综合评分法优选丝瓜络中利尿成分的提取工艺

房春燕，孙文启，史立宏，张秀荣，王琳，康白#（.潍坊医学院应用药理学实验室，潍坊市6053；.山东潍坊市皮肤病防治所，潍坊市 606）

综合评分法优选丝瓜络中利尿成分的提取工艺

房春燕1＊，孙文启2，史立宏1，张秀荣1，王琳1，康白1#（1.潍坊医学院应用药理学实验室，潍坊市261053；2.山东潍坊市皮肤病防治所，潍坊市 261061）

目的：优选丝瓜络中利尿成分的最佳提取工艺。方法：通过大鼠尿量选择合适的提取方法；以大鼠24h尿量、丝瓜络总提取物百分率的综合评分为评价指标，以乙醇浓度、回流时间和乙醇用量为影响因素进行正交试验，优选提取丝瓜络利尿成分的最佳工艺。结果：醇回流法为最合适的提取方法。乙醇浓度对评价指标有显著影响，回流时间及乙醇用量对评价指标无显著影响。最佳提取工艺为用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。结论：该方法简便、科学，可为开发丝瓜络的药理作用、临床应用提供理论依据。

丝瓜络；提取；正交试验；综合评分法

充血性心力衰竭是临床常见病、多发病，利尿剂可以减轻患者的水钠潴留。丝瓜络是葫芦科植物丝瓜（Luffa cylindrica（L.）Roem.）的成熟果实维管束，作为一种具有通经活络、清热解毒功效的药材[1]，常应用于中药方剂中。现代药理学研究表明，丝瓜络具有抗炎、镇痛、强心利尿、降血脂等功效[2，3]，但目前对丝瓜络的研究不够深入。为了更好地开发利用丝瓜络，本研究对不同的提取方法进行比较，采用正交试验法，利用药效学指标进行综合评分，深入探讨影响丝瓜络利尿成分提取的诸多因素，旨在验证药效的同时达到筛选工艺的目的，以期为开发丝瓜络的药理作用、临床应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

KDM型调温电热套（龙口市电炉制造厂）；KQ-500型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHZ-D型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海振捷实验设备有限公司）；简易代谢笼，由潍坊医学院应用药理学实验室自制。

1.2 试药

丝瓜络，购于潍坊市药材公司，由笔者鉴定为真品；乙醇为分析纯。

1.3 动物

Wistar大鼠32只，♀♂兼用，体重（200±25）g，由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（鲁）2008-0002）。

2 方法

2.1 前处理

将鉴定好的丝瓜络用清水洗净，置于日光下干燥，干燥完全后用粉碎机粉碎，然后置于恒温干燥箱内干燥，备用。

2.2 丝瓜络利尿成分提取方法的优选

2.2.1 水煎煮法 取丝瓜络粉末100g，加6倍量水，浸泡0.5h，加热煎煮1.5h，过滤；药渣再加6倍量水，煎煮1h，合并2次滤液，过滤，浓缩，定容至100mL，备用。

2.2.2 醇回流法 取丝瓜络粉末100g，加6倍量70%乙醇，浸泡0.5h，加热回流1.5h，过滤；药渣再加6倍量70%乙醇，回流1h，过滤，合并2次滤液，减压回收乙醇，定容至100mL，备用。

2.2.3 超声波提取法 取丝瓜络粉末100g，加6倍量70%乙醇，浸泡0.5h，超声提取2次（功率：150W，频率：30kHz），每次20min，合并超声液，定容至100mL，备用。

2.2.4 3种提取方法的比较 预先将大鼠置于代谢笼中适应3d，选用筛选合格的大鼠（2h内的排尿量超过所给水负荷的40%）随机分为4组（即空白对照、水煎煮、醇回流、超声波组），分别ig生理盐水和3种方法所得提取液10g·kg-1，ig 5d后，采用代谢笼法，测定大鼠24h尿量变化。实验前24h大鼠禁食不禁水，先给予50mL·kg-1生理盐水负荷后，逐个充分挤压大鼠下腹部使膀胱排空，末次给药30min后将大鼠置入代谢笼内，连续记录24h尿量（每4h收集尿液1次，避免挥发）。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 不同提取方法所得利尿成分对尿量的影响

通过比较水煎煮法、醇回流法、超声波提取法对大鼠尿量的影响可知，3种提取方法所得丝瓜络提取物均可使大鼠24h尿量显著增加（P＜0.01或P＜0.05），其中以醇回流法所得提取物作用最为显著，故选择醇回流法提取丝瓜络利尿成分。不同提取方法所得利尿成分对尿量的影响见表1。

表1 不同提取方法所得利尿成分对尿量的影响Tab 1 Effects of diuretic ingredients by different methods on urine volum（e

表1 不同提取方法所得利尿成分对尿量的影响Tab 1 Effects of diuretic ingredients by different methods on urine volum（e

与空白对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别空白对照组水煎煮组醇回流组超声波组24h尿量/mL 12.06±3.0014.30±2.43＊18.04±1.76＊＊16.09±2.28＊＊

