黄连与甲氧苄啶联合体外抗菌作用的实验研究

牛美兰(通讯作者) 张伟 何雄文

(1.河南黄河科技学院医学院; 2.河南省中医药研究院附属医院外科 郑州 450063)

黄连具有清热燥湿,泻火解毒之功效[1]。黄连还具有对抗细菌毒素,降低金黄色葡萄球菌凝固酶、溶血素效价,降低大肠杆菌的毒力的解毒作用。现代药理研究表明：黄连具有广谱抗菌作用,对多种细菌、结核杆菌及真菌等有抑制或杀灭作用,是目前临床应用较为广泛的抗菌中药之一。甲氧苄啶(TMP)别名磺胺增效剂,本品为白色或类白色结晶性粉末,无臭,味苦。本品在氯仿中略溶,在乙醇或丙酮中微溶,在水中几乎不溶;在冰醋酸中易溶。TMP是合成抗菌药,抗菌谱与磺胺药类似,有抑制二氢叶酸还原酶的作用,但细菌较易产生耐药性,很少单独使用。磺胺药则抑制二氢叶酸合成酶。其抗菌作用较弱,一般不单独使用。但甲氧苄啶是强大的细菌二氢叶酸还原酶抑制剂[2]。临床上TMP常与SMZ合用治疗呼吸系统、泌尿系统、消化等部位的感染[3]。本组实验采用琼脂稀释法对比研究黄连、TMP及黄连与TMP联用的体外抗菌作用。

表1 各供试液抗菌作用结果(试管号)

1 材料

1.1 药品及配制

(1)取干燥黄连生药(购于河南中医学院第一附属医院中药房)10g,常规煎煮成50mL药液。取10mL加入无菌普通肉汤培养基10mL,摇匀即得200mg/mL的黄连供试药液。

(2)TMP购自焦作市医药原料贸易有限公司,质量标准：CP2005/BP2002/USP26/EP4。称取50mg TMP置于试管中,加入10mL肉汤微热溶解、摇匀,得5mg/mL的TMP药液供实验备用。

(3)取上述黄连煎剂10mL,加入100mg TMP及10mL肉汤培养基,微热溶解后摇匀得含黄连与TMP分别为200mg/mL、5mg/mL的复方供试药液。

1.2 实验中所用菌种,如绿脓杆菌、金葡萄菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌均采用中央标准株(购于中国药品生物制品检定所)。分别取上述菌株的普通琼脂平板24h培养物,用无菌生理盐水将菌液浓度调整为1cfu/mL×108cfu/mL,备用。

2 方法

采用试管内药液稀释法试验：无菌试管3排,每排15管,除每排的第14管外,其余各管中均加入5mL的无菌肉汤,在每排试管的第1管分别加入5mL上述3种供试药液;混匀后吸取5mL加入到第2个试管中,照此类推第13个试管;混合摇匀后吸出5mL药液加入到第14管中。取每排的第14管作无菌阴性对照;第15管作无药阳性对照。然后在各管中加5mL热无菌肉蛋白胨琼脂,摇匀趁热依次倾入到同一型号的无菌培养皿中,放置使琼脂冷凝。将其余1～15号培养皿分别划分为5分近等的区域并分别进行编号(14培养皿除外),然后在每个区域中分别加入5种经10h培养的各含菌培养液0.03mL,在37℃的环境下培养18～24h,观察细菌培养结果,其判定指标是有无细菌的生长。接种区光滑无可见菌落表明具有抗菌作用;接种区可见大片细菌生长则表明吴抗菌作用。

3 结果

黄连、TMP及黄连和TMP复方液对5种细菌的抗菌作用,见表1。

4 讨论

体外试验证明,黄连对溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎双球菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌、枯草杆菌等均有抑制作用。本组实验表明：对于金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和肺炎双球菌,联合运用黄连与TMP后较单用黄连或但用TMP抗菌作用明显增大,黄连联合TMP后,对实验的5种细菌抗菌活性均明显增强,表明说明黄连与TMP联合运用用具有明显抗菌作用。

[1] 凌一揆.中药学[M].上海：上海科技出版社,2008：553.

[2] 颜光美.药理学[M].北京：高等教育出版社,2009：432.

[3] 王开贞.药理学[M].北京：人民卫生出版社,2010：257.