高效液相色谱分析O-甲基异脲硫酸盐含量

王 珏 茅小招 莫卫民

(1.浙江化工技工学校，浙江 衢州 324004；2.浙江工业大学，杭州 310014；3.巨化集团技术中心，浙江 衢州 324004）

分析与检测

高效液相色谱分析O-甲基异脲硫酸盐含量

王 珏1,2茅小招3莫卫民2

(1.浙江化工技工学校，浙江 衢州 324004；2.浙江工业大学，杭州 310014；3.巨化集团技术中心，浙江 衢州 324004）

研究了用高效液相色谱测定O-甲基异脲硫酸盐（OMIU硫酸盐）含量的方法，对检测波长、流动相、内标物、线性、精密度和准确度进行了试验和讨论。结果表明，OMIU硫酸盐和内标物一氯乙酸进样量分别在20～160 μg和3.75～30 μg，进样量与峰面积方程呈现良好的线性关系，平均加标回收率达到100.1%，相对标准偏差为0.38%。该法简单、快速，并具有较高的灵敏度，可满足OMIU硫酸盐产品定量分析的需要。

O-甲基异脲硫酸盐；一氯乙酸；高效液相色谱

O-甲基异脲，英文名 O-Methylisourea（OMIU），结构简式NH2C(OCH2)NH2（C2H4N2O），相对分子质量74。OMIU不太稳定，一般制成OMIU的硫酸盐或盐酸盐。OMIU硫酸盐为白色晶体，相对分子质量246，熔点166～168℃，易溶于水，不溶于甲醇，遇高温分解。尿素法合成的OMIU硫酸盐产品主要用作氟脲嘧啶类的抗肿瘤药物的合成原料[1-4]。

OMIU硫酸盐含量对其生产工艺控制及下游产品质量有着很大影响。OMIU硫酸盐含量可用非水酸碱滴定或定氮法测定。本文尝试采用液相色谱测定OMIU硫酸盐含量。

1 实验部分

1.1 仪器和设备

LC-10ADVP高效液相色谱仪（HPLC）。输液泵：高压恒流泵，体积流量0.1～9.9 mL/min，工作压力为0～40 kPa，压力脉冲应小于±1%；进样装置：微量高压旋转型阀，配置20 μL样品定量管；检测器：SPD-10AVP紫外分光光度检测器；记录装置：N2000色谱数据工作站；脱气装置，在线脱气装置；柱温恒温箱；真空过滤器，配用孔径0.45 μm滤膜。

1.2 试剂

二次蒸馏水，经0.45 μm滤膜过滤；高氯酸，氨水，一氯乙酸，均分析纯；乙腈，色谱级；OMIU硫酸盐标准品，纯度≥99.0%。

缓冲盐：质量分数1%的HClO4水溶液，用氨水调节pH=2.3；内标溶液（质量浓度75 g/L）：称取约15 g一氯乙酸，用缓冲溶液溶解并定容至200 mL，摇匀备用；OMIU硫酸盐标准溶液（质量浓度20 g/L）：称取OMIU硫酸盐标准品约2.0g（精确到0.1 mg）于100 mL容量瓶中，加入约50 mL缓冲溶液，充分摇匀，使固体物质完全溶解，再准确加入5.0 mL内标溶液，用缓冲溶液定容，摇匀备用。

1.3 HPLC分析条件

色谱柱为DiamonsilTMODS C18，柱长250 mm，内径 4.6 mm，填料粒度 5 μm。

10 mL氨水用水稀至1 000 mL，用高氯酸调节溶液pH为2.3，此为缓冲溶液；与乙腈按体积比85:15成流动相，进样体积流量0.8 mL/min。

柱温40℃，检测波长205 nm，进样量2.0 μL。

1.4 试验方法

称取试样约2.0 g（精确到0.1 mg）于100 mL容量瓶中，加入约50 mL缓冲溶液，充分摇匀，使固体物质完全溶解，再准确加入5.0 mL内标溶液，用缓冲溶液定容，摇匀备用。

待HPLC仪器稳定后，采用内标法进行色谱分析，分析结果由N2000色谱数据站自动处理。

1.5 分析结果的计算

OMIU硫酸盐质量分数按下式计算：

式中，m1和mS分别为OMIU硫酸盐试样和内标物质的质量，A1和AS分别为OMIU硫酸盐试样和内标物质的峰面积，fs1为OMIU硫酸盐与内标物质相比的校正因子。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

OMIU硫酸盐在波长200～210 nm处有吸收。205 nm以下，流动相及样品中杂质的干扰增大；205 nm以上，OMIU硫酸盐的吸光度降低。经综合考虑，选择最佳检测波长为205 nm。

