全自动电泳分析系统在地中海贫血筛查中的应用价值

莫凤明,伍德荣,何玉强

(河池市人民医院,广西 河池547000)

全自动电泳分析系统在地中海贫血筛查中的应用价值

莫凤明,伍德荣,何玉强

(河池市人民医院,广西 河池547000)

目的探讨全自动电泳分析系统在地中海贫血筛查中的应用价值。方法对2080份疑似地贫患者标本应用法国公司HYDRASYS全自动电泳分析系统进行血红蛋白电泳，检测血红蛋白(Hb)各组成分的含量，同时采用HbF碱变性试验对同一标本进行HbF含量测定，比较两种方法的检测结果。结果在送检2080例中筛出α地中海贫血表型阳性316例，阳性率15.2%；β地中海贫血表型阳性616例，阳性率29.6%。其它血红蛋白病6例，阳性率0.3%，经基因分析确诊α地中海贫血291例，准确度92.3%，β地中海贫血591例，准确度95.9%。结论全自动血红蛋白电泳分析系统电泳区带清晰,扫描定量准确,可以定量检测HbA,HbF,HbA2的含量，将地中海贫血进行初步分类为α地中海贫血或β地中海贫血，准确度高，有效地筛查出高危患者，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。

全自动电泳分析系统；血红蛋白电泳；地中海贫血；筛查

地中海贫血广泛分布在我国南方地区，是广东、广西及海南等地发病率最高、被世界卫生组织列为危害人类健康的6种常见病之一[1]，目前地贫尚无确切有效的治疗方法，重型α地贫多为死胎且孕妇易并发妊娠高血压综合征，重型β地中海贫血则需要终身依赖输血，中间型α、β地中海贫血患者多无劳动能力或劳动能力低下[2]。因此要广泛开展地贫筛查，特别是孕妇，提高预防意识，以便减少地贫儿的出生。为探讨全自动电泳分析系统在地中海贫血筛查中的应用价值，现将测定分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料 2010年6月至2011年5月来就诊的疑似地贫患者 (红细胞脆性<70%，MCV<80fL或家庭中有地贫携带者)共2080例，其中包括新生儿患者92例。

1.2 仪器与试剂 仪器为法国Sebia公司HYDRASYS全自动蛋白电泳系统及扫描仪，试剂用该公司生产的配套试剂。

1.3 方法

1.3.1 血红蛋白电泳分析 抽取疑似患者静脉血约2ml,真空采血管肝素钠抗凝，制备血红蛋白液，严格按照仪器和试剂盒说明书进行点样、电泳、染色、脱色、烘干，再通过自动扫描仪系统扫描分析HB各组分含量，打印出图谱。

1.3.2 参考区间 正常参考值成人2.0%≤HbA2≤3.5%并且不出现异常血红蛋白带。 如HbA2≤2.0%，或出现异常血红蛋白带(HbH、HbBart’s)判断为α地中海贫血表型阳性；如HbA2>3.5%或出现异常血红蛋白带(HbF>2.0%)判断为β地中海贫血表型阳性。

1.3.3 碱变性试验测定HbF含量 同时对每一分标本进行碱变性试验。

1.3.4 对于电泳分析表型阳性者重抽血进行地贫基因分析诊断。

2 结果

2.1 血红蛋白电泳法2080例中，检出HbA2<2.0%212例,检出HbA2>3.5%420例，出现HbH带44例，检出HbBart’s带60例，同时出现HbH带和HbBart’s带 36 例，检出 HbF>2.0%196 例，HbG2例，HbE4例。按参考区间标准可判断出：α地中海贫血表型阳性316例，阳性率为15.2%(316/2080)，β地中海贫血表型阳性616例，阳性率29.6%(616/2080)，见表 1。

表1 2080例地中海贫血血红蛋白电泳分析结果

2.2 HbF碱变性试验结果 2080份标本中有203例HbF>2.0%。

2.3 全自动电泳法测HbF量和HbF碱变性试验对照结果 全自动电泳法有196例HbF>2.0%，HbF碱变性试验有203例HbF>2.0%，符合率达96.6%。 电泳中HbA2区带清晰集中，如HbF增高大于2.0%时可在HbA2后出现HbF带，如HbF小于2.0%时在HbA2后不出现HbF带，无法定量。取10例代表性结果进行比较，见表2。可见HbF扫描与碱变性试验结果基本相符。

2.4 地贫基因分析结果 α地中海贫血表型阳性316例和β地中海贫血表型阳性616例重新抽血进行地贫基因分析诊断，检出地贫者888例，其中α-地中海贫血291例，包括标准型157例、静止型72例、中间型(HbH 病)44例，HbBart’s胎儿水肿综合征 2 例，HbBart’s+HbG 2 例，HbBart’s+HbE 4例；β地中海贫血591例，αβ复合型地中海贫血6例。

