利眠宁在急性中毒大鼠体内的分布1）

张晓飞，孙红涛，尉志文，贠克明

利眠宁（chlordiazepoxide）又称氯氮卓、甲氨二氮卓，属于长效苯二氮卓类安眠镇静药，常用于抗焦虑、催眠和酒精戒断症状的治疗。利眠宁在临床上已应用多年，服用过量中毒、投毒案例报道较多［1－3］。目前国内外关于利眠宁的研究主要集中在利眠宁的药效学及药动学，作用机制，毒理作用，与其他药物的相互作用及机体内利眠宁的含量测定［4－8］，与利眠宁中毒和死因判定有关的法医毒物动力学研究仅有案例报道［9，10］。本实验建立利眠宁大鼠的急性中毒动物模型，并对不同剂量利眠宁在大鼠体内的分布进行研究，为利眠宁中毒案例的临床治疗和司法鉴定提供参考依据。

1 材料与方法

1．1 实验动物与试剂 大鼠24只，雌性，体重250g±20g，山西医科大学动物中心提供，实验前隔夜禁食。利眠宁标准品和丙基解痉素（SKF525A，内标）对照品购于国家药品和生物制品控制研究所；其余试剂均为国产分析纯。

1．2 动物分组、染毒与样品的采取 24只大鼠随机分为实验组（0．5倍LD50剂量组、2倍LD50剂量组、4倍LD50剂量组）和对照组，各6只。实验组大鼠分别以0．3g／kg，1．2g／kg和2．4g／kg（根据人与大鼠体表面积系数推断）灌胃，给药后3h处死，解剖后取心、肝、脾、肺、肾、脑、心血、肌肉和睾丸，气相色谱－质谱联用法和气相色谱法检测其中利眠宁含量。

1．3 样品处理 取组织样品1g匀浆，血样1mL，加入内标物SKF525A12μg，加10%NaOH至pH10，混匀后加乙醚5mL，混匀、离心、提取，把上清液转移至置另一试管里，重复萃取一次，合并萃取液，40℃水浴中挥干。残渣以20μL乙醇定容，1 μL进样。

1．4 仪器分析条件 气相色谱－质谱联用仪（Finnigan）条件：DB－5MS毛细管柱（30m×0．25mm×0．25μm），EI源70ev；质量范围：50～650，柱温：初始温度200℃保持1min，以20℃／min升温至280℃保持6min；离子源温度：250℃，传输线温度：250℃，载气：He 1．0mL／min。

气相色谱（GC2010，日本岛津）条件：载气为氮气，流速1．0 mL／min；色谱柱：DB－5（30m×0．25mm×0．25μm）毛细管柱；柱温：初始温度200℃保持1min，以20℃／min升温至280℃保持6min；进样口温度300℃，不分流方式进样；检测器NPD，温度300℃。

1．5 统计学处理 采用SPSS17．0分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示。

2 结 果

2．1 利眠宁及内标SKF525A的气相色谱和气相色谱－质谱图（见图1～图4）

图1 染毒犬血中利眠宁和SKF525A气相色谱图（NPD）

图2 染毒犬血中利眠宁和SKF525A气相色谱－质谱联用选择性离子质量色谱图（SIM）

图3 利眠宁的全扫描质谱图

图4 利眠宁标准全扫描质谱图

2．2 工作曲线 分别在空白血和空白肝中添加利眠宁及内标SKF 5 2 5A各适量，配制成含有利眠宁0．0 5μg／mL、0．1 μg／mL、0．5μg／mL、1μg／mL、5μg／mL、10μg／mL、16μg／mL、32μg／mL（或 μg／g），SKF525A12μg／mL（或 μg／g）的系列样品，按组织样品处理方法处理并检测。回归方程、线性范围、相关系数（r）及检出限（LOD）见表1。

表1 组织器官中利眠宁检测的工作曲线

2．3 动物表现 实验组大鼠经口灌胃利眠宁之后，表现为倦睡，但不引起深度睡眠，易被唤醒，大剂量时可导致昏迷，呼吸、心跳停止等中毒症状。

2．4 死后分布（见表2） 0．5倍LD50实验组大鼠体内利眠宁的平均含量从高到低依次为：胃、肝、脑、脾、睾丸、肾、肺、肌肉、心血和心脏。2倍LD50实验组大鼠体内利眠宁的平均含量从高到低依次为：胃、肝、肺、脾、心脏、心血、脑、肾、睾丸和肌肉。4倍LD50实验组大鼠体内利眠宁的平均含量从高到低依次为：胃、肝、脑、肺、肾、睾丸、肌肉、脾、心脏和心血。

表2 不同剂量中毒大鼠体内的利眠宁含量（±s）μg／g

表2 不同剂量中毒大鼠体内的利眠宁含量（±s）μg／g

样品 0．5LD50 2LD50 4LD50心血32．1±10．7 230．7±20．7 17．3±6．7心脏 28．3±13．3 267．1±59．3 20．9±5．5肝脏 78．7±14．4 446．8±69．9 360．7±60．9脾脏 60．7±12．3 300．7±78．9 40．3±12．9肺脏 44．9±10．8 425．0±62．2 214．5±36．6肾脏 49．2±10．7 143．0±24．0 174．5±43．1大脑 68．9±18．9 150．3±68．4 242．5±54．8肌肉 33．8±7．8 57．8±12．9 44．9±15．9睾丸 53．0±18．3 134．8±52．2 50．7±12．5胃 254．1±34．2 815．3±91．0 899．9±82．3

3 讨 论

怀疑利眠宁中毒或死亡相关者体内利眠宁死后分布规律有可能成为判定利眠宁中毒或死亡的依据之一。本实验结果显示，死后分布结果显示不同剂量灌胃后，大鼠体内利眠宁含量胃、肝和脑的含量较高，这与入体途径，利眠宁在体内的转化途径以及主要作用于脑组织有关；心血中浓度较低，表明利眠宁随血液循环到达各组织脏器后，更容易与组织蛋白结合，广泛分布与各组织和体液中。3个剂量组大鼠分布特征基本相同，利眠宁在大鼠体内的分布规律不存在剂量依赖性。

在利眠宁中毒或致死的法医学鉴定中应注意以下事项：全面解剖，仔细观察胃内容中有无残留药片，若有残留未消化药物，可以迅速判断是否利眠宁；全面取材，进行定性定量分析。可取胃内容、肝脏、脑和血液等为检材进行毒物分析；结果判定时，应注意不同脏器中利眠宁的含量关系，肺中有无吸入的药物及其含量。并应同时注意血药浓度是否达中毒浓度。

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