延安市人民医院阴沟肠杆菌临床分布特点及药敏分析

藏小晴，刘 燕，谢星星

(1.延安市人民医院检验科；2.延安大学附属医院输血科，陕西 延安 716000)

延安市人民医院阴沟肠杆菌临床分布特点及药敏分析

藏小晴1，刘 燕2，谢星星1

(1.延安市人民医院检验科；2.延安大学附属医院输血科，陕西 延安 716000)

目的了解我院阴沟肠杆菌临床分布特点及药敏情况，以指导临床合理用药。方法在科室老师指导下，对临床所送的合格标本按照《全国检验技术操作规程》的要求接种、分离、培养，采用Walkaway40型全自动细菌鉴定仪进行鉴定及药物敏感检测，微量生化反应及K-B法辅助检测。结果从327株革兰阴性菌株中分离出阴沟肠杆菌42株(12.84%)；神经外科12株(28.57%)，骨外科10株(23.81%)；痰液22株(52.38%)，分泌物14株(33.33%)。药敏结果显示，42株阴沟肠杆菌对亚胺培南全部敏感，加替沙星、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星、丁胺卡那霉素的耐药率分别为21.43%、26.19%、26.19%、28.57%，复方新诺明和环丙沙星的耐药率在40%左右，其余抗生素耐药率都在50%以上。以头孢他啶/克拉维酸为ESBLs检测纸片，阳性率为76.19%。结论阴沟肠杆菌主要分布于神经外科和骨外科，容易引起患者呼吸道和伤口感染；产酶率高，具有高耐药和多重耐药特点，应引起临床注意，合理选择抗生素。

阴沟肠杆菌；医院感染；药敏试验

阴沟肠杆菌是条件致病菌之一，常可引起呼吸道、泌尿道和伤口感染等，是造成医院感染的重要病原菌之一。近年来，随着抗菌药物的广泛使用甚至滥用及侵入性治疗手段的增加，使得阴沟肠杆菌的感染率和耐药率增高，多重耐药现象严重，给临床治疗造成很大困难。现分析从本院临床标本获得的阴沟肠杆菌的分布情况和耐药特点，为临床治疗提供依据。

1 材料

1.1 菌株来源

来自我院2009-04～2009-12住院病人标本，包括痰液、血液、分泌物、脓液、胆汁、脑脊液、粪便等。

1.2 质控菌株

大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853，由陕西省临检中心提供。

1.3 试剂

哥伦比亚血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、M-H琼脂培养基，均购自上海珵嘉生物工程有限公司；微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司；营养肉汤培养基，自行配置；药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.4 仪器

德灵Micro Scan Walkaway 40型全自动细菌鉴定仪(西门子公司)、BACT/ALERT3D血培养仪(法国梅里埃)、HeraeusBB16/BB5060CO2培养箱(海尔)。

2 方法

2.1 标本接种、菌株分离培养

将送检标本按四分区法接种于血、麦康凯及M-H等琼脂培养基放置37℃温箱培养18h。

2.2 菌株鉴定

采用镜检，全自动德灵Walkaway40型全自动细菌鉴定仪及微量生化反应进行菌株鉴定。

2.2.1 菌落特征大而湿润的粘液状菌落。

2.2.2 革兰染色镜检革兰阴性杆菌，粗短，周身鞭毛，无芽胞。

2.2.3 氧化酶阴性。

2.2.4 仪器分析配制0.5麦氏浓度的菌悬液，使用Walkaway40全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定。

2.2.5 微量生化反应赖氨酸脱羧酶：阴性；精氨酸双水解酶：阳性；鸟氨酸脱羧酶：阳性；山梨醇：阳性；黄色素：阴性。

2.3 药敏试验

采用Walkaway40微生物分析系统和K-B法进行药敏试验。

2.3.1 K-B法 配制0.5麦氏浓度菌悬液，均匀涂布于M-H琼脂培养基，贴所选药敏纸片，放置37℃温箱培养18h。

2.3.2 结果判断 根据2004年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准判读结果。

2.4 ESBLs检测

采用NCCLS推荐的纸片确认试验检测ESBLs。通过头孢他啶单独及其与酶抑制剂克拉维酸的联合制剂对待检菌株进行药敏试验，加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，增大值≥5 mm时，判定为产ESBLs。

