胃癌组织中Tiam1的表达及临床意义

曹苏娟 李国亮 张忠山 王小华

肿瘤的侵袭与转移是恶性肿瘤患者预后的1个重要因素。近年的研究[1,2]显示，T淋巴瘤侵袭转移因子1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam1)在人体乳腺癌、结肠癌、膀胱癌等多种肿瘤中高表达，相似的结果在动物模型中也被证实；并且Tiam1表达增强能诱导并促进肿瘤细胞侵袭、转移。但有关Tiam1在胃癌组织中的表达及其临床意义尚不清楚。我们应用免疫组化方法检测Tiam1在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达，并初步探讨其与胃癌组织TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度、肿块大小等临床病理参数间的关系，为胃癌的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2005年3月～2011年12月我院临床和病理资料完整的胃癌标本56例，全部病例术前从未行过放疗、化疗，术后经病理检查确诊。其中男性38例，女性18例，年龄37～79岁，平均62.1岁。肿块直径≥2.5 cm者40例，<2.5 cm者16例。临床和病理上证实有区域淋巴结转移36例，无淋巴结转移20例。高分化胃癌20例，中分化胃癌17例，低分化胃癌19例。浸润深度：T1期6例，T2期11例，T3期36例，T4期3例。TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期15例，Ⅲ期25例，Ⅳ期6例。另取正常胃黏膜组织15例作为对照组，标本取自胃十二指肠溃疡手术标本中正常的胃黏膜组织，并经病理证实且排除重度不典型增生。全部标本经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，1张用于HE染色，其余用于免疫组化备用。

1.2 SP免疫组化法检测Tiam1蛋白表达

将腊块切片HE染色，确定标本组织分化程度。采用链霉素-生物素(SP法)免疫组织化学技术。浓缩型兔抗人Tiam1多克隆抗体购自Santa Cruz生物公司，操作严格按照说明书进行。用已知阳性标本做阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 免疫组化判定标准

以检测细胞出现棕黄色颗粒为阳性细胞。根据免疫阳性细胞染色程度(A)：无染色为0分；细胞膜或质内见淡黄色颗粒，明显高于背景为1分；较多棕黄色颗粒为2分；大量棕黄色颗粒为3分。每片随机观察5个视野，计数500个细胞中染色阳性细胞数(B)：阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。A与B相乘为其最后得分，0～1为阴性(-)，2～3为阳性(+)，4分及4分以上为强阳性(++)。

1.4 统计学处理

所有资料经SPSS13.0统计软件处理，各指标之间相关因素的差异性比较采用成组设计的非参数检验。各指标的相关性研究采用以Spearman相关分析法，以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 Tiam1在正常胃黏膜和胃癌组织中的表达

在正常胃黏膜组织中Tiam1 蛋白染色全部为阴性。Tiam1蛋白在胃癌组织中阳性染色为黄色或棕色颗粒,主要在细胞膜或细胞质表达，其中阴性为11例，弱阳性为11例，阳性为20例，强阳性为14例。胃癌组织中Tiam1蛋白阳性表达与正常胃黏膜中的比较，差异有统计学意义(U=4.964，P<0.01)。

2.2 胃癌组织中Tiam1的表达与临床病理特征的相关性

胃癌组织中Tiam1表达与患者性别、年龄无显著性相关(P>0.05)；胃癌组织中Tiam1表达与TNM分期、淋巴结转移、组织类型、肿块大小、浸润深度有显著相关性(P>0.05)，见表1。随着临床分期的提高、淋巴转移的产生、肿瘤病理分化程度的降低、肿瘤的增大和肿瘤浸润深度的加深，胃癌组织中Tiam1阳性表达率明显升高。

3 讨论

胃癌是常见的来源于上皮组织的恶性肿瘤之一，在我国占消化道恶性肿瘤的第1位，早期胃癌治疗效果较满意，5年生存率可达95%～100%；但占病例绝大多数的进展期胃癌，则预后差，5年生存率徘徊在30%～40%。多年来胃癌死亡率一直居恶性肿瘤的首位，胃癌患者死亡的主要原因是肿瘤侵袭和术后转移。

表1 胃癌组织中Tiam1表达与临床病理特征的关系(例)

侵袭和转移是胃癌生物学特征之一，也是影响治疗效果和复发死亡的主要原因。因此探讨胃癌侵袭、转移相关的因素，寻找预防和治疗的有效途径，是当代肿瘤学研究的一项迫切任务。

胃癌的侵袭和转移是肿瘤细胞与宿主间质及宿主细胞间的一系列复杂的、多步骤的相互作用的结果，其中涉及到许多种基因及其产物。Tiam1最初是由荷兰癌症研究所Habets等采用前病毒插入致突变的原理，并结合在成纤维细胞单层上进行侵袭筛选的方法，由BW 5147小鼠T淋巴瘤细胞高侵袭变异株中分离鉴定，经与基因库对比及DNA印迹分析，证实这是1个可以影响侵袭力的基因，故命名为Tiam1基因。Tiam1编码蛋白N端被切除后，可激活其致瘤活性，确定这是1种原癌基因，它是近年来肿瘤研究的热点。一些研究[3,4]表明，Tiam1在胰腺癌、乳腺癌、淋巴瘤、肺癌等多种肿瘤细胞中高表达，特别是在低分化的和伴有局部浸润或远处转移的腺癌或鳞癌组织中呈强阳性表达。本实验数据表明，Tiam1在胃癌组织中的表达明显高于正常胃黏膜组织(U=4.964，P<0.01)。这表明Tiam1基因具有癌基因的活性,在胃癌发生、发展中起一定的作用。进一步研究表明[5,6]，Tiam1在淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等恶性肿瘤中的表达水平与肿瘤细胞的分化程度及侵袭、转移能力密切相关，目前对于Tiam1如何诱导肿瘤细胞侵袭、转移的机制尚不十分清楚，其可能机制有以下几个方面：① Tiam1基因产物参与信号传导途径进而调节细胞骨架结构，引起片足和丝状伪足的形成，诱导肿瘤细胞侵袭、转移。②Tiam1基因的DH功能区具有鸟苷酸转换功能，PH功能区能介导蛋白复合物的形成，诱导细胞膜皱褶，从而诱导肿瘤细胞的侵袭、转移。③通过多种方式影响CD44v6、E-cadherin等多种肿瘤细胞黏附分子的表达而促进细胞侵袭和转移。本研究结果表明，胃癌组织中Tiam1表达与患者性别、年龄无显著性相关，但与TNM分期、淋巴结转移、肿块大小、浸润深度有显著性相关(P<0.05)，即随着临床分期的提高、淋巴转移的产生、肿瘤的增大和肿瘤浸润深度的加深，胃癌组织中Tiam1阳性表达率明显升高。由此可推测，Tiam1蛋白在胃癌的侵袭和转移中起着十分重要的作用，有望成为肿瘤恶性进展及预后判断的有效指标，但其具体机制和途径还有待于进一步深入研究。

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