20(S)-原人参二醇干混悬剂的处方及初步质量研究

毛晶晶，张彤，王冰，陶建生

(上海中医药大学，上海201203)

20(S)-原人参二醇［20(S)-Protopanaxadiol］作为一种从中药中提取分离得到的单体化合物，具有显著的抗抑郁作用，而且毒副作用很小［1-8］。但20(S)-原人参二醇不溶于水，口服生物利用度很不理想，限制了其临床应用［9］。干混悬剂指难溶性固体药物与适宜辅料制成的粉末状物或者粒状物，临用时加水振摇即可分散成混悬液供口服的固体制剂［10］。干混悬剂作为一种新剂型，药物吸收良好，不受食物的影响，制成混悬剂后颗粒分布均匀，在胃肠的分布面积大，吸收快，生物利用度高，与液体制剂相比，携带使用方便［11-12］。本实验首次制备了20(S)-原人参二醇干混悬剂，并建立了其质量控制方法。

1 仪器和材料

Agilent1200系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，TU—1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，BS124S型电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)，XS105电子天平(瑞士梅特勒托利多公司)，T2F三维混合机(华尔宝机械有限公司)，DV-Ⅱ+Pro黏度计(美国Brookfieid公司)，Naso—ZS 90激光粒径测定仪(英国Malvern公司))，FC160锤式粉碎机(上海中药机械厂);20(S)-原人参二醇(上海中药创新研究中心，批号:20090216)，20(S)-原人参二醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111747-200501)，泊洛沙姆(Poloxamer)188(BASF公司，批号:100701)，Avicel CL 611(FMC公司，Lot NO.ENO 9820383)，尼泊金甲酯(无锡江大百泰科技有限公司，批号:2010722)，尼泊金丁酯(无锡江大百泰科技有限公司，批号:20110617)，甜菊素(天津南大凯泰药业有限公司，批号:110711)

2 方法与结果

2.1 20(S)-原人参二醇干混悬剂的处方筛选与制备

2.1.1 确定因素和水平数根据单因素考察结果及干混悬剂的其他要求，确定以处方中Avicel CL611用量(A)，Poloxamer188用量(B)，20(S)-原人参二醇用量(C)为主要考察指标，用L9(34)正交表，设计3因素3水平的正交实验，因素水平表见表1。

表1 因素水平表Tab.1 Levels of factors

2.1.2 正交试验按照正交实验设计表要求，取20(S)-原人参二醇与各种辅料制备20(S)-原人参二醇干混悬剂，由于放置3 h后的沉降体积和再分散性均符合药典规定，故以混悬液的含有量均匀性RSD(%)和黏度η(mPa·s)为判断指标优选工艺处方。实验设计及结果见表2。

表2 正交试验结果Tab.2 Results of orthogonal tests

含有量均匀性测定方法为:从9次正交试验的混悬液中，分别取上、中、下3层的混悬液各1 g，精密称定，于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声20 min，过滤，取续滤液进样，测含有量，计算三层的含有量差异RSD(%)。RSD越小，表明混悬液中药物的含有量均匀性越好，服用的时候剂量越精确，故设定评分规则见表3。

表3 含有量均匀性评分规则Tab.3 Scoring rule of content uniformity

黏度的测定方法为:利用数字黏度仪，选择28号转子，转速为30.0 r/min，温度为室温(25℃)，记录黏度η(mPa·s)。为使混悬液中微粒悬浮而不沉降，药液需要有一定的黏度，但黏度太大，不仅口感差，而且难以倾倒完全，故设定评分规则见表4。实验结果见表5，方差分析见表6。

表4 黏度评分规则Tab.4 Rating rule of viscosity

表5 正交试验结果Tab.5 Results of orthogonal tests

表6 方差分析Tab.6 Analysis of variance

总分的计算规则:含有量均匀性的权重系数为0.6，黏度的权重系数为0.4。

结果经直观分析可知，以含有量均匀性和黏度为综合考察指标时，三因素的影响次序有所不同，分别为A＞B＞C，筛选出的最优水平搭配为A1B1C1，即Avicel CL611用量为1.5 g，Poloxamer188用量为0.3g，载20(S)-原人参二醇量为0.05 g。

