黏蛋白MUC1和Cyclin D1在胰腺癌组织中的表达意义

陈干涛 陈干红 白少华 高志强 彭汉斌

胰腺癌为常见的恶性肿瘤，恶性程度高，预后差，疗效至今仍没有突破性的进展，因此，需要探索新的有效的早期发现和治疗手段［1］。近些年来的研究表明，细胞周期调节失控是肿瘤发生的重要机制，有许多癌基因和抑癌基因直接和间接参与了细胞周期的调控［2］。MUC1在肿瘤组织中的异常表达，使其成为1种潜在的肿瘤生物学标志物，MUC1表达可作为多种肿瘤发生、发展及预后的监测指标［3］。通常认为它的高水平表达与肿瘤的浸润、转移有关。在细胞周期的调控中，cyclinD1的过表达可导致细胞的增殖与分化失控，增加细胞向癌转化的可能性［4］。我们采用免疫组化方法检测MUC1和cyclinD1在胰腺癌组织中的表达水平，探讨两者与胰腺癌的发生发展及与其预后的关系，为临床提高胰腺癌治疗疗效提供理想的靶位点。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2001年3月至2006年12月在我院因胰腺癌行术后病理检查确诊为胰腺癌组织47例，年龄为39～73岁(平均年龄59岁)，其中男性31例，女性16例。高分化腺癌12例，胰腺中低分化腺癌35例;按TNM分期(UICC，1997)Ⅰ期9例、Ⅱ期13例、Ⅲ期15例、Ⅳ期10例;有淋巴结转移28例，无淋巴结转移19例;肿瘤位于胰头部38例，胰体尾部7例，胰头体尾部2例，选胰腺组织均无癌细胞侵及。正常对照组标本取自法医学系非胰腺疾病死亡人员尸检标本15例，其中男性9例，女性6例，年龄16～67岁，平均48岁。胰腺标本均无炎症、化生及增生性病变，手术切除后标本经10%的福尔马林液固定、脱水，常规石蜡包埋。

1.2 试剂及仪器

鼠抗CyclinDl单克隆抗体、鼠抗MUC1单克隆抗体、DAB显色剂、Immuno-Bridge十试剂盒(北京中山生物技术有限公司)，工作液浓度分别为1∶50和1∶100，微波修复抗原，免疫组化SP法染色，DAB显色，苏木精复染。阴性对照以0.5%小牛血清代替一抗作为阴性对照，Cyclin D1和MUC1阳性对照以公司所给阳性染色切片作为阳性对照，并参照文献［4］报道。

1.3 结果判断

Cyclin D1细胞核棕黄色染色为主，少部分位于胞质，MUC1阳性着色主要定位于细胞质，棕黄染色作为阳性判断标准。每张切片由2名病理医师双盲观察，染色结果以阳性百分率表示，并根据染色深浅和阳性细胞百分数，将阳性强度判为(+)弱阳性(0% ～25%)，(++)中等度阳性(26% ～ 50%)，(+++)强阳性( ＞50%)。

1.4 统计学分析

应用SPSSl2.0统计软件χ2检验和spearman相关分析，(检验水准:α =0.05)。

2 结果

2.1 MUC1在胰腺组织中的表达

正常胰腺组织中仅少许组织有MUC1的阳性表达，且MUC1主要表达于上皮细胞近管或腺腔面，呈顶端表达极性分布;而在胰腺癌组织中、MUC1过度表达，顶端定位不清，呈胞质胞膜均表达。胰腺癌组织47例中有39例(82.98%)MUC1呈阳性表达，可见棕黄色或深棕色颗粒，阳性信号主要位于细胞质中;在正常对照组15例中只有3例(2.00%)呈弱阳性表达。MUC1在胰腺癌中的阳性表达率和在正常胰腺组织中的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 Cyclin D1在胰腺组织中的表达

正常组织中Cyclin D1全部阴性表达，而在胰腺癌组织中有32例阳性表达(68.09%)，主要为细胞核内出现棕黄色颗粒，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 胰腺癌组织中MUC1和Cyclin D1表达的相关性分析

在39例MUC1阳性表达的胰腺癌组织中，Cyclin D1阳性表达有29例，而8例MUC1阴性表达组织中Cyclin D1的阳性表达有3例，spearman相关分析表明两者间呈显著相关，(γ =0.297，P=0.043 ＜0.05)。

