浅谈如何有效降低马铃薯脱毒苗扩繁污染率

王彦红

（古交市种子管理站，山西 古交 030200）

近年来，脱毒马铃薯在山西省范围内得到广泛的推广应用。由于马铃薯病毒会导致其产量和品质严重下降，扩繁马铃薯优良品种脱毒苗非常重要。在马铃薯脱毒苗生产过程中，各个环节都要严格执行技术规程，否则极易引起污染，影响马铃薯脱毒苗的扩繁成活率。

1 马铃薯脱毒苗扩繁过程中污染的原因

1.1 细菌性污染

1.1.1 培养基在植入基础苗前发现长有细菌菌斑：有的是培养基高压灭菌不彻底引起的；有的是培养瓶口处理不干净，带有抗逆性很强的杂菌引起的。

1.1.2 在植入基础苗以后发现组织周围有细菌污染：有的是操作工具消毒不到位或是操作不规范引起的；有的是基础苗组织自身带菌引起的；也有的是植入基础苗操作过程中交叉感染引起的。

1.2 真菌性污染

1.2.1 在植入基础苗前，培养基表面发现真菌污染：大部分是由于存放培养基的环境中真菌孢子浓度过大或是培养基瓶口密封不严引起的；如果在培养基内部存在大量真菌污染，很有可能是配制培养基的母液已经被真菌污染。

1.2.2 在植入基础苗后发现培养基表面出现真菌污染，并且污染位置不固定：初期是由于无菌操作台消毒不彻底或是接种室的真菌孢子含量过高；后期是由于基础苗本身就携带有内生菌或是由于培养瓶封口不严。组织培养过程中，在脱毒苗组织周围发现真菌污染，是由于基础苗自身带有真菌，只是菌源太少，进行组织分离操作时肉眼无法辨认，接苗以后由于条件适宜，真菌继续生长引起真菌污染；如果真菌只是毫无规律地分布在培养基中，主要是由于培养基灭菌不到位或操作工具灭菌不彻底引起的。

2 如何有效降低马铃薯脱毒苗扩繁过程中的污染率

2.1 外植材料灭菌

在马铃薯脱毒苗组培过程中，一定要重视外植材料表面灭菌这一环节，不然就会影响继续的培养工作。为了获得无菌材料，对室外采集来的培养瓶及操作工具，首先要用自来水冲洗干净，然后根据材料大小选用不同种类的药剂进行不同时间的表面灭菌。

常用的药剂有75%的乙醇溶液、9%左右的次氯酸钠溶液等。用乙醇作杀菌剂灭菌时间不宜过长，约20s即可杀死外植体表面的绝大多数微生物。次氯酸钠溶液灭菌处理后易于撤除，不留残毒，是组培整个过程中常用的杀菌剂之一。为了取得十分好的杀菌效果，常采用乙醇和次氯酸钠复合消毒技术。

2.2 培养基灭菌

用加压湿热灭菌法进行培养基灭菌，要求杀死全部微生物。在灭菌整个过程中需注意以下几个环节：

2.2.1 当灭菌锅气压达到0.05pa左右时进行一次冷空气排放。高压灭菌锅内部冷空气排放要干净彻底，不然压力表上的温度和压力指示与锅内物体实际的温度、压力不符，就会引起灭菌不彻底，引起大面积培养基污染。

2.2.2 灭菌锅内需灭菌的培养基不可以堆放过满。否则，将阻碍蒸汽的流通和热交换，使容器内升温减慢，引起培养基内部杀菌不完全。

2.2.3 升温和降温速度不可以太快。这样可以避免灭菌不彻底的情况出现。

2.3 严格执行技术规程

掌握接种的基本技术环节是组织培养中最关键的环节，接种整个过程中产生的污染往往是不可避免的，我们只能是努力将污染降到最低限度，控制在5%以内。除常规的消毒环节外，还需注意以下一些问题：

2.3.1 对基础苗彻底消毒。对选用的基础苗用75%的乙醇溶液进行瓶外彻底消毒，并且要仔细检查所拿取的基础苗是否有被污染的，否则将会引起一瓶带菌的基础苗引发大量的接种组培苗被污染的情况。

2.3.2 接种室保持干净，达到无菌组培室的要求。接种前对接种室进行20～30 min紫外线杀菌，然后用84消毒液在室内喷洒，做到降尘，保持接种室清洁无杂菌。

2.3.3 接种前对接种用的操作工具用灭菌锅进行彻底灭菌。接种过程中，要将镊子、剪刀及用到的操作工具放置于75%的乙醇溶液中进行彻底消毒，并且用75%乙醇溶液擦拭双手，时刻保持清洁、无菌。

2.3.4 无菌操作台面用75%的乙醇溶液擦拭。物体堆放不可以过满，不然引起气流不畅通，使操作台的空气得不到净化，最后引起污染。

2.4 脱毒苗培养

注意脱毒苗的生长环境与培养条件，必要时进行调控，以促进脱毒苗有利生长。

2.4.1 光照：光照对脱毒苗的生长起着至关重要的作用，要求无菌培养室采光要非常好，平时要用日光灯进行调节，最好满足每天16 h光照。将新接的脱毒苗放置在培养架的下层，有利于新接茎段的萌发和再繁殖；将培养一周以上的脱毒苗放置在培养架的上层，可使瓶苗的节间缩短，叶大茎粗，有利于形成壮苗。

2.4.2 温度：把接好的脱毒苗放到无菌培养室之后，温度要控制在25℃左右。一般低于15℃时会引起培养组织生长停滞，而高于30℃对生长也不利。

2.4.3 湿度：无菌培养室中的湿度会影响培养基的湿度，培养室湿度太低，培养基容易失水、干裂，影响生长；过高则易引起培养基底部长霉，引起污染。一般要求70%～80%的相对湿度，过低应多洒些水增加湿度，过高可以通风排湿。

2.4.4 消毒：用75%的乙醇溶液每周做一次喷雾降尘，杀死空气中的真菌孢子，以降低污染率。

3 结论

综上所述，扩繁马铃薯脱毒苗，关键之处在于灭菌要仔细彻底，操作要严格执行规程，努力降低马铃薯脱毒苗的污染率，提高脱毒种薯的种植面积，使其保持优良的种性，达到高产、高效的目的。