紫外-可见分光光度法测定环草石斛中石斛多糖的含量Δ

陈化，陈竹，梁斌，赵俊，冯子坤（1.贵州兴义市人民医院，兴义市56400；.贵州省人民政府云岩宾馆医务室，贵阳市 550004；.贵州兴义市吉仁堂药业公司，兴义市 56400）

紫外-可见分光光度法测定环草石斛中石斛多糖的含量Δ

陈化1＊，陈竹2，梁斌3，赵俊3，冯子坤3（1.贵州兴义市人民医院，兴义市562400；2.贵州省人民政府云岩宾馆医务室，贵阳市 550004；3.贵州兴义市吉仁堂药业公司，兴义市 562400）

目的：建立测定环草石斛中石斛多糖含量的方法。方法：采用紫外-可见分光光度法，以D-无水葡萄糖为对照，检测波长为490nm。结果：D-无水葡萄糖的进样量在0～0.10440mg范围内与吸光度呈良好的线性关系（r＝0.9997）；平均加样回收率为98.09%，RSD＝1.62%（n＝6）。结论：本法操作简便、快捷、结果准确，可用于环草石斛中石斛多糖的含量测定。

环草石斛；石斛多糖；D-无水葡萄糖；紫外-可见分光光度法

环草石斛为兰科植物环草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.的新鲜或干燥茎，鲜用者采收后除去根及泥沙；干用者采收后除去杂质，用开水略烫或烘软，再边搓边烘晒，至叶鞘搓净，干燥[1]。多糖类成分是环草石斛中的一类有效成分，具有抗肿瘤、增强免疫力的作用。笔者采用紫外-可见分光光度法测定环草石斛中石斛多糖的含量，以为环草石斛的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

UV-2450型紫外-可见分光光度计、AUW120D型电子天平、AUY220型电子天平（日本岛津公司）；HS10260D型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司，工作频率：40kHz，功率：40～100W）。

浓硫酸、苯酚、乙醇均为分析纯，水为蒸馏水；D-无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503，供含量测定用）；环草石斛采自贵州省兴义市环草石斛主产区，经云南中医学院普春霞教授和杨耀文教授鉴定为真品，标本存于贵州省兴义市吉仁堂药业公司。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品适量，加水制成每1mL含0.1044mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液 取本品粗粉0.15g，精密称定，置250mL圆底烧瓶中，用5.0mL石油醚（60～90℃）回流提取0.5h，过滤，残渣挥干溶剂后用50mL 80%乙醇回流提取1h，趁热过滤，残渣用热80%乙醇洗涤3次，每次10mL，残渣挥干溶剂后用100mL蒸馏水回流提取2次，每次1.5h，残渣及烧瓶用热水洗涤3次，每次10mL，合并滤液及洗涤液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2 测定方法依据

以D-无水葡萄糖为对照品测定环草石斛中石斛多糖的含量，用硫酸-苯酚显色法，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3 检测波长的确定

分别对空白（水）显色前后样品、D-无水葡萄糖对照品溶液显色前后样品、石斛多糖溶液显色前后样品，在紫外-可见分光光度计上进行全波长扫描，扫描范围为300～900nm，得吸收光谱，详见图1。

从图1中可以看出，空白（水）显色前后样品、D-无水葡萄糖对照品溶液显色前样品与石斛多糖溶液显色前样品没有明显的吸收峰，而D-无水葡萄糖对照品溶液显色后样品与石斛多糖溶液显色后样品在490nm波长处均有最大吸收，故选择490nm作为检测波长。

2.4 标准曲线的制备

图1 吸收光谱图A.显色前的空白样品（水）；B.经硫酸-苯酚显色后的空白样品（水）；C.显色前的D-葡萄糖对照品溶液；D.经硫酸-苯酚显色后的D-葡萄糖对照品溶液；E.显色前的石斛多糖溶液；F.经硫酸-苯酚显色后的石斛多糖溶液Fig 1 Absorption spectrumA.blank sample before color developing（water）；B.blank sample after color developed by phenol-sulphate acid（water）；C.D-glucosum anhydricum control before color developing；D.D-glucosum anhydricum control after color developed by phenol-sulphate acid；E.dendrobium polysaccharide solution before color developing；F.dendrobium polysaccharide solution after developed by phenol-sulphate acid

