p16和p53蛋白在宫颈上皮内瘤变中的表达及与HPV16/18感染的关系

胡静姿 王文慧 张宝燕

(1.空军杭州航空医学鉴定训练中心,浙江 杭州 310013;2.中国人民解放军第117医院,浙江 杭州 310013)

宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是妇科最常见的疾病之一,宫颈上皮从正常状态经由一系列演变过程最终发展为癌,期间可发生很多分子病理事件。p16是一重要的抑癌基因,直接参与细胞周期的调控,p53是细胞生长分化的关键抑癌基因,已发现与一半以上人类癌症相关。而临床上不同级别的CIN处理方式不同,如何更准确地判定CIN分级也是病理医师经常面临的问题。本文拟通过免疫组化法观察p16和p53蛋白在宫颈鳞状上皮内瘤变中的表达,以及与HPV16/18感染的关系,探讨其在CIN演变过程中的作用和在CIN分级诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源 所有标本取自于中国人民解放军117医院2010年1～12月宫颈LEEP刀手术切除标本,共96例,其中CIN Ⅰ级12例,CIN Ⅱ级48例,CINⅢ级36例。所有标本均经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切成4μm厚度切片。同时,统计患者HPV16/18-DNA感染情况。

1.2 试剂 单克隆鼠抗体p16和p53均选用maixin的超敏试剂盒,由福州迈新生物技术开发有限公司提供。HPV分型检测试剂盒由亚能生物技术有限公司提供。

1.3 方法 免疫组化染色采用链霉菌抗生素蛋白-过氧化酶(S-P)法,HPV分型检测采用基因芯片技术。免疫组化结果判定:结构清晰,着色明显高于背景,在相应部位出现棕黄色颗粒者为阳性细胞,不着色或显色强度与背景无差别者为阴性细胞。每例切片随机选择5～10个HPF,取其平均值。用已知阳性对照片为阳性对照,磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。阳性细胞数＜10%为阴性表达(-),≥10%为阳性表达,其中≤25%(+)、25%～50%(++)、＞50%(+++)。HPV分型检测按试剂盒说明操作。

1.4 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行χ2检验。

2 结 果

2.1 p16和p53蛋白在CIN组织中的表达 结果显示p16阳性颗粒主要出现在细胞浆,p53阳性颗粒主要出现在细胞核。瘤变旁正常鳞状上皮p16、p53蛋白表达均为阴性或弱阳性,而在CIN中两者均有较高表达,且阳性率随CIN级别升高而升高,其差异有统计学意义(P＜0.05),见表1。

2.2 p16和p53蛋白的表达与HPV16/18感染的关系 p16表达在HPV16/18阳性组中的阳性率高于HPV16/18阴性组,其差异有统计学意义(P＜0.05),见表2,而HPV16/18阳性组p53蛋白表达与HPV16/18阴性组相比,两者差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 不同级别CIN中p16和p53的表达

表2 p16和p53表达与HPV16/18感染的关系

3 讨 论

p16是近年来发现第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因,在绝大多数人类原发恶性肿瘤中存在较高频率的p16基因及其产物的缺失[1-2]。本文结果显示p16蛋白在正常宫颈上皮中较少表达,但在CIN中高表达,且随CIN级别升高表达增强,提示p16蛋白可能参与了CIN的发生发展。进一步研究还发现p16在HPV16/18型阳性组中的阳性率高于阴性组,提示高危型HPV感染可能导致p16的异常表达。有研究表明机制可能为高危型HPV所含有的E6、E7基因整合入宿主的基因组内,进而分别使p53、Rb蛋白的功能失调,使宫颈上皮细胞的细胞周期发生紊乱,Rb通路失控,引起原本正常的p16蛋白反馈性高表达[3]。

p53是细胞生长分化的关键抑癌基因,已发现与一半以上人类癌症相关,分为野生型和突变型。野生型p53具有调节细胞增殖及凋亡双重作用,一般免疫组化方法检测出的p53蛋白均显示为突变型[4]。本文结果显示在病变宫颈组织中p53蛋白的表达明显高于正常宫颈组织(P＜0.05),说明p53蛋白的高表达可能引起细胞失去对细胞增殖的抑制,是导致CIN发生的因素之一。至于p53蛋白的表达与HPV16/18感染的关系,目前尚无定论。有研究显示高危型HPV(+)宫颈组织中p53蛋白表达减弱,推测机制可能为高危型HPV感染宫颈组织后,引起其E6癌基因蛋白表达,并且在E6相关蛋白以及泛素化途径相关酶蛋白E1、E2的参与下,诱导p53蛋白泛素化,再经过细胞内的26S蛋白酶复合体作用,促使p53蛋白降解[5-6]。但陈利友等[7]研究结果显示p53蛋白的表达与HPV16/18感染无关。本组研究结果与之相似,对此作者分析认为p53蛋白的异常表达可能参与了CIN的发生,但不占主导地位,具体机制有待进一步研究。

随着医学的发展、检测手段的改进和人们健康意识的增强,晚期宫颈癌的患病率已明显下降,但早期宫颈癌和CIN的检出率明显上升,并呈年轻化趋势。通过长期观察随访表明[8],不同级别CIN的自然消退率不同,其中CIN I为 57%,CIN II为43%,CIN III为32%,所以临床上不同级别的CIN处理方式不尽相同,如何更准确地判定CIN分级是病理医师经常面临的问题。本组结果显示,p16和p53在CIN中均有较高表达,且随CIN级别升高而增强,其差异有统计学意义,这与Klaes等[9]研究结果相似,提示p16和p53是CIN具有敏感性和特异性的肿瘤标记物,可作为CIN分级的辅助诊断方法,具有较好的应用价值。

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