尖山橙中生物碱类成分的研究

周长江， 关焕玉， 张援虎*， 徐 冉， 郝小江， 杨小生

(1.贵州师范大学化学与材料科学学院，贵州贵阳550001;2.贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳550002)

尖山橙 Melodinus fusiformis Champ.ex Benth.又名竹芚、芚皮黄、鸡腿果、石牙枫，系夹竹桃科山橙属植物。该属植物全世界约有53种，主要分布于亚洲热带，亚热带及大洋洲。我国产11种，主要布于西南，华南及台湾等省区。尖山橙主要分布于广东、广西、贵州、四川等地，全株供药用，可用于活血，补肺，通乳和治风湿性心脏病等［1-2］。尖山橙中富含单萜吲哚生物碱类成分，该类成分具有多种生物活性，如抗生育，消炎，抗肿瘤等［3-5］。目前对尖山橙化学成分的研究报道较少［6］，本实验对尖山橙中的生物碱类成分进行了系统研究，并从中分离鉴定了9个单体成分，分别为:tabersonine(Ⅰ )，11-hydroxytabersonine(Ⅱ)，venalstonidine(Ⅲ )，pachysiphine(Ⅳ )，venalstonine(Ⅴ)，scandine(Ⅵ)，10-hydroxyscandine(Ⅶ )，scandine Nb-oxide(Ⅷ)和5-methoxystrictamine(Ⅸ)。化合物Ⅲ，Ⅳ，Ⅸ为首次从尖山橙中分离鉴定，其中化合物Ⅸ是首次从山橙属植物中分离鉴定。

1 仪器和材料

X-4型显微熔点仪(温度计未校正);美国 Rudolph公司Autopol 1型自动旋光测定仪;美国 Varian INOVA-400型核磁共振仪(TMS内标);美国惠普公司GC-MS5937型质谱仪;(D001×7)强酸型离子树脂为天津南开大学化工厂生产;薄层色谱、柱色谱用硅胶均为青岛海洋化工分厂产品;反相 Rp-18薄层色谱板为德国Merck公司生产;Rp-18柱色谱用硅胶(50 μm)为日本 YMC公司生产;葡聚糖凝胶Sephadex LH-20为瑞士生产;分离提取用溶剂均为工业级重蒸使用。

样品于2008年7月采自贵州省遵义市绥阳县旺草镇宽阔水，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为尖山橙Melodinus fusiformis，标本存放于贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室。

2 提取和分离

255 kg干燥粉碎尖山橙全草用0.05 mol/L盐酸冷浸，浸液通过强酸型离子树脂后，用10% 的氨水碱化，晾干，再用95% 乙醇洗脱浓缩得浸膏1510 g。浸膏经硅胶(200～300目)柱色谱分离，以三氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脱，TLC检测合并，得到18个流份。其中，流份A部分(130 g)经过反复正相硅胶、反相Rp-18和葡聚糖凝胶LH-20柱色谱分离与纯化，分别用三氯甲烷-甲醇(100∶0→0 ∶100)、石油醚-丙酮(100 ∶0→0 ∶100)、水-甲醇(100∶100→0∶100)梯度洗脱，洗脱物再经反复分离纯化，重结晶，得到化合物Ⅰ(1.2 g)，Ⅱ (60 mg)，Ⅲ(560mg)，Ⅳ(21 mg)，Ⅴ(500 mg)，Ⅵ (18.5 g)，Ⅶ (3.0 g)，Ⅷ (14 mg)。同样方法，从流份 B部分 (146 g)得到化合物Ⅸ(90 mg)。