2.5 统计方法

采用Excel软件建立数据库，统计各病区、各临床标本、各年龄段感染株数和各抗生素耐药株数，分别求其与总株数的比值，以构成比和耐药率进行描述分析。

3 结果

3.1 阴沟肠杆菌临床分布特点

从327株阴性杆菌中共分离鉴定出阴沟肠杆菌42株，分离率为12.84%；其中，神经外科12株(28.57%)，骨科10株(23.81%)，心内科7株(16.67%)，ICU3株(7.14%)，见表1；各临床标本中，痰22株(52.38%)，分泌物14株(33.33%)，见表2；从70～岁年龄组人群中分离出8株，占19.05%，见表3。

表1 42株阴沟肠杆菌在不同病区的检出情况

表2 42株阴沟肠杆菌在各类标本中的检出情况

表3 42株阴沟肠杆菌感染年龄分布表

3.2 阴沟肠杆菌药敏分析

42株阴沟肠杆菌中，分离出哌拉西林/他唑巴坦耐药株11株(26.19%)，哌拉西林耐药株24株(57.14%)，氨苄西林耐药株42株(100.00%)；菌克单耐药株34株(80.95)、头孢唑啉42株(100.00%)、头孢西丁42株(100.00%)；丁胺卡那霉素耐药株12株(28.57%)，庆大霉素耐药株26株(61.90%)；妥布霉素27株(64.29%)；环丙沙星耐药株16株(38.10%)，左氧氟沙星耐药株11株(26.19%)；亚安培南全部敏感，见表4。

表4 42株阴沟肠杆菌的耐药率

3.3 ESBLs分析

42株阴沟肠杆菌中，以头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸为ESBLs测纸片，32株产ESBLs，阳性率为76.19%。

4 讨论

在本实验中，阴沟肠杆菌感染主要分布于神经外科、骨外科和心血管内科等，这些科室因为手术创伤、静脉穿刺导管、机械通气等侵入性手段较多，为该菌侵入人体提供机会，导致医院感染，实用内科学已把它列为感染性休克常见病原菌[1]。此外，长期使用广谱抗菌药物也可造成菌群失调，导致耐药菌株传播。因此，应引起临床重视，加强无菌观念，严格消毒侵入性医疗器械，执行各项无菌操作规程，以避免耐药菌株的垂直传播，防止交叉感染。表2结果显示，标本主要来源于痰和分泌物，表明该菌更容易引起呼吸道和伤口感染。表3结果显示，老年人是易感人群，主要是因为老年人免疫功能下降，更容易被该病原菌感染。

药敏试验结果显示，哌拉西林/他唑巴坦合剂耐药率低，仅为26.19%，治疗效果好，明显优于单纯使用派拉西林，临床可考虑选用。氨苄西林全部耐药。菌克单和头孢唑啉的耐药率极高，大于80%；三代头孢菌素耐药率在60%左右，因三代头孢菌素是Ampc酶的诱导剂，且易引起多重耐药菌株的传播[2]，应慎重选用；四代头孢菌素对产Ampc酶菌株有强大抗菌活性，但药敏结果显示，头孢吡肟的耐药率为54.76%，因此应引起临床重视。有文献报道，明确阴沟肠杆菌感染后，应该限制头孢菌素抗生素的使用，以避免诱导高产Ampc酶产生[3]。头孢西丁耐药率为100.00%，这可能是由于阴沟肠杆菌同时存在ESBLs和膜通透性减低，且分子量为18000bp外膜蛋白的缺失导致头孢西丁不能够能够通过外膜进入细胞内[4]。此外，氨基糖苷类药物中的丁胺卡那霉素和喹诺酮类药物仍保持较高敏感性，均提示对阴沟的临床治疗效果较好，但有报道，单药使用氟喹诺酮药物将可能造成阴沟肠杆菌耐药菌株的选择性富集[5]，因此，在治疗过程中应避免氟喹诺酮药物的单药使用。碳青霉烯类对β-内酰胺酶十分稳定，抗菌作用强大，本实验也证实了这点，药敏结果显示，亚胺培南全部敏感，是最有效的治疗药物，也是重症感染的首选药物。药敏结果显示，阴沟肠杆菌对多种抗生素同时耐药，多重耐药现象严重，应引起医护人员的注意，及时进行病原学检验及药敏试验，合理使用抗菌药物，以降低阴沟肠杆菌耐药率，避免多重耐药性是十分必要的。

阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的的主要机制之一是产ESBLs。本试验阴沟肠杆菌产酶率较高。ESBLs是一种由质粒介导的能水解青霉素、广谱头孢菌素及单酰环类的β-内酰胺酶，可被β-内酰胺酶抑制剂如棒酸、他唑巴坦所抑制，但对头霉素类和碳青霉烯类药物敏感。因其是由质粒介导，故可造成细菌的多重耐药和耐药菌株迅速传播，在医院内引起暴发流行。阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的另一重要机制是持续高产Ampc酶。Ampc酶有比ESBLs更广的水解底物，可水解三代头孢菌素、头霉烯类抗生素且不受酶抑制剂所抑制，耐药机制更为复杂，尚未研究清楚。阴沟肠杆菌是革兰阴性杆菌中产Ampc酶的典型菌属。ESBLs和Ampc酶广泛存在于临床分离的阴沟肠杆菌中，给临床抗感染治疗造成极大的困难。有报道，携带ESBLs基因的质粒往往同时携带氨基糖苷类、磺胺类和喹诺酮类等其他抗生素的耐药基因，从而使阴沟肠杆菌表现出多重耐药[6]。

因此，临床应重视并加强对阴沟肠杆菌的检测，在治疗前应尽早采集标本，做病原学检测和药敏试验，适量用药，合理治疗，对提高临床治疗效果和控制医院感染有重要临床意义。

[1]谢其扬，叶君健，杨滨，等.院内阴沟肠杆菌的感染状况及耐药性的4年分析[J].中国人兽共患病学报，2008，24(12)：1153-1155.

[2]邵剑春，胡大春，周玲，等.多重耐药性阴沟肠杆菌院内垂直传播分析[J].中华医院感染学杂志，2008，18(10)：1467-1470.

[3]赵德军，维涛.临床阴沟肠杆菌感染分布及体外药敏分析[J].南国防医药，2009，19(6)：618-619.

[4]梁志科，刘朝辉，叶惠芬，等.阴沟肠杆菌临床感染分布及药敏检测[J].中华医院感染学杂志，2008，18(2)：264-266.

[5]茆海丰，张鹏飞.阴沟肠杆菌对氟喹诺酮类药物防耐药变异浓度的测定[J].现代检验医学杂志，2008，23(6)：57-59.

[6]刘军.阴沟肠杆菌耐药机制的研究进展[J].国外医药抗生素分册，2009，30(2)：49-54.

ClinicalDistributionandDrugSensitivityAnalysisofEnterobacterCloacaeinOurHospital

ZHANGXiao-qing1,LIUYan2,XIEXing-xing1

(1.Department of Laboratory Medicime,Yan'an people's Hospital, 2.Blood tromsfusion department,The Afliliated Hospital of Yan'an university,Yan'an 716000 China)

ObjectiveTo investigate the clinical distribution and drug sensitivity situation caused by Enterobacter cloacae in our hospital, for guiding the clinical application of antibiotics reasonably.MethodsUnder the guidance of teachers in the department, the qualified clinical specimens were sent to be vaccinated, isolatedand and cultued in accordance with "National Laboratory Technical Operation Requirements". Enterobacter cloacae bacteria were identified by Walkaway40 automatic analysis system of bacteria and susceptibility detected by hand-assisted detection of biochemical and K-B method.Results42 strains of Enterobacter cloacae were isolated from the 327 negative bacteria, mainly distributed in neuro surgery and orthopedic surgery, the percentages of these strains isolated from sputum and secretions were 52.38%and 33.33%. 42 strains of Enterobacter cloacae were all sensitive to imipenem The percentages of isolates resisted to gatifloxacin,piperacillin/tazobactam, levofloxacin, kanamycin were 21.43%.26.19%,26.19%,28.57%,40% isolates resisted to ciprofloxacin and sulfamethoxazole. To the rest of antibiotic resistance, the percentages of isolates resisted were more than 50%.To ceftazidime/clavulanic acid for the detection of ESBLs paper, the positive rate was 76.19%.ConclusionThese strains of Enterobacter cloacae are distributed mainly in neurosurgery and orthopedic surgery; easily cause infections of respiratory tract and wound; Enzyme production rate is high,Its high resistance and multiple drug resistance should cause clinical attention, It suggests that the selection of antibiotics should be reasonable.

Enterobacter cloacae; Nosocomial infections;Drug sensitivity Analysis

R181.2

A

1672-2639(2011)04-0025-03

2011-06-23；责任编辑王景鸿]