方差分析可知，A、B、C三因素对混悬液的质量影响均无显著性差异。从提高载药量的角度考虑，C因素选择第三个水平比较合适，故最终确定最优处方为A1B1C3，即Avicel CL611用量为1.5 g，Poloxamer188用量为0.3 g，载20(S)-原人参二醇量为0.07 g。

2.1.3 处方20(S)-原人参二醇50 g，Avicel CL611 1 071 g，Poloxamer 188 214g，甜菊素10 g，尼泊金甲酯5 g，尼泊金丁酯5 g，制成1 000包。2.1.4制备工艺将Poloxamer 188粉碎并过100目筛，称取适量细粉与主药和其他辅料，用三维混合机进行混合(67 r/min，2 min)，用复合铝箔袋分装成1 000袋，每袋1.335 g，即可。

2.2 定量测定

2.2.1 色谱分析条件固定相为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为乙腈-水(90∶10);检测波长203 nm;柱温25℃;体积流量1.0 mL/min;进样量20 μL。见图1。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 对照品溶液的制备取20(S)-原人参二醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成1 mL含1.216 mg的溶液，即得。

2.2.2.2 供试品溶液的制备称取20(S)-原人参二醇干混悬剂0.1 g，置于具塞量瓶中，加10 mL无水乙醇适量，密塞，超声(功率200 W，频率50 kHz)10 min，放冷，再用无水乙醇定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.2.3 阴性样品的制备按供试品溶液制备方法制备缺20(S)-原人参二醇的空白辅料样品溶液。

2.2.3 线性关系的考察精密称取对照品适量，制成质量浓度为1 216 μg/mL的对照品母液，分别精密吸取适量稀释成质量浓度为15.2、30.4、60.8、243.2 μg/mL对照品溶液，分别取上述对照品溶液及母液20 μL注入液相色谱仪，测定，记录峰面积积分值，结果表明:20(S)-原人参二醇在15.2～1 216 μg/mL质量浓度范围内呈良好的线性关系。以峰面积A为纵坐标，质量浓度C(μg/mL)为横坐标，计算得回归方程为A=11.412 6C+174.39(r=0.999 8)。

2.2.4 精密度试验取2.2.3项下30.4、60.8、243.2 μg/mL对照品，分别于1 d内(n=5)、连续5 d(n=5)，按2.2.1项下进行测定，记录色谱图峰面积。结果低、中、高3个剂量的日内精密度RSD分别为1.88%、1.61%和1.54%;日间精密度分别为0.85%、0.77%和0.41%。结果表明，日内及日间精密度均符合2010年版《中国药典》有关规定。

图1 20(S)-原人参二醇对照品(A)、空白辅料(B)、供试品(C)HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of 20(S)-protopanaxadiol(A)，blank accessories(B)and sample(C)

2.2.5 稳定性试验取供试品溶液，在0、1、2、4、6、8、12、24、48 h分别进样20 μL，依法测定，计算峰面积的RSD。结果样品溶液在考察时间范围内有很好的稳定性，RSD为1.39%。

2.2.6 重复性试验精密称取供试品5份(批号:20110707)，按2.2.1项下重复测定20(S)-原人参二醇的质量浓度，计算平均值和RSD，结果本法重复性良好，RSD为0.33%。

2.2.7 加样回收率精密称取对照品适量，加入20(S)-原人参二醇干混悬剂(20110707)中，按

2.2.2.2 项下制备样品供试液。按2.2.1项高效液相色谱条件项下进行定量测定，计算加样回收率，结果见表7，表中数据表明，RSD＜3%，回收率良好。

表7 加样回收率试验结果(n=9)Tab.7 Results of recovery tests(n=9)

2.2.8 定量测定取3批次样品各10包，混匀后精密称定20(S)-原人参二醇干混悬剂0.1 g于10 mL量瓶中，加适量无水乙醇，密塞，超声10 min，放冷，再补足无水乙醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液进行HPLC测定，外标法计算20(S)-原人参二醇质量分数。结果3批次样品质量分数分别为3.40%、3.50%、3.50%，RSD分别为0.72%、1.51%、0.54%。