3 结构鉴定

化合物Ⅰ:白色粉末;分子式为C21H24O2N2;［α］D9.7-23.5(CHCl3，C 0.85);EI-MS m/z:336［M］+，305，229，214，196，170，168，154，135，122，121，107，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.00(1H，s，-NH)，7.25(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.17(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.89(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H-12)，5.81(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H-14)，5.73(1H，d，J=10.0 Hz，H-15)3.77(3H，s，-OMe)，1.08(2H，q，J=7.6 Hz，H-19)，0.66(3H，t，J=7.6 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.3(s，C=O)，166.7(s，C-2)，143.5(s，C-13)，137.8(s，C-8)，133.4(d，C-15)，128.0(d，C-11)，125.1(d，C-14)，121.8(d，C-9)，120.9(d，C-10)，109.6(d，C-12)，92.4(s，C-16)，70.4(d，C-21)，55.4(s，C-7)，51.2(q，OCH3)，50.9(t，C-5)，50.8(t，C-3)，44.8(t，C-6)，41.6(s，C-20)，28.7(t，C-19)，27.2(t，C-17)，7.8(q，C-18)。以上数据和文献［7-8］报道的 tabersonine一致，故鉴定该化合物为 tabersonine。

化合物Ⅱ:无色块状结晶(甲醇);分子式为C21H24O3N2;mp 165 ℃;［α］D10.7-288.4(CHCl3，C 0.43)。EI-MS m/z:352 ［M］+，336，321，294，245，221，184，170，135，122，121，107，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.97(1H，s，-NH)，7.07(1H，d，J=8.0 Hz，H-9)，6.39(1H，s，H-12)，6.33(1H，d，J=8.0 Hz，H-10)，5.78(1H，m，H-14)，5.71(1H，d，J=10.0 Hz，H-15)，3.77(3H，s，-OMe)，3.48(1H，d，J=15.6 Hz，H-3)，3.19(1H，d，J=15.6 Hz，H-3)，3.05(1H，brs，H-5)，2.68(1H，brd，H-5)，2.62(1H，brs，H-21)，2.56(1H，d，J=16.4 Hz，H-17)，2.44(1H，d，J=16.4 Hz，H-17)，2.08(1H，brs，H-6)，1.79(1H，brs，H-6)，1.01(1H，m，H-19)，0.88(1H，m，H-19)，0.65(3H，t，J=7.8 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.2(s，C=O)，167.3(s，C-2)，156.0(s，C-11)，144.4(s，C-13)，133.1(d，C-15)，130.3(s，C-8)，124.8(d，C-14)，122.0(d，C-10)，106.9(d，C-9)，97.7(d，C-12)，92.4(s，C-16)，70.1(d，C-21)，54.5(s，C-7)，51.1(q，OCH3)，50.9(t，C-5)，50.6(t，C-3)，44.6(t，C-6)，41.4(s，C-20)，28.4(t，C-19)，26.9(t，C-17)，7.5(q，C-18)。EI-MS、1H NMR 数据与文献［9-10］报道的11-hydroxytabersonine一致，故鉴定该化合物为11-hydroxytabersonine。

化合物Ⅲ:白色块状结晶，分子式为C21H24O3N2，mp 230 ℃。［α］D8.9-78.6(CHCl3，C 1.0)。EI-MS m/z:352［M］+:335，323，309，279，214，194，180，156，138，123，108.1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.04(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.00(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.75(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.70(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，3.80(1H，s，-NH)，3.76(3H，s，-OCH3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:174.1(s，C=0)，149.1(s，C-13)，139.1(s，C-8)，126.9(d，C-11)，121.2(d，C-9)，119.3(d，C-10)，111.1(d，C-12)，67.0(d，C-2)，61.6(s，C-21)，58.0(d，C-15)，55.8(s，C-7)，53.6(d，C-14)，52.0(q，OCH3)，49.2(t，C-5)，48.0(t，C-3)，43.2(d，C-16)，36.2(t，C-6)，35.8(s，C-20)，33.8(t，C-19)，27.6(t，C-18)，26.8(t，C-17)。以上 EI-MS、1H NMR 数据与文献［11-13］报道的 venalstonidine基本一致。B.Das等于1965年首次分得该化合物，但未提供13C NMR数据，本实验首次提供13C NMR数据。

