硫化氢在重症急性胰腺炎患者血浆中的表达及意义

黄惊鸿，卢根林，斯伟宏，邓勇

1.浙江省义乌市中心医院普通外一科（义乌322000）

2.青海大学附属医院肝胆胰外科（西宁810000）

硫化氢是继NO和CO之后的第三个气体信号分子，H2S在心血管疾病[1]、肠缺血-再灌注损伤大鼠肠黏膜屏障、肝脏功能障碍起保护作用[2，3]，具有抑制炎症反应效应[4]。然而H2S在重症急性胰腺炎患者血浆表达水平及其意义，国内外文献鲜见报道。我们选择青海大学附属医院及浙江省义乌市中心医院2005年9月—2010年12月间重症急性胰腺炎患者进行检测，报告如下。

1 材料与方法

1.1 分组A组共40例，男22例，女18例；均无高血压、慢性阻塞性肺病、冠心病、糖尿病等基础疾病，符合重症急性胰腺炎的诊断标准。年龄（50.5±12.5）岁，病程（36.17±7.56）h，体重（47.43±7.12）kg。选择同期健康体检者40例为正常对照组(B组)。

1.2 主要试剂和仪器敏感硫电极和PXS-270离子计购于上海雷磁仪器厂，TNF-α、IL-6、NO、hsCRP试剂盒购自南京建成生物工程研究所，ELx800酶标仪为美国Bio-TEK公司；5417R低温高速离心机为德国Eppendorf公司。

1.3 标本采集B组禁食12 h,清晨空腹抽肘静脉血6 mL。所有病人均就诊时抽血。室温静止30 min后3000 r/min离心15 min，分离血浆，取3 mL置于-80℃冰箱冷冻待测。血浆统一编号保存，各项指标均统一标准，一批完成检测。

1.4 检测指标及方法ELISA法测定血浆中TNF-α、IL-6、hsCRP表达，敏感硫电极法[5]测定血浆H2S浓度；化学法[6]测定血浆NO含量。

1.5 统计学方法所有数据均用SPSS 13.0统计软件包进行统计处理。计量资料用(±s)表示，采用两独立样本均数t检验，相关性采用直线相关分析，以P＜0.05为显著性差异标准。

2 结果

2.1 重症急性胰腺炎组TNF-α、IL-6、hsCRP、NO、H2S均显著高于正常对照组（P＜0.01），详见表1。

2.2 指标间的相关性H2S与TNF-α、IL-6、hsCRP、NO呈正相关（r=0.612、0.743、0.629、0.649,P＜0.01）。

表1 两组人血浆TNF-α、IL-6、hsCRP、NO、H2S的水平（±s）

表1 两组人血浆TNF-α、IL-6、hsCRP、NO、H2S的水平（±s）

注：与B组比较,aP＜0.01

组别B组A组n 40 40 TNF-α（ng/L）10.24±1.24 108.02±7.64a IL-6（ng/L）32.07±7.45 421.08±10.43a hsCRP（mg/L）5.48±0.43 210.99±2.16a NO（μmol/L）50.17±9.13 178.24±10.74a H2S（μmol/L）31.24±4.27 72.57±10.27a

3 讨论

重症急性胰腺炎发病率占急性胰腺炎的2.4%～12%，伴呼吸、循环、肾、胃肠道等功能衰竭，病死率高达25%～40%，其发病机制未完全阐明。H2S是继NO和CO之后发现的第三个气体信号分子,能自由通过细胞膜，作用不依赖于相应的质膜受体，内源性H2S由L-半胱氨酸被磷酸吡哆醛-5′-磷酸依赖性酶，包括胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）、胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthetase,CBS）和半胱氨酸氨基转移酶等催化作用下产生，1/3以气体H2S、2/3以NaHS形式存在于体内，主要通过形成硫酸盐或硫代硫酸盐而最终排出体外[1-4]。本研究显示，重症急性胰腺炎组血浆H2S水平显著高于正常对照组（P＜0.01），提示内源性H2S在重症急性胰腺炎中起重要作用。

TNF-α、IL-6、hsCRP、NO是 炎 症 因 子[6-8]。TNF-α、IL-6参与急性胰腺炎发生、发展，过度释放与重症急性胰腺炎的恶化和持续坏死、多器官功能不全形成密切相关[7]。低水平的NO通过舒张血管平滑肌降低外周阻力，维持正常血压，减少血小板聚集，改善微循环，对胰腺具有保护作用；NO合成过多可通过多种机制加重胰腺炎病情：NO参与中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的毒性作用，与O2-结合生成过氧亚硝酸基，过氧亚硝酸基可直接或通过分解成许多小分子毒性物质损伤胰腺细胞，NO通过这些毒性作用可直接损伤细胞的DNA或作用细胞凋亡信号通路或协同其他细胞因子诱导胰腺细胞凋亡[9]。本研究显示重症急性胰腺炎组TNF-α、IL-6、hsCRP、NO均显著高于正常对照组（P＜0.01），与文献[7]报道一致。

研究表明急性胰腺炎时核转录因子NF-кB、TNF-α基因表达上调[7，9]，TNF家族成员及TNF死亡受体-NF-кB信号通路在细胞凋亡中起重要作用[8]。TNF募集中性白细胞，上调黏附分子、NO、IL-6、IL-1表达[7]。本研究示，H2S与TNF-α、NO呈正相关，与Oh等[8]研究结果相反；H2S与IL-6、hsCRP呈正相关，提示内源性的H2S是一种炎症介质，与Tamizhselvi等[10]研究结果一致，H2S在重症急性胰腺炎中起促进炎症反应效应。Zhang等[11]研究结果表明，内源性的H2S激活白细胞在盲肠穿孔脓毒血症中起促进炎症反应效应。H2S在心血管疾病[1]、肠缺血-再灌注损伤大鼠肠黏膜屏障、肝脏功能障碍起保护作用[2-3]，具有抑制炎症反应效应[4]。故H2S气体信号分子的生物活性效应及其机制可能具有细胞和疾病特异性。Tamizhselvi等[10]研究结果表明DL-炔丙基甘氨酸特异性阻断小鼠离体胰腺腺泡细胞CSE表达，显著抑制离体小鼠胰腺腺泡细胞P物质的合成、前激肽原-A和神经激肽-1受体的表达、内源性H2S的水平，减轻H2S对急性胰腺炎离体小鼠胰腺腺泡细胞的损伤，提示H2S上调SP-NK-1R信号通路的基因表达，介导炎症反应效应，损伤小鼠胰腺腺泡细胞。H2S通过何种机制促进重症急性胰腺炎的炎症反应效应，CSE特异性抑制剂DL-炔丙基甘氨酸，可否作为一种药物用于重症急性胰腺炎临床治疗，均有待于进一步研究明确。

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