2.5 红蛋白电泳法和地贫基因分析法比较 以基因分析法为标准，血红蛋白电泳法检测α地中海贫血准确度为92.3%，β地中海贫血准确度为95.9%。

表2 10例 全自动血红蛋白电泳与HbF碱变性试验结果比较

3 讨论

血红蛋白是人体红细胞的主要蛋白质，由血红素和珠蛋白组成。珠蛋白肽链结构异常和某些肽链合成不足常导致血红蛋白疾病，前者称异常血红蛋白病，后者为地中海贫血。地中海贫血分为α地中海贫血和β地中海贫血,在α地中海贫血中，Bart’s水肿胎儿会早产夭折，标准型和静止型患儿在出生3～6个月后HbBart’s区带会消失，实际上在出生半年后用电泳法只有检测出HbH病。HbH病表现为血红蛋白电泳中出现HbH区带或HbH和HbBart’s区带，有些合并有HbCS区带。β地中海贫主要表现为HbF、HbA2含量增高[3]。因血红蛋白疾病可以没有任何临床症状，所以主要依赖于实验室检查来诊断。血红蛋白的分离和鉴定方法很多，国内外普遍采用平均红细胞参数(MCV、MCH、MCHC)、红细胞脆性等方法进行地贫筛查，但其敏感性和特异性较低，而且部分地贫患者(特别是α地中海贫血标准型)MCV和红细胞脆性可以正常，易漏诊和误诊，漏诊率达13.23%[4]。目前，聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术主要用于明确诊断α、β地中海贫血，是地中海贫血检测的金标准，但是分子生物学技术实验条件要求高，方法烦琐，而且检查费用较高，所以不能被广泛应用，特别是基层医疗单位无法开展。全自动电泳法其方法简便，电泳琼脂糖胶片易保存，区带颜色不容易脱，区带清晰，能够定量检测出HbA、HbF、HbA2含量，将地中海贫血进行初步分类，同时还可以筛查出各种异常血红蛋白，如HbH、HbE、HbG等，可见血红蛋白电泳法是研究和分析异常血红蛋白的有效方法，是诊断血红蛋白分子病不可缺少的手段[5]。本研究分析2080例疑似地中海贫血者的血红蛋白电泳结果，以基因分析法为诊断地中海贫血的金标准，全自动电泳分析统系筛查的α地中海贫血诊断准确性为92.3%，而筛查β地中海贫血准确度为95.9%，与文献报道基本相同[6]。这些结果表明，血红蛋白电泳法筛查地贫准确度高，能有效地筛查出高危患者，特别是HbH病和β地中海贫效果最理想，HbH病与基因方法完全符合，β地中海贫准确度达95.9%。同时本次研究还检出HbG 2例检出HbE 4例，所以红蛋白电泳法还可以筛查出异常血红蛋白病。

血红蛋白电泳法因支持物的不同而分为滤纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、高效液相色谱法等。滤纸电泳应用最早，但由于其区带“拖尾”现象较重，吸附作用和电渗作用较强，而且电泳时间长、速度慢、分辨率较低，已经很少使用。醋酸纤维素薄膜电泳中由于HbA、HbF等电点接近，通常不能分开，而且影响因素较多，要完成好的电泳图谱仍有一定的难度。毛细管电泳法及高效液相色谱法是近年来发展的分离方法，还不能广泛和深入应用。本研究使用的全自动琼脂糖凝胶电泳系统的琼脂糖是由琼脂分离纯化而得，凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，最大优点是几乎不吸附蛋白质，因此电泳斑点几乎无“拖尾”现象，其区带扫描分辨率高，区带整齐，重复性好，这与相关报道一致[7]。同时对HbF的分辨率也大有提高，高于一般的醋酸纤维薄膜电泳，对测HbF含量的准确度高达96.6%，可以基本代替HbF碱变性实验，使Hb分析更简便、快捷[8]。在HbA2升高的病例中，其HbF碱变性实验测定的HbF含量稍高于(2.0%

全自动琼脂糖凝胶电泳分析统系操作简便快速，电泳、染色、脱色、烘干在1h内即可完成，对HbA2的分辨清晰，区带集中。而且其从点样后到打印出检验结果都是用计算机控制程序完成，代替了以往的手工操作，也避免了人工操作的某些技术及客观条件的误差。

综上所述，应用全自动琼脂糖凝胶电泳分析统系进行电泳分析，区带清晰,扫描定量准确,可以定量检测HbA,HbF,HbA2的含量，将地中海贫血进行初步分类为α地中海贫血或β地中海贫血，准确度高，有效地筛查出高危患者，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。但是血红蛋白电泳是一个介于筛查和确诊的试验，有些情况下还应结合其他筛查方法及临床表现才能作出诊断，有条件的单位应开展基因诊断技术，以减少地贫漏检的可能。

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R556.6+1,R446.11+2

B

1674-1129(2012)05-0472-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.020