化合物Ⅳ:白色结晶(甲醇);分子式为C21H24O3N2;mp 168 ℃;［α］D11.3-403.8(CHCl3，C 1.0)。EI-MS m/z:352［M］+，335，322，309，295，266，253，238，227，214，180，167，154，138，127，108，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.99(1H，s，-NH)，7.18(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.16(1H，t，J=7.8 Hz，H-11)，6.89(1H，t，J=7.8 Hz ，H-10)，6.81(1H，d，J=7.8 Hz，H-12)，3.78(3H，s，-OCH3)，0.94(2H，m，H-19)，0.74(3H，t，J=7.2 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:168.9(s，C=O)，165.2(s，C-2)，143.1(s，C-13)，137.6(s，C-8)，127.8(d，C-11)，121.4(d，C-9)，120.5(d，C-10)，109.3(d，C-12)，91.1(s，C-16)，71.2(d，C-21)，56.3(d，C-15)，54.6(s，C-7)，52.1(d，C-14)，51.1(t，C-5)，51.0(q，OCH3)，49.7(t，C-3)，44.1(t，C-6)，37.2(s，C-20)，26.4(t，C-19)，23.3(t，C-17)，7.2(q，C-18)。以上数据与文献［14-15］报道的pachysiphine一致，故鉴定该化合物为pachysiphine。

化合物Ⅴ:无色块状结晶(甲醇);分子式为C21H24O2N2;mp 138 ℃;［α］D8.8-52.4(CHCl3，C 0.84)。EI-MS m/z:336 ［M］+，308，242，229，216，156，135，122，107。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.09(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.05(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.77(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.72(1H，d，J=7.2 Hz，H-12)，5.75(1H，m，H-14)，5.53(1H，d，J=9.6 Hz，H-15)，3.88(1H，s，-NH)，3.74(3H，s，-OCH3)，3.50(2H，d，J=10.0 Hz，H-3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:174.2(s，C=0)，149.3(s，C-13)，140.0(s，C-8)，132.8(d，C-15)，126.9(d，C-11)，126.9(d，C-14)，121.5(d，C-9)，119.4(d，C-10)，111.3(d，C-12)，67.0(d，C-21)，66.8(s，C-2)，56.3(s，C-7)，51.9(q，OCH3)，50.2(t，C-5)，49.2(t，C-3)，43.6(d，C-16)，36.4(t，C-6)，35.2(s，C-20)，34.2(t，C-19)，31.7(t，C-18)，29.7(t，C-17)。以上数据与文献［11，16］报道的 venalstonine一致，故鉴定该化合物为venalstonine。

化合物Ⅵ:无色块状结晶(甲醇);分子式为C21H22O3N2;mp 192 ℃;［α］D8.5183.8(CHCl3，C 1.09)。EI-MS m/z:350［M］+，335，322，291，263，230，199，134，91，77。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.14(1H，s，-NH)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.19(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，7.08(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.77(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，5.72(2H，m，H-14，15)，5.72(1H，m，H-19)，4.94(1H，d，J=17.2 Hz，H-18)，4.81(1H，d，J=10.8 Hz，H-18)，3.59(3H，s，OCH3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:170.5(s，C-2)，169.4(s，C=O)，142.2(d，C-19)，134.3(s，C-13)，131.5(d，C-15)，128.7(s，C-8)，127.5(d，C-11)，126.9(d，C-9)，123.7(d，C-10)，122.8(d，C-14)，115.6(d，C-12)，114.6(t，C-18)，83.6(d，C-21)，63.6(s，C-16)，57.7(s，C-7)，53.3(t，C-5)，52.6(q，OCH3)，47.7(t，C-3)，44.0(t，C-17)，46.6(s，C-20)，39.8(t，C-6)。以上数据与文献［17］报道的 scandine一致，故鉴定该化合物为scandine。

化合物Ⅶ:白色块状结晶(甲醇);分子式为C21H22O4N2;mp 180 ℃;［α］D8.5254.5(CHCl3，C 1.00)。EI-MS m/z:366［M］+，351，338，307，279，246，226，134，120。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.78(1H，s，-NH)，6.92(1H，s，H-9)，6.52(1H，d，J=8.0 Hz)，6.40(1H，d，J=8.0 Hz)，5.86(2H，m，H-14，15)，5.76(1H，dd，J=17.0，10 Hz，H-19)，5.03(1H，d，J=17.0 Hz，H-18)，4.90(1H，d，J=10.0 Hz，H-18)，3.55(1H，s，OCH3)，3.03(1H，d，J=13.6 Hz，3-H)，2.68(1H，d，J=13.6 Hz，3-H)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:170.0(s，C-2)，168.1(s，C=O)，152.7(s，C-10)，142.8(d，C-19)，132.5(d，C-15)，129.0(s，C-13)，127.2(s，C-8)，121.7(d，C-14)，116.1(d，C-12)，114.6(d，C-9)，114.6(d，C-11)，113.8(t，C-18)，81.9(d，C-21)，62.3(s，C-16)，58.8(s，C-7)，52.7(q，OCH3)，52.6(t，C-5)，46.3(t，C-3)，44.7(s，C-20)，43.7(t，C-17)，36.1(t，C-6)。以上数据与文献［17］报道的10-hydroxy scandine一致，故鉴定该化合物为10-hydroxy scandine。

