HPLC法测定痔浴净中苦参碱的含量

金 涛

(泰州市人民医院，江苏 泰州 225300)

HPLC法测定痔浴净中苦参碱的含量

金 涛

(泰州市人民医院，江苏 泰州 225300)

目的 建立痔浴净中苦参碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。SunFire C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm，3.5 μm)，流动相为甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)，检测波长为220 nm。结果 此方法线性关系良好，平均回收率为100.29%。结论 此方法简便、准确，可用于测定痔浴净中苦参碱的含量。

痔浴净;苦参碱;高效液相色谱法

痔浴净为我市医院制剂，由黄柏、苦参、野菊花、大黄炭等14味药材组成，具有清热解毒、利湿祛风、杀虫止痒的功效。现行标准为泰州医院制剂规范，该标准无含量测定项。苦参为方中君药，其有效成分为苦参碱。为有效控制制剂质量，本文采用HPLC法对制剂中的苦参碱进行测定。

1 仪器与试药

Waters2996高效液相色谱仪，DAD检测器。

痔浴 净 3批 (批 号 20111210、20111219、20111222)，自制;苦参碱对照品(批号110805－200508)，中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:SunFire C18柱(4.6 mm ×150 mm，3.5 μm);流动相:甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05);流速:1.0 mL/min;检测波长:220 nm;柱温:30℃;进样量10μL。在此条件下，样品溶液中苦参碱吸收峰与其他组分峰能达到基线分离，分离度大于1.5，理论板数按苦参碱峰计算大于2 000;阴性样品溶液(去除苦参，同样品溶液制备)试验表明，对样品测定无干扰。色谱图见图1。

图1 对照品(A)、样品(B)和阴性样品(C)溶液高效液相色谱图

2.2 线性范围

取苦参碱对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为苦参碱对照品溶液(0.205 6 mg/mL)。按2.1项下条件，分别进样 2，5，10，15，30 μL，以苦参碱进样量(X，μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为:Y=1×107X－48 590，r=0.999 9，苦参碱进样量在0.411 ～6.165 μg范围内，线性关系良好。

2.3 精密度试验

分别取2.2项下对照品溶液10μL，连续进样6次，苦参碱峰面积值的RSD为1.1%。表示仪器进样精密度良好。

2.4 稳定性试验

取样品(批号:20111210)，按2.7项下方法试验，分别于 0，2，4，8，12，24 h 进样，苦参碱峰面积RSD为0.6%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.5 重复性试验

取样品(批号:20111210)5份，按2.7项下方法试验，5次含量测定结果的RSD为1.5%。

2.6 加样回收率试验

取已知含量的样品(批号:20111210)5 mL，置分液漏斗中，分别精密加入0.535 8 mg/mL苦参碱对照品溶液3，5，7 mL，每样3份，按2.7项下方法试验，测得苦参碱的平均回收率为100.29%，RSD为 0.84%，见表 1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2.7 样品测定

精密吸取样品10 mL，加氨试液2 mL，用乙醚振摇提取 4 次(25，20，15，15 mL)，合并乙醚液，蒸干，残渣加流动相溶解并转移至25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液［1］。分别精密吸取苦参碱对照品溶液(0.205 6 mg/mL)和供试品溶液各10μL，进样，按外标法以峰面积计算。3批样品(批号20111210、20111219、20111222)的苦参碱含量分别为 0.525，0.517，0.554 mg/mL;RSD(n=3)分别为 1.0%，0.6% 和1.2%。

3 讨论

参照有关文献的色谱条件［1-4］，比较了甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)、乙腈-水-三乙胺(3∶97∶0.2)(磷酸调 pH 为 3.5)、甲醇-水-3% 磷酸溶液(80∶5∶12)、乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 6.8)(25∶75)作为流动相的色谱效果，结果表明，甲醇-水-三乙胺(48∶52∶0.05)为流动相，色谱峰峰形好，能达到基线分离，保留时间适宜。

通过对三批样品中苦参碱的测定，考虑苦参药材不同批次之间的差异，暂定痔浴净每1 mL含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计，不得少于0.40 mg。

高效液相色谱法测定痔浴净中苦参碱的含量，样品处理简单、快速，结果准确，能有效控制制剂质量，可作为痔浴净质量标准的定量方法。

［1］仇雅静，叶 慧.HPLC法测定康乐洗液中苦参碱的含量［J］.现代中药研究与实践，2009，23(5):64-65.

［2］任 洁，刘光斌，邹干朋，等.HPLC测定舒阴洗液中苦参碱的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(18):76-77.

［3］林祖武.HPLC法测定苦参洗剂中苦参碱的含量［J］.中医药导报，2011，17(10):70-71.

［4］刘永胜，陈 华，金伟华，等.HPLC法测定抗病毒口服液中苦参碱的含量［J］.中国药房，2012，23(4):371-372.

Determination of Matrine in Zhiyujing Mixtures by HPLC

JIN Tao
(Taizhou People's Hospital，Taizhou 225300，China)

Purpose To establish a HPLC methed for the determination of Matrine in Zhiyujing Mixtures.Methods The HPLC method was used at SunFire C18column(4.6 mm ×150 mm，3.5μm).The mobile phase consisted of methanol-water-triethylamine(48∶52∶0.05).The detective wavelength was 220 nm.Results The linearity of this method was good with the average recovery of 100.29%.Conclusion The method is simple and accurate.It can be used for the determination of the contents of Matrine in Zhiyujing Mixtures.

Zhiyujing Mixtures;Matrine;HPLC

R927.2

A

1005-1678(2012)05-0636-02

2012-06-15

金 涛，女，副主任中药师，E-mail:jt0996@sina.com。