育的欧李3号和4号抗寒能力强，在黑龙江省东南部浅山区适当防寒即可越冬；丰产性好，4年生株产1.0～1.5kg，单果平均重5.5g，果色鲜艳、汁液多、味极浓。组培快繁体系的建立能在短时间内繁育大量优良苗木，为欧李产业化发展奠定了坚实的基础。在适宜地区推广欧李优良品系，有利于林区职工的增收致富和林区的经济发展。

4.2 培养材料的选择是欧李组培快繁的关键，以叶片为培养材料经脱分化出愈伤组织，再诱导出芽和根，周期长且技术难度大。以芽为培养材料时，可直接诱导腋芽的生长，其原理与扦插相似，周期短，20天即可转瓶，繁殖系数高且技术简单、操作容易。同时休眠芽试验效果优于生长旺季的嫩枝芽，因此，休眠枝室内水培芽萌发后的茎段是欧李组织培养中较为理想的外植体。

4.3 在欧李组织快繁中，基本培养基、激素组合及浓度对培养材料的诱导及生长影响极大。改良的MS培养基（大量元素及有机减半）是较适合的基本培养基；改良的 MS＋6BA 0.5mg／L＋ NAA 0.025mg／L是较适合的初始培养基，腋芽萌发率90%以上；改良的MS＋6BA 0.5mg／L＋NAA0.01mg／L是较适合的增殖培养基，增殖系数5～7倍；改良的 MS＋IBA 0.2mg／L较适合于诱导生根，诱导率90%以上。无菌小苗经驯化后移栽成活率可达80%。