羊肚菌菌丝体、菌核培养的试验

2012-01-25王伟伟

中国林副特产 2012年5期

王伟伟

（甘肃省小陇山林业实验局观音林场，甘肃天水 741038）

羊肚菌（Morchella esculenta）是一种珍贵的食用和药用真菌，子实体味鲜美，营养丰富，含有19种氨基酸和多种维生素，所含有的营养成分是其它种类的食用菌所不及的。其性平，味甘寒无毒，具有益肠胃、化痰理气之功效。随着人们生活水平的日益提高，对营养均衡的追求不断加强，羊肚菌越来越受人们的喜爱，所以人工栽培技术的提高也就显得更加迫切了。因而寻找羊肚菌菌丝的最适培养材料，探索和分析羊肚菌的腐生性，对于羊肚菌的人工栽培无疑是必须的。Volk and Leonand认为羊肚菌菌丝的营养生长及菌核的形成、生长是其生活史的重要阶段。本试验初步观察了三种野生羊肚菌在不同培养基上菌丝生长、菌核产生的特征。

1 材料与方法

1.1 菌丝培养

菌种：粗腿羊肚菌（Morchella crassipes），羊肚菌（M.esculenta），尖顶羊肚菌（M.conica）。取新鲜子实体，表面用0.1%升汞消毒，挑取菌柄顶端内部组织，放入PDA斜面。另在PDA三角瓶中悬挂子实层，收集于囊孢子，萌发后移置PDA斜面，15～25℃室温培养，长满后备用。培养基：①PDA培养基。②豆芽汁培养基，黄豆芽100g煮汁，蔗糖50g，琼脂20g，水1000mL。③葡萄糖硝酸钠培养基，葡萄糖30g，硝酸钠1.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1.0g，硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1000mL。④完全培养基，蛋白胨2g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸二氢钾lg，硫酸镁0.5 g，琼脂20g，水1000mL。⑤PDA 综合培养基，PDAl000mL，尿素1g，三氯化铁0.1g。⑥土壤浸液培养基，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁1g，尿素1g，石膏lg，琼脂20g，野生羊肚菌生长处的土壤浸液1000mL。以上各种培养基经1.2kg／cm230min灭菌后制成斜面种后置于15～25℃室温培养。

1.2 菌核培养

菌种：粗腿羊肚菌（M.crassipes）。培养基：①麦粒；②麦粒，蔗糖1%，碳酸钙1%；③棉子壳；④棉子壳，蔗糖1%，碳酸钙l%；⑤棉子壳，混合泥浆，碳酸钙1%，蔗糖l%；⑥麦粒复合培养基，麦粒浸涨煮熟，按一定比例加入蛋白胨、酵母膏、酪蛋白、微量元素液及混合泥浆（砂、土、腐殖质、蒸馏水混合，使pH6.0～6.5，含水60%～65%）。方法：用1000mL广口瓶作栽培容器，先将培养基拌匀装入瓶内再将混合泥浆装入，留适当空间，用牛皮纸和聚丙烯膜封口，于1.5kg／cm2下灭菌2h，冷却后接斜面种，室温5～15℃、弱光下培养，试验均设三个重复。

2 结果与分析

2.1 菌丝生长特征

初分离的菌丝体为白色或灰白色，稀疏，紧贴培养基。5天左右颜色逐渐变深，其中4、6号培养基上的为浅黄褐色，3号培养基为黄褐色，5号培养基灰褐色，并产生大量水珠，1、2号培养基为红褐色。7天左右可见管底散生1～3mm大小的菌核。6号培养基上菌丝生长旺盛，可作为培养羊肚菌菌丝较好的培养基，1、2、4号培养基次之，3、5号培养基长势较差。

羊肚菌菌丝有丝状、绒毛状和颗粒状三种形态。生长前端多为丝状匍匐菌丝，后逐渐为绒毛状的气生菌丝，继续培养则出现颗粒状。镜检颗粒状菌丝为高度扭曲的变态菌丝，这可能是菌丝对营养衰竭或不良外界条件的应变形态。

三种羊肚菌中，以粗腿羊肚菌生长较好，速度快，旺盛；其它两种长势稍弱。在两种分离方式中，以子实体分离物生长较好，孢子分离物生长较弱。三种羊肚菌均可产生菌核，菌核为浅黄褐至棕褐色；在菌丝满管后，于管底散生，后逐渐聚集。不同的培养基菌核形成表现各异，以子实体分离物在6号培养基上产生菌核量多且个体较大，l、3、4、5号培养基上产生数量较少，2号培养基不产生菌核。孢子分离物则较复杂，尖顶羊肚菌在2号培养基上不产生菌核，粗腿羊肚菌仅在1、6号培养基上产生，而羊肚菌在2、6号培养基上不产生菌核。

2.2 菌核培养特征

不同培养基对菌丝生长及菌核产生有明显影响。1号培养基上无菌核形成；2号培养基菌核较小黄色，散生于瓶壁；3号培养基有个别褐红菌核；4号培养基菌核褐红，散生于培养基表面；5号培养基在土层有较大褐红菌核，且有大量白色绒毛状菌丝球；6号培养基在土层有大量成片菌核，黄褐色。

从总体上来看，在6号培养基上菌丝生长浓密、旺盛、洁白外，其余5种培养基上的菌丝生长均稀疏。蔗糖、氯化钙对菌核形成有促进作用（2、4号培养基）；而只有在加土的5、6号培养基中才能在土层的瓶壁上产生较大的菌核，说明土壤的团粒结构及贫脊条件对产生大量菌核是必需的。