3.2 丝瓜络醇回流提取工艺参数优选

3.2.1 正交试验设计 根据预试验结果，选用乙醇浓度（A）、回流时间（B）、乙醇用量（C）作考察因素，每个因素采用3个水平，以L9（34）正交表进行正交试验。因素水平见表2。

表2 因素水平Tab 2 Factors and levels

3.2.2 正交试验的样品制备 称取适量丝瓜络药材9份，每份按正交试验表的设计进行提取，加入乙醇，加热回流，过滤后将所得的滤液减压回收乙醇后浓缩为100mL，备用。

3.2.3 总提取物百分率的测定 精密量取样品适量，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3h，取出，置干燥器中放置30min后迅速称重，计算总提取物百分率（总提取物百分率＝干净膏重（g）×提取液总体积（mL）/取样体积（mL）×原药材重×100%）。

3.2.4 正交试验结果 以大鼠24h尿量、丝瓜络总提取物百分率的综合评分为评价指标，评分时以各指标的最大值为参照将数据进行归一化，再给出不同的权重[4]。根据指标的贡献，大鼠24h尿量、丝瓜络总提取物百分率的权重系数分别设为0.7、0.3，综合评分（M）＝0.7X×100/21.57+0.3Y×100/3.70（X、Y分别为24h尿量、丝瓜络总提取物百分率）。结果，各因素作用的主次顺序为A＞C＞B，即乙醇浓度对提取效果影响最大，且具有显著性差异（P＜0.05），乙醇用量影响较小，而提取时间影响最小。从节约生产成本、缩短生产周期等方面综合考虑，确定最佳提取工艺为A2B2C3，即用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。正交试验结果见表3；方差分析结果见表4。

表3 正交试验结果Tab 3 Results of orthogonal test

表4 方差分析结果Tab 4 Results of variance analysis

4 讨论

通过对不同提取方法的比较发现，醇回流法适合丝瓜络利尿成分的浸出。通过正交试验看出，乙醇浓度对大鼠24h尿量和总提取物百分率有显著影响，说明乙醇浓度为影响丝瓜络利尿成分提取的主要因素，这为丝瓜络利尿成分的提取提供了理论依据。

本研究以大鼠24h尿量、丝瓜络总提取物百分率为指标进行考察，根据指标的贡献，将大鼠24h尿量、丝瓜络总提取物权重系数分别设为0.7和0.3，有利于兼顾各指标的综合效应，避免用单一指标进行工艺优化时产生偏差。采用正交设计，综合评分优选醇提工艺条件，得出乙醇回流法提取丝瓜络利尿成分的优化工艺条件为用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。该提取工艺简单、科学、经济、稳定，具有很强的可操作性，可为指导制剂生产提供参考数据，也可为开发丝瓜络的利尿应用价值提供理论依据。

[1] 李广勋主编.中药药理毒理与临床[M].天津：天津科技翻译出版公司，1992：50.

[2] 康 白，张义军，李华洲.丝瓜络药理作用的研究[J].中草药，1993，24（5）：248.

[3] 李 菁，付咏梅，朱伟杰，等.丝瓜络对实验性高血脂大鼠的降血脂效应[J].中国病理生理杂志，2004，20（7）：1264.

[4] 于鲁海，李艳菊，孙 力，等.综合评分法筛选驱虫斑鸠菊水提取液澄清工艺[J].中国药房，2007，18（33）：2577.

Optimization of Extraction Technology of the Diuretic Ingredients in Luffae cylindrica by Grading Methods

FANG Chun-yan，SHI Li-hong，ZHANG Xiu-rong，WANG Lin，KANG Bai（Applied Pharmacology Laboratory，Weifang Medical University，Weifang 261053，China）
SUN Wen-qi（Weifang Dermatosis Preventive Institute，Weifang 261061，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of diuretic ingredients in Luffae cylindrica.METHODS：The appropriate method for the diuretic ingredients extraction was chosen.The extraction technology of diuretic ingredients in L.cylindrica was optimized by orthogonal experiment with urine volume and itegracted assessment of percent of extracts of L.cylindrica as index and with concentration of alcohol，the extracting time and the amount of alcohol as factors.RESULTS：Alcohol backflow technology was the most appropriate method.The extracting efficiency was affected by the concentration of alcohol significantly，and the influence of the extracting time and the amount of alcohol had no significance.The optimal process is as follows：extracting for 2times in 70%alcohol，8folds alcohol，1.5hour for the first time，and 1hour for the second time.CONCLUSION：The method is simple，science，and coulde be provided the theory basis for pharmacological effects and clinical application of L.cylindrica.

Luffae cylindrica；Extraction；Orthogonal experiment；Grading methods

R285；R284.2

A

1001-0408（2011）39-3686-02

＊讲师，硕士研究生。研究方向：心血管药理学。E-mail：chunyanfang@yahoo.com.cn

#通讯作者：教授，硕士研究生导师。研究方向：心血管药理学。电话：0536-8462498。E-mail：kb615@163.com

2010-11-06

2011-04-13）