高效液相法测定恒古骨伤愈颗粒中橙皮苷含量

2012-01-23罗标

河北中医 2012年6期

罗标

(河北省药品认证审评中心，河北石家庄 050091)

恒古骨伤愈颗粒是由陈皮、红花、三七、杜仲、人参、黄芪、洋金花、钻地风、鳖甲9味中药加工而成的复方制剂，有活血益气、补益肝肾、接骨续筋、消肿止痛及促进骨折愈合等功效，临床上主要用于新鲜骨折及陈旧骨折、股骨头坏死、骨关节病、腰椎间盘突出症等病的治疗［1］。为有效控制药品质量，笔者利用高效液相色谱(HPLC)法对陈皮中主要成分橙皮苷的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Aglient 1100 HPLC仪(包括四元泵、紫外检测器、自动进样器)(美国安捷伦)，电子分析天平(Metters AE－163)(瑞士梅特勒)，KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 药品及试剂恒古骨伤愈颗粒(安国市天下康制药股份有限公司，批号080801、080802、080803)，橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110721－200512);乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 C18柱(Shimadzu ODS，4.6 mm ×150 mm，5 μm)，以乙腈－0.1% 磷酸溶液(19∶81)为流动相，检测波长为283 nm，流速为1 mL/min，柱温为室温。此条件下色谱峰峰形对称，分离度良好，理论板数按橙皮苷峰计算，应不低于5 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每mL含橙皮苷50 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备取装量差异项下的恒古骨伤愈颗粒，研细，取0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性溶液制备按恒古骨伤愈颗粒处方配比，取去除陈皮的其他药味，按2.2.2项下方法制备阴性溶液。

2.3 专属性试验分别取对照品、供试品及阴性溶液10 μL，按照2.1项色谱条件下进样测试。结果表明，阴性色谱中在橙皮苷相应保留时间处无色谱峰出现，表明其他药味不干扰橙皮苷的检出。见图1、2、3。

2.4 线性关系考察分别精密吸取浓度为0.103 5 mg/mL 的橙皮苷对照品溶液 1、2、5、10 μL，浓度为 0.190 0 mg/mL的橙皮苷对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程。回归方程为橙皮苷 Y=1 763.184 8X－0.340 1，r=0.999 8。结果显示，橙皮苷进样量在0.103 5～1.900 0 μg范围内呈良好的线性关系。见图4。

图1 橙皮苷对照品溶液HPLC图

图2 供试品溶液HPLC图

图3 缺陈皮阴性对照溶液HPLC图

2.5 稳定性试验取同一份供试品溶液10 μL，分别在0、0.5、2、5、7.5、15 h 向高效液相色谱仪进样，考察样品15 h稳定性。结果显示，橙皮苷峰平均峰面积为859.172，相对标准偏差(RSD)=0.99%，表明供试品溶液在15 h内稳定。

图4 橙皮苷线性关系图

2.6 重复性试验取同一批样品，分别精密称取0.32、0.40、0.48 g各3 份，按2.2.3 项下方法制备供试品溶液，按2.1项色谱条件进行测定，计算RSD。结果显示，橙皮苷平均含量为3.142 2 mg/g，RSD=0.32%，表明重复性良好。见表1。

表1 橙皮苷重复性试验结果

2.7 回收率试验精密称取已知含量(3.142 2 mg/g)的恒古骨伤愈颗粒0.2 g，精密加入3种不同浓度的橙皮苷对照品甲醇溶液25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得。按2.1项色谱条件进行测定，计算回收率。结果显示，橙皮苷平均回收率为98.80%，RSD=0.95%，表明回收率良好。见表2。