3 加速稳定性试验

将3批20(S)-原人参二醇干混悬剂样品(批号:20110823、20110824、20110825)按市售药品包装，在40℃、相对湿度75%的恒温恒湿箱中放置3个月，分别于0、l、2、3个月取样，测定各项质量指标，结果见表8。

表8 20(S)-原人参二醇干混悬剂加速试验结果Tab.8 Accelerating test results of 20(S)-protopanaxadiol dry suspension

结果表明，3批20(S)-原人参二醇干混悬剂经过加速试验3个月，检测各项质量指标，均符合要求。

4 讨论

4.1 在确定处方之前，对大量助悬剂进行了筛选，包括海藻酸钠、黄原胶、卡波姆、PVP、HPMC、MC、HPC、L-HPC、CMCNa、PVA、PEG、Avicel CL611、PVPP、EC等，最后选择以Avicel CL611作为干混悬剂的助悬剂，因其具有高触变性，非常适合作为干混悬剂的助悬剂。由于20(S)-原人参二醇属于水难溶性物质，需要润湿剂降低其在水溶液中的表面张力，而在润湿剂的选择过程中，考察了十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠和Poloxamer 188，最后选择Poloxamer 188作为润湿剂，不仅辅料安全性好而且润湿效果最好。在对干混悬剂进行正交试验处方筛选时，将含有量均匀性和黏度两项综合指标作为评价处方的依据。

4.2 按本研究的处方和方法制备的20(S)-原人参二醇干混悬剂，工艺简单，且该剂型服用方便，适合抑郁症患者长期服用。经3批样品的3个月加速试验考察，结果表明样品稳定性良好，工艺可行，质量可控。采用高效液相色谱法测定20(S)-原人参二醇含有量时，专属性强、准确度好、灵敏度高、辅料无干扰，方法可行，可用于该样品的质量控制。

［1］张莉，李霞，田建卿，等.人参、西洋参及其主要活性成分的抗糖尿病作用研究进展［J］.药学服务与研究，2009，9(2):122-125.

［2］窦德强，靳玲，陈英杰.人参的化学成分及药理活性的研究进展与展望［J］.沈阳药科大学报，1999，16(2):151-155.

［3］刘国樵，郭端莱，钟荣辉，等.绞股蓝中2α-羟基人参二醇皂甙的分离和鉴定［J］.中药材，1996，19(10):30-33..

［4］惠永正，杨子荣，杨志奇，等.20(S)-原人参二醇在制备抗抑郁药物中的应用:中国，CN1895256A［P］.2007-01-17.

［5］Xu C，Teng J，Chen W，et al.20(S)-protopanaxadiol，an active ginseng metabolite，exhibits strong antidepressant-like effects in animal tests［J］.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2010，34(8):1402-1411.

［6］吴炉飞，蔡兵，张文静，等.20(S)-PPD对慢性应激性抑郁大鼠的行为学影响［C］//第五届中国中医药实验动物科技交流会，上海:2009.

［7］张文静，蔡兵，吴炉飞，等.20(S)-原人参二醇对嗅球损毁抑郁模型大鼠抗抑郁作用研究［C］//第五届中国中医药实验动物科技交流会，上海:2009.

［8］蔡兵，张文静，吴炉飞，等.20(S)-原人参二醇抗抑郁作用研究［C］//第五届中国中医药实验动物科技交流会，上海:2009.

［9］韩美华，陈婧，陈士林，等.20(S)-原人参二醇药质体的制备及体外评价［J］.中国中药杂志2010，35(7):842.

［10］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版二部［S］.北京:中国医疗科技出版社，2010:附录IO:15.

［11］宋恬，何再安，刘焱文，等.消旋卡多曲干混悬液的制备与稳定性考察［J］.医药导报，2007，26(1):57-59.

［12］陆军，曹芳，纪国宏，等.萘丁美酮干混悬剂的制备及其初步稳定性研究［J］.华西药学杂志，2005，20(1):27.