RH(-)红细胞洗涤去干甘油的制备过程及体会

宋春红

北京市通州区中心血站，北京 101100

目的应用ACP215型血液处理仪制备甘油化红细胞、去甘油化红细胞，观察去甘油化红细胞的质控指标，并对操作方法和制备效果进行评价。方法随机取10袋红细胞悬液（2U/袋），于采血后10d应用215型血液仪处理制备甘油化红细胞，-70℃冰箱保存30d，37℃融化，再应用215型血液处理仪制备去甘油化红细胞。

解冻红细胞洗涤前后留取样本检测冰冻红细胞质量。结果红细胞回收率(84±4)%，游离血红蛋白浓度(0.31±0.12)g/L，体外溶血试验(33±15)%，甘油残余量(6.3±2.4)g/L。细菌培养试验阴性。结论ACP215型血液处理仪可全程自动化无菌制备冰冻红细胞，人为操作误差小，实现了稀有血型红细胞的长期保存及使用（10年）但是临床使用前必须解冻去甘油，使洗涤后的红细胞中甘油残留量＜10g/L，因此，解冻去甘油的制备过程至关重要。

1 临床资料

本站2010年和2011年共制备解冻去甘油红细胞476μ。机器与材料：HaemoneticsACP215型血液处理仪（美国血液技术公司），-70C三洋专用冰箱 （日本SANYO公司），37℃水浴箱 （国产），无菌接驳机（泰尔茂），库尔特血细胞计数仪（美国产品），721型分光光度计（国产）。REF235一次性血液处理耗材，羟乙基淀粉（130/0.4Nacl）9%的高渗盐水，0.9%等渗盐水，电子称，血液测温仪。

2 制备过程

将-80℃RH(-)红细胞解冻，冰冻红细胞取出后迅速溶于37℃水浴内4～6min，同时不断摇动使血袋与水充分接触加速融化，切记不能用手用力挤压血袋，以免血袋破裂或造成红细胞的机械性损伤，融化程度以血袋内无冰晶内为准，测试血袋表面温度为20～24℃，并称重血液。

ACP215全自动处理仪的安装，按照标准操作规程选择去甘油化程序进行正确安装，同时对管路感知器校准离心杯安装测试，添加管路是否打开，用无菌接驳机连接红细胞袋和耗材的红色条纹管路，确保融化的红细胞悬液在管路中密闭无渗漏。将红细胞血袋放置振荡器上。

将洗涤所需的参数设置好，按STRT键开始去甘油过程，首先用高渗盐水预冲160mL（单份80mL）然后机器进入高渗盐水平衡静止时间为150s。

大稀释步骤一：首先加入稀释液羟乙基淀粉（羟乙基淀粉有保护红细胞的作用）340mL（单份170mL），然后机器进入平衡静止时段，平衡时间为60s，平衡完毕等待洗涤的红细胞液体回吸到离心杯，此时机器进行高速离心，将上清液逐渐移出杯体，随后机器有一步无菌测试检测需等待15s，测试完毕然后进入小冲洗过程，冲洗离心杯中的小红细胞，冲洗结束后再次进入等待时段(此时等待5s)5s后离心机进行刹车，此时管路自动进入关闭状态，只有废液管路开放，排除离心杯中的气体，机器自动将血液移出到血袋，抽空离心杯，此时需要180s。

大稀释步骤二：大稀释步骤1完成后，机器进入2步稀释过程，首先加入的还是羟乙基淀粉大约160mL，次过程继续加入稀释液不足部分换生理盐水，滴加完毕后平衡静置60s，将洗涤的悬浮红细胞再次回吸收到离心杯，进行第二次离心，再次去除上清液，此时血液中的甘油已大部去除，少量剩余部分将在小稀释步骤再次去除。

小稀释步骤：小稀释洗涤溶液均为等渗盐水，洗涤次数为6次，,过程为将等渗盐水加入离心杯中，流出液离开离心杯进入制品废液袋。管路感知器监测游离血红蛋白水平。离心机停止运转，离心杯中30mL内容物移到红细胞袋中，经45s延迟时间，离心机重新启动，30mL内容物从红细胞袋返回到离心杯中，再离心60s,如此重复6次。

第 1 次60mL（流速 50mL）；第 2 次 80mL（流速 50mL）；第 3次100mL（流速 75mL）；第 4 次 130mL（流速 75mL）；第 5 次 160mL（流速 100mL）；第 6 次 300mL（流速 100mL）。

小稀释步骤进入第6次洗涤时，机器会有提示，观察上次废液的颜色是否澄清，此时工作人员需观察废液管路，如果澄清按YES键继续，成品全部回收到成品袋。如果觉得不澄清按NO键,机器将在继续加盐水洗涤1次。整个洗涤去甘油过程共用洗涤溶液约1900mL,时间为62min。

3 制备结果

ACP215全自动血液处理仪所制备的RH(-)红细胞，符合《全血及成分血质量要求》GB18469-2001标准。检测项目结果如下。

解冻红细胞洗涤前后留取样本检测红细胞质量。结果红细胞回收率(84±4)%，游离血红蛋白浓度(0.31±0.12)g/L，体外溶血试验(33±15)%，甘油残余量(6.3±2.4)g/L。细菌培养试验阴性。ACP215型全自动血液处理仪可全程自动化无菌制备去甘油化红细胞，人为操作误差小。实现了稀有血型红细胞的长期保存及使用（十年）但是临床使用前必须解冻去甘油，使洗涤后的红细胞中甘油残留量＜10g/L，因此，解冻去甘油的制备过程至关重要。

ACP215全自动血液处理仪去甘油的红细胞质量符合国标要求，每一步控制过程达到全程质控的目的。制备结果显示红细胞洗涤机去甘油红细胞回收率高，污染零风险，制品中各项指标符合国家成分质量标准。

4 结论

ACP215全自动血液处理仪去甘油洗涤方便快捷并能提高冰冻去甘油化红细胞质量，基本实现冰冻红细胞的全自动制备（除更换液体），程序化可最大程度减少人为差错事故的发生，保证产品质量；自动化操作减少了劳动强度，可做到一人多机操作。因为对流速的精确控制，更好地满足临床抢救用血需要。

[1] 邱艳.全血成分血质量要求与血液标准化[S].北京：中国标准出版社,2003ISBN7-5066-3285-5.

[2] 《中华人民共和国国标准化法》,1988年12月29日第七届全国人民代表大会常务委员会第五次会议通过.

[3] 《中华人民共和国产品质量法》,1993年2月22日第七届全国人民代表大会常务委员会第三十次会议通过；根据2000年7月8日第九届全国人民代表大会常务委员会第十六次会议通过.