鼻炎通窍喷雾剂的质量标准研究
2012-01-03周立陶铮盛蓉蒲志强
周立 陶铮 盛蓉 蒲志强
鼻炎通窍喷雾剂是我院开发的新制剂,该方由麻黄、黄芩、白芷、辛夷等中药组成,具有通利鼻窍的功效,临床用于急慢性鼻炎、鼻窦炎、症见鼻塞、流脓涕。为有效控制该制剂质量,参考药典[1]及相关文献[2-10],建立了麻黄、黄芩、白芷的薄层色谱鉴别,对方中君药麻黄制定了高效液相色谱测定盐酸麻黄碱含量的方法[11-14],所用方法简便,专属性强,重现性好,可用于鼻炎通窍喷雾剂的质量控制。
1 仪器与试药
HP-1100型高效液相色谱仪(美国惠普),四元泵,DAD检测器,HP化学工作站;AS10200超声波清洗器(220V,280W),电子分析天平BP211D(德国Sartorius)。
对照品:盐酸麻黄碱(171241-200506)、黄芩苷(110715-200514)、黄芩素(111595-200402)、汉黄芩素(1514-200202)、欧前胡素(110826-200712)、异欧前胡素(110827-200407 );对照药材:麻黄(121051-200704)、黄芩(120955-200607)、白芷(120945-200707),均由中国药品生物制品检定所提供。乙腈、甲醇均为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯,硅胶G、硅胶H(青岛海洋化工厂);鼻炎通窍喷雾剂3批(100601、100602、100603)及阴性样品均由本院制剂室提供。
2 薄层色谱鉴别
2.1麻黄
取本品10ml,加浓氨试液1ml,用乙醚振摇提取2次,每次10ml,合并乙醚液,加盐酸乙醇溶液(1→20)1ml于乙醚液中,摇匀,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取麻黄对照药材1g,加浓氨试液数滴,再加三氯甲烷10ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml充分振摇,滤过,取滤液作为对照药材溶液。另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。取缺麻黄阴性样品按供试品溶液的制备方法制备,作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各5μl,分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20:5:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性均无干扰,薄层色谱见图1。
2.2黄芩
取本品10ml,加盐酸调节PH至3,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g,加乙酸乙酯-甲醇(3:1)的混合溶液30ml,加热回流30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,取上清液作为对照药材溶液。另取黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品,加甲醇制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的对照品溶液。取缺黄芩阴性样品按供试品溶液的制备方法制备,作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:3:1:2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应位置上,显相同的暗斑,阴性均无干扰,薄层色谱见图1。
2.3白芷
取本品10ml,加乙醚振摇提取2次,每次10ml,合并乙醚液,挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。另取白芷对照药材0.5g,加乙醚10ml,浸泡1小时,时时振摇,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品,加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。取缺白芷阴性样品按供试品溶液的制备方法制备,作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各5μl,分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)-乙醚(3:2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应位置上,显相同颜色荧光斑点,阴性均无干扰,薄层色谱见图1。
图1 麻黄、黄芩、白芷薄层鉴别
3 盐酸麻黄碱含量测定
3.1色谱条件
色谱柱:迪马柱Diamonsil-C18(250×4.6mm,5 μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸(含0.1%的三乙胺)(3:97);流速:1ml/min;检测波长210nm;柱温30℃。
3.2溶液制备
3.2.1对照品溶液的制备
精密称取盐酸麻黄碱对照品7.98mg,加甲醇制成每1ml含盐酸麻黄碱159.6 μg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。
3.2.2供试品溶液制备
精密量取样品液2ml,置25ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
3.2.3阴性样品溶液的制备
取缺麻黄阴性样品2ml,按“供试品溶液制备”方法制备样品,作为阴性样品溶液。
3.3系统适用性试验
取上述对照品、阴性样品和供试品溶液,照“3.1”项下的色谱条件注入液相色谱仪,记录色谱图,见图2。从图中可以看出阴性无干扰,待测峰与其他峰分离度良好。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计不低于3000,分离度大于1.5。
3.4方法学考察
3.4.1线性关系考察
取对照品溶液,分别进样0.5 μl、1 μl、3 μl、5 μl、7 μl,记录色谱图,以盐酸麻黄碱的进样量( μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程为:Y=1992.10165X-1.62788;R=0.9999,结果表明盐酸麻黄碱进样量在0.0798 μg～1.1172 μg范围内线性关系良好。
3.4.2精密度试验
取对照品溶液,连续进样6次,每次5 μl,测定,结果峰面积的RSD为1.87%(n=6),表明仪器精密度良好。
3.4.3稳定性试验
取同一批供试品溶液,分别在0、1、 2、4、8 h依次进样,盐酸麻黄碱峰面积的RSD为1.83%(n=5),表明供试品溶液在8h内稳定。
3.4.4重复性试验
取同一批样品(批号100601)6份,每份2ml,按供试品溶液制备方法制备样品,测定,结果盐酸麻黄碱的平均含量为 1.011mg/ml,RSD值为1.94%(n=6)。
3.4.5加样回收试验
精密量取已知含量的样品(批号100601)6份,每份1mL,至25mL量瓶中,分别精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液(0.1596mg/mL)5mL,用甲醇定容至刻度,摇匀,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果盐酸麻黄碱的平均回收率为97.29%,RSD值为2.35%(n=6),见表1。
表1 盐酸麻黄碱加样回收试验
3.4.6样品测定
取3批鼻炎通窍喷雾剂样品,按供试品溶液制备方法制备样品,在上述色谱条件下进行测定,结果见表2。
表2 样品含量测定(n=2)
4 讨论
4.1在后期初步稳定性实验中发现,样品放置一段时间后,白芷薄层色谱图中欧前胡素斑点极不明显,而异欧前胡素较稳定。查阅相关文献[15],有研究表明,白芷中欧前胡素的含量随温度及放置时间的延长有明显降低,故该制剂在拟订质量标准时,未将白芷的薄层鉴别列入质量标准。
4.2麻黄含量测定中,在制备供试品溶液时,对提取溶媒进行了考察,分别用水、甲醇、50%甲醇、0.1%盐酸甲醇、流动相作为样品提取溶媒,结果表明用甲醇作为提取溶媒,盐酸麻黄碱含量较高,故选用甲醇作为提取溶媒。
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