化合物Ⅷ:白色结晶(丙酮);分子式为C21H22O4N2;mp 241℃(分解);［α］D13.8148.5(CHCl3，C 1.00)。EI-MS m/z:366 ［M］+:350，335，322，307，291，235，230，198，130，115。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.85(1H，s，-NH)，8.13(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.24(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，7.13(1H，t，J=7.6Hz H-10)，6.84(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，5.88(1H，d，J=10.4 Hz，H-18)，5.13(1H，d，J=17.2 Hz，H-19)，5.04(1H，d，J=10.4 Hz，H-18)，4.00(1H，s，H-21)，3.57(3H，s，OCH3)，3.07(1H，d，J=14.0 Hz，H-17)，2.48(1H，d，J=14.0 Hz，H-17)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.2(s，C-2)，168.3(s，C=O)，142.6(d，C-19)，136.5(s，C-13)，131.9(d，C-15)，131.4(d，C-9)，129.8(d，C-11)，126.7(s，C-8)，124.8(d，C-14)，116.5(d，C-10)，115.8(d，C-12)，115.7(t，C-18)，92.9(d，C-21)，66.4(t，C-5)，62.9(t，C-3)，62.6(s，C-16)，59.9(s，C-7)，52.6(q，OCH3)，50.2(s，C-20)，42.8(t，C-17)，34.8(t，C-6)。以上数据与文献［6］报道的scandine Nb-oxide一致，故鉴定该化合物为 scandine Nb-oxide。

化合物Ⅸ:无色粉末，分子式为 C21H24O3N2;mp 230 ℃;［α］D10-167.2(CHCl3，C 0.20)。EIMS m/z:352［M］+307，275，229，214，204，191，168，137，123，108。1H NMR(CCl3，400 MHz)δ:7.62(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，7.34(1H，dd，J=7.2，7.6 Hz，H-10)，7.14(1H，dd，J=7.2，7.6 Hz，H-11)，5.50(1H，d，J=6.8 Hz，H-19)，4.48(1H，d，J=5.2 Hz，H-3)，4.07(1H，d，J=16.8 Hz，H-21)，3.88(1H，d，J=4.0 Hz，H-5)，3.75(1H，dd，J=4.4，15.2 Hz，H-6)，3.70(3H，s，OCH3)，3.43(1H，s，H-15)，3.21(3H，s，OCH3)，3.09(1H，d，J=17.2 Hz，H-21)，2.68(1H，m，H-14)，2.22(1H，d，J=15.2 Hz，H-6)，1.91(1H，d，J=3.6 Hz，H-16)，1.76(1H，m，H-14)，1.54(3H，d，J=6.8 Hz，H-18).13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:190.7(s，C-2)，171.6(s，C-17)，155.6(s，C-13)，145.4(s，C-8)，136.6(s，C-20)，128.0(d，C-11)，125.0(d，C-10)，123.2(d，C-12)，121.0(d，C-19)，120.7(d，C-9)，89.9(d，C-5)，56.0(d，C-16)，54.6(q，OCH3)，53.5(s，C-7)，51.5(d，C-3)，51.5(q，C-22)，50.3(t，C-21)，38.4(t，C-6)，35.8(t，C-14)，32.6(d，C-15)，12.9(q，C-18)。以上数据与文献［18］报道的5-methoxystrictamine一致，故鉴定该化合物为5-methoxystrictamine。

［致谢］核磁共振波谱数据和质谱数据由贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室仪器室提供。

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