高危型HPV负载量与宫颈癌前病变发展的相关性

杨 娟 肖 兰 杨继洲

宫颈癌的发病率日趋上升并有年轻化的趋势，早期发现癌前病变是防治宫颈癌的关键。国际癌症中心于2004年提出HPV感染是宫颈鳞状细胞癌及宫颈鳞状上皮内瘤变的必要因素，没有持续的HPV感染，女性发生宫颈鳞状细胞癌的可能性几乎为零[1,2]。我们利用表面等离子谐振技术(surface plasmon resonance，SPR)检测多种HPV的类型及负载量，旨在研究高危型HPV负载量与子宫颈鳞状上皮内瘤变及子宫颈鳞癌的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2011年1月至2012年1月对在孝感市中心医院经TCT诊断为低级别上皮内瘤变(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)、高级别上皮内瘤变(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)、不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞，不能除外高级别上皮内瘤变(atypical squamous cells cannot exclude HSIL ，ASC-H)的221例患者同时进行HPV检测，其中HPV高危阳性的患者196例，将这196例患者作为观察对象。HPV高危阳性的196例患者年龄22～56岁，平均年龄37岁，均进行了阴道镜活检，其中子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ级87例，子宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ级(CINⅡ/Ⅲ)级69例，鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)40例。

1.2 方法

1.2.1 TCT检测 用薄层液基细胞学宫颈刷插入宫颈口，在宫颈外口鳞柱状上皮交界处，均匀旋转3～5周，取出宫颈刷，将宫颈刷置于保存液瓶中(保存液由孝感宏翔生物技术有限公司提供)，细胞学分类根据 TBS 2001年阴道 /宫颈细胞学诊断系统进行细胞学诊断。

1.2.2 HPV检测 DNA提取：①将细胞保存液混匀，取1 ml细胞悬液，加入到1.5 ml离心管中，12 000离心5 min，用移液器去上清。②向细胞沉淀中加1 ml Cell Washing Solution，摇动或涡旋，充分悬浮细胞沉淀，12 000离心5 min，用移液器去上清。③加入200 μl FastExtract Solution，摇动或涡旋，充分悬浮细胞沉淀。④95℃水浴15 min，每5 min混匀一次。⑤12 000离心3 min，上清可直接用于PCR扩增。

PCR扩增:①配体系95 μl扩增混合液+5 μl样本。每4支样本配1支阳性对照管。②配好的体系充分混匀离心后于PCR仪内特定程序扩增。③扩增完成后如不立即检测，可置于-20℃保存，于1周内完成检测。

分型检测:①扩增好的样本每管加入60 μl杂交缓冲液和20 μl阳性对照，充分混匀后离心。②将混匀后的样本于PCR仪内95℃变性5 min。③变性后的样本即可放入W2600基因分型检测仪内检测。检测完成后仪器自动分析结果，整组检测结束后，应对仪器做简单维护。

1.2.3 阴道镜活检 于非月经期窥器暴露宫颈，依次经过涂生理盐水，5%醋酸溶液，碘染，镜下观察，取异常和可疑部位活检。

1.3 统计学处理

所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理，采用χ2检验，t检验及直线相关分析。

2 结果

经统计学处理：高危型HPV阳性率CINⅠ分别与CINⅡ/Ⅲ及SCC比较，差异均有显著统计学意义(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ与SCC比较，差异无统计学意义(P>0.05)。HPV平均负载量CINⅠ分别与CINⅡ/Ⅲ及SCC比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ与SCC无统计学差异(P>0.05)。CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC和HPV负载量呈正相关(γ=0.521,P<0.05)，CINⅡ/Ⅲ、SCC和HPV负载量无明显相关(γ=0.065,P>0.05)，见表1。

表1 高危型HPV感染与宫颈病变的情况

3 讨论

HPV是乳多空病毒科中一组病毒的总称，分布广泛。HPV可引起人类良性肿瘤和疣，如尖锐湿疣等，以及恶性肿瘤如宫颈癌等。依据不同型别的HPV与肿瘤发生的危险性的高低分为低危型及高危型。尖锐湿疣、扁平湿疣等良性病变中以低危型感染为主,而CINⅡ、Ⅲ及宫颈癌则以高危型感染为主，蒋艳萍等[3]的研究也表明CIN 程度的增加， 高危型HPV感染比例会增加。

我们通过对196例宫颈癌前病变患者情况进行分析，结果显示：CINⅡ/Ⅲ及SCC的高危型HPV阳性率明显高于CINⅠ，差异有统计学意义，提示高危型HPV感染与宫颈癌前病变进展有相关性；高危型HPV负载量和CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC呈正相关，提示高危型HPV负载量能预测CINⅠ级的进展，而高危型HPV负载量和CINⅡ/Ⅲ及SCC无相关性，提示高危型HPV负载量不能预测宫颈高级别上皮内病变的进展。我们认为：确诊CIN后有必要进行HPV DNA 分型，若为高危型，应积极治疗，尤其是组织学诊断为CINⅠ，检测为高危型HPV感染的。有学者认为，CIN患者行 LEEP或宫颈冷刀锥切 (CKC)，术前高危型HPV负载量与病灶残留和复发密切相关。 Park等[4]分析了 77例因CINⅡ/Ⅲ级或微小浸润癌行CKC后 6个月内再行全子宫切除术的患者,发现术前高危型HPV负荷量>300(HC2法)的患者 67.5%术后有残留,而术前高危型HPV负荷量<300，残留率只有37.8%，差异有统计学意义。Song等[5]研究了67例高危型HPV阳性的CINⅡ/Ⅲ患者,所有患者均行CKC,且切缘均为阴性。术后 6个月再次行HPV DNA检测(HC2法)，发现术前高危型HPV DNA>500的患者 43.8%存在 HPV持续感染,而高危型HPV DNA<500的患者仅 9.8%术后存在 H PV持续感染，提示术前高病毒负荷是术后切缘阴性患者持续病毒感染的独立影响因素。行 LEEP、 CKC术均能显著降低 HPV负荷量，但仍有部分CIN患者手术治疗后HPV仍未转阴，原因可能是： ①术前患者感染 HPV 负荷量高,病毒拷贝数多；②术后HPV再感染；③可能与复查时间有关。Bar -Am等[6]认为 CIN患者治疗后即使细胞学正常,若 HPV 病毒负荷量较高,则存在CINⅡ/Ⅲ的可能性达 80%。手术治疗后仍持续感染 HPV的患者，应密切随访,因为这些患者是术后病灶残留或复发的高危人群。

综上，高危型HPV感染与宫颈癌前病变的发展密切相关，并且高危型HPV负载量与子宫颈癌前病变的发展呈正相关，高危型HPV负载量能预测低级别宫颈病变的风险，能预测宫颈病变治疗后有无残留病灶,并能评估治疗效果及判断预后。对于患者的临床诊治具有重要指导作用。

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[4] Park JY， Lee SM，Yoo CW，et al .Risk factors predicting residual disease in subsequent hysterectomy following conization for cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅲ and micro invasive cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2007，107(1):39.

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