2.4 MUC1和Cyclin D1阳性表达与胰腺癌临床病理参数的关系

MUC1在胰腺癌中的表达与肿瘤淋巴结转移及肿瘤TNM分期相关，存在显著统计学意义(P＜0.05)，但与肿瘤部位及分化程度无明显相关;Cyclin D1与肿瘤的淋巴结转移和分化相关，有显著的统计学意义(P＜0.05)，但与肿瘤的临床分期及肿瘤部位无明显相关性，见表1。

表1 MUC1和Cyclin D1表达与胰腺癌临床病理参数的关系

3 讨论

MUC1是1种跨膜糖蛋白，在许多正常黏膜上皮细胞中低表达，但在多种恶性肿瘤(如乳腺癌、卵巢癌、结肠癌等)组织中高表达。正常情况下，MUC1主要表达于多种组织、器官中上皮细胞近管或腺腔面，呈顶端表达，极性分布，胞质未见表达，但我们发现在胰腺癌组织中，MUC1过度表达，糖基化不全，顶端定位不清，胰腺癌组织中整个胞膜和胞质均表达，且表达强度与细胞的恶性化程度成正相关。同时，MUC1在胰腺癌中的表达与胰腺癌的临床分期和淋巴结转移相关，表明MUC1参与了胰腺癌发生发展的恶性生物学行为，其机制可能是因为MUC1作为一类细胞因子受体，参与信号传导引起MUC1/Y胞内段的酪氨酸磷酸化，同时细胞形态学发生改变，如细胞变长、分散生长、不易成簇;MUC1还可作为Wnt信号通道辅助激活因子调节器调控下游基因转录，促进肿瘤生长;MUC1还可以通过调节FOXO3a信号传导途径保护细胞免受氧压引起的凋亡。MUC1是1型跨膜糖蛋白，可使E2钙黏蛋白下调表达，E2钙黏蛋白的下调表达促进了肿瘤细胞的侵袭与转移;MUC1通过在细胞表面的过度表达减小细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的黏附使肿瘤细胞易于从原发位脱离口［5～7］。

Cyclin D1与Cdks家族成员结合成Cyclin D1/Cdks复合物通过磷酸化视网膜母细胞瘤家族(Rb家族)蛋白而释放E2F因子，游离的E2F与特殊基因启动子区结合，这些基因开始转录和表达，促进细胞完成G期到S期的转变。Cyclin D1的过表达使细胞G期明显缩短，细胞增殖加速，最终导致癌变的发生。我们的研究发现:Cyclin D1在胰腺癌组织中有过表达、表达在核内，且虽随癌组织由高分化到低分化、淋巴结转移表达的百分率在增高，差异有统计学意义。Cyclin D1的异常表达还与MUC1的表达相关，其原因可能是MUC1作为膜连接黏蛋白，其分子的胞质末端高度保守，能够与β-连环蛋白及其家庭成员结合，而β-连环蛋白是Wnt信号通道的效应分子。MUC1分子末端与β-连环蛋白相结合后定位于细胞核内，参与Cyclin D1在内的下游基因启动子活化，上调Cyclin D1等的表达，促进肿瘤细胞增殖［8］。有文献证明当肿瘤细胞转染MUC1基因后，肿瘤细胞获得了更高的移动性和侵袭性［9］。有关以MUC1为靶点抑制恶性肿瘤发生发展在体外细胞水平和动物实验上都取得了理想的成绩，我们的研究明确了MUC1与胰腺癌关系密切，那么MUC1可以作为胰腺癌诊断和治疗的理想靶标。

［1］Machado JC，Nogueira AMF，Cameiro F，et al.Gastic carcinoma exhibits distinct types of cell differentiation:an immunohistochemical study of trefoil peptides(TFF1 and TFF2)and MUC1ns(MUC1，MUC2，MUC5AC，and MUC6)〔J〕.J Pathol，2000，190(4):437.

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［4］李飞虹，高 嵋.研究生应用免疫组化技术的质控与标准化〔J〕.广东医学院学报，2008，26(2):218.

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［6］Brayman M，Thathiah A，Carson DD.MUC1:a multifunctional cell surface component of reproductive tissue epithelia〔J〕.Reprod Biol Endocrinol，2004，1(7):2.

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