2.2 溶剂的选择

OMIU硫酸盐易溶于水，可选择水作为溶剂，但用缓冲盐作为试样溶剂进样时，对测定基线影响较小能提高定量精度，故选择缓冲盐做溶剂。

2.3 流动相试验

由于测定波长为205 nm，故选择纯水相或水-乙腈体系作为流动相（乙腈的截止波长为190 nm）。2.3.1 缓冲盐种类、含量及pH选择

分别用高氯酸、硫酸、磷酸等组成的缓冲盐作分离试验，发现用高氯酸＋氨水组成的缓冲溶液下，OMIU硫酸盐及杂质能很好的分离，故采用高氯酸＋氨水组成的缓冲溶液作缓冲盐。

进一步试验表明，当缓冲盐含量低时，色谱峰会产生拖尾，当氨水加入质量分数为1%及以上且高氯酸调节溶液pH小于3时，色谱峰分离效果好且峰尖锐。考虑到流动相中盐含量太高及酸度太大会影响色谱柱寿命，选择氨水质量分数为1%、溶液pH=2.3。

2.3.2 乙腈含量

在上述缓冲盐下，调节缓冲盐与乙腈比例，发现随着乙腈量增大，OMIU硫酸盐的峰面积也随之增大，当乙腈的质量分数大于20%后组分就不能有效分离。考虑到分离的选择性和分析时间，选择乙腈体积比例15%，总体积流量为0.8 mL/min，综合分离结果如图1。

2.4 内标物的选择

分别用一氯乙酸、对苯甲酸、吡啶二酸、苦味酸等进行了试验。一氯乙酸与OMIU硫酸盐的峰保留值近，且与杂质峰分开，因此选择一氯乙酸作为内标物。

2.5 线性试验

OMIU硫酸盐、内标物质量浓度分别为20、7.5 mg/L，分别进样 1、2、3、5、8 μL 做线性试验，结果如图2和图3。

所得线性回归方程为：

表明OMIU硫酸盐进样量在20～160 μg、一氯乙酸进样量在3.75～30 μg，都具有良好的线性。

为了使OMIU硫酸盐和内标物的峰面积接近，这里选择OMIU硫酸盐进样量为40 μg，一氯乙酸进样量为 15 μg。

2.6 测定结果及精密度试验

对同批试样进行了7次重复测定，结果见表1。本方法的允许差=2.83S=0.5%，相对标准偏差为0.10%，结果较满意。

表1 精密度试验结果Tab 1 The accuracy test result

2.7 加标回收试验

将OMIU硫酸盐标准品加入到试样中（OMIU硫酸盐质量分数为98.68%）测定回收率，结果见表2。回收率在99.8%～100.8%，平均为100.1%，相对标准偏差0.38%，结果令人满意。

3 结论

使用HPLC能实现OMIU硫酸盐与杂质的有效分离。OMIU硫酸盐线性范围在 20～160 μg（R2=0.998 1），一氯乙酸在 3.75～30 μg（R2=0.999 9），加标平均回收率达到100.1%，相对标准偏差为0.38%，均能满足分析样品的要求，且数据的稳定性和重现性较好。该方法简单、快速，具有较高的灵敏度，可作为OMIU硫酸盐产品的分析方法。

表2 OMIU加标回收试验结果Tab 2 The recycling test result of marked OUIU

[1]徐建忠,孔诚,崔伟.O-甲基异脲醋酸盐的合成研究[J].辽宁化工,2003,32(1):7-8.

[2]张志春,朱慧琴.O-甲基异脲酸式硫酸盐和正盐的研制[J].宁夏石油化工,2005,24(2):12-14.

[3]徐晓波,周晓红.甲基异脲酸硫酸盐的制备[J].精细化工中间体,2001,31(6):24-25.

[4]孙致远,陈其杰,刘纶祖,等.一步法制备甲基异脲酸硫酸盐(2:1)[J].化学试剂,1990,12(4):244-244.

Analyze OMIU Sulfate Content by HPLC

Wang Jue1,2,Mao Xiaozhao3,Mo Weimin2

(1.Zhejiang Chemical Technical School,Quzhou,Zhejiang 324000;2.Zhejiang University of Technology,Hangzhou 310014;3.Juhua Group Technology,Quzhou,Zhejiang 324004）

In the paper,OMIU Sulfate content was analyzed by HPLC.The result shows that as the sample dosage of OMIU sulfate and chloroacetic acid is 20～160 μg and 3.75～30 μg respectively,the sample dosage and peak area equation show good linearity,recoveries reaches to 100.1%,deviation of relative standard 0.38%.The method is suitable for OMIU sulfate analysis for its simpleness,speediness and sensitiveness.

OMIU Sulfate;chloroacetic acid;HPLC

O657.7+2

ADOI10.3969/j.issn.1006-6829.2011.03.018

2011-04-07；

2011-04-26