精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分别置10mL具塞试管中，加水至2.0mL，加5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，放置5min，置沸水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却2min后取出，室温放置10min（硫酸-苯酚显色法）；另以2.0mL蒸馏水同法操作，作空白对照。照紫外-可见分光光度法[2]在490nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，进样量（c）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为A＝5.17579c+0.00573（r＝0.9997，n＝7）。结果表明，D-无水葡萄糖的进样量在0～0.10440mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 样品测定方法

精密量取供试品溶液1mL，置于10mL干燥具塞试管中，照“2.4”项下方法自“加水至2.0mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中所含D-无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得。

2.6 精密度试验

取同一样品适量，显色后重复测定6次吸光度。结果，RSD＝1.48%（n＝6），表明该方法精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液适量，显色后分别于0、10、20、30、40、50、60min测定吸光度。结果，RSD＝0.32%（n＝7），表明供试品溶液在60min内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一环草石斛药材粉末适量，照“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，照上述方法测定石斛多糖含量。结果，平均含量为10.11%，RSD＝1.56%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量（10.11%）的同一环草石斛药材粉末6份，每份约0.10g，精密称定，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密加入D-无水葡萄糖对照品溶液（1.0326mg·mL-1）10mL，加水至刻度，摇匀，照上述方法测定石斛多糖含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.10 样品含量测定

取14批环草石斛药材粉末各适量，分别照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，照上述方法测定样品中石斛多糖的含量，结果见表2。

3 讨论

2010年版《中国药典》（一部）石斛的质量标准中无含量测定项[2]，环草石斛的含量测定方法也未见报道。以石斛多糖作为含量测定指标，有利于全面评价环草石斛药用部位的质量。因此，本试验对环草石斛样品采用石油醚（60～90℃）脱脂，80%乙醇除去醇溶性糖等，经热水提取水溶性活性成分石斛多糖[3～5]，应用紫外-可见分光光度法进行含量测定。结果证明，该方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性强。

本试验对14批环草石斛药材样品进行含量测定，得到石斛多糖的含量范围为5.34%～15.61%，据此研究结果建议制定环草石斛中石斛多糖的含量标准为本品按干燥品计算，含石斛多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计，不得少于6.0%。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2000年版.北京：化学工业出版社，2000：70.

[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录30、85.

[3] 孙卓然，刘 圆，李晓云，等.石斛不同种、不同药用部位中多糖含量测定[J].时珍国医国药，2009，20（8）：1886.

[4] 范俊安，王继生，张 艳，等.铁皮石斛组培品与野生品 的形态组织学和多糖含量比较研究[J].中国中药杂志，2005，30（21）：1648.

[5] 黄民权，黄步汉，蔡体育，等.铁皮石解多糖的提取、分离和分析[J].中草药，1994，25（3）：128.

Content Determination of Dendrobium Polysaccharides in Dendrobium loddigesii by UV-VIS Spectrophotometry

CHEN Hua（Xingyi Municipal People’s Hospital of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）
CHEN Zhu（Infirmary of Yunyan Guest House of Guizhou Provincial People’s Government，Guiyang 550004，China）
LIANG Bin，ZHAO Jun，FENG Zi-kun（Xingyi City Jirentang Herbal&Pharmaceutical Co.，Ltd.of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of dendrobium polysaccharides in Dendrobium loddigesii.METHODS：UV-VIS spectrophotometry method was adopted.The spectrophotometry was used with D-glucosum anhydricum as control.The detection wavelength was set at 490nm.RESULTS：The linear range of D-glucosum anhydricum was 0～0.10440mg（r＝0.9997）with an average recovery of 98.09%（RSD＝1.62%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，rapid and accurate for the content determination of dendrobium polysaccharides in D.loddigesii.

Dendrobium loddigesii；Dendrobium polysaccharides；D-glucosum anhydricum；UV-VIS spectrophotometry

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2011）39-3690-03

Δ国家科技支撑计划子课题（2006BAI06A11-11）

＊副主任药师，执业药师。研究方向：医院药学与药物研发。电话：0859-3520567。E-mail：18908597099＠189.cn

2010-10-05

2011-04-14）