溃疡性结肠炎患者外周血 T细胞及肠上皮细胞中 CD98的表达

张建立,冯百岁

1)郑州大学第一附属医院消化内科 郑州 450052 2)郑州市第二人民医院消化内科郑州 450052

(2010-01-12收稿 责任编辑 徐春燕)

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种原因不明的慢性非特异性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病。免疫紊乱在 IBD发病中起重要作用。CD98在胃肠道组织中高水平表达,可能是炎症发生和持续化的重要因素之一[1]。作者分别采用流式细胞术和免疫组织化学方法检测 UC患者外周血 T细胞和肠上皮细胞中 CD98的表达,报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 收集 2008年 8月至 2009年 11月郑州大学第一附属医院门诊和住院 UC患者 60例,诊断标准参照文献[2]。采用 Sutherland疾病活动指数[2]均诊断为初发型活动性。采用 Truelove和Witts溃疡性结肠炎分度[2],分为中重度 UC组 30例,轻度 UC组 30例,其中男性分别为 14和 13例,女性分别为 16和 17例,年龄分别为 18～50(36.2±8.5)岁和21～49(38.2±6.8)岁。另选 30例健康志愿者为对照组,其中男 13例,女 17例,年龄 18～45(31.4±9.2)岁。3组间年龄及性别分布差异无统计学意义(F=2.540,χ2=0.956,P均 ＞0.05)。上述对象受试前 3个月内均未接受氨基水杨酸、糖皮质激素或免疫抑制剂治疗,未合并其他自身免疫性疾病、肿瘤、病毒性肝炎或 HIV感染,并均签订知情同意书。

1.2 主要试剂 小鼠抗人 CD98单克隆抗体、PE标记的羊抗小鼠抗体和兔抗人 CD98单克隆抗体购于 Santa Cruz公司,FITC标记的小鼠抗人 CD3抗体和红细胞裂解液购于 Becton-Dickinson公司,免疫组织化学试剂盒和浓缩型 DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 标本采集 分别采集 UC患者和对照组外周静脉血 1 mL加入抗凝管中;结肠镜下取 UC患者病灶处肠黏膜活检,甲醛溶液固定。

1.4 T细胞 CD98阳性细胞百分率测定 外周血样本加入红细胞裂解液,离心并洗涤后,再分别加入小鼠抗人 CD98单克隆抗体、PE标记的羊抗小鼠抗体和 FITC标记的小鼠抗人 CD3抗体,利用流式细胞仪对样本进行检测。选用波长 488 nm的氩离子激光,以“门技术”划定淋巴细胞,测定每个标本门内 10 000个细胞。测定结果用 Cellquest 3.0软件(美国 Becton-Dickinson公司)进行双色荧光参数的获取和分析。记录 CD3和 CD98双阳性细胞占 CD3阳性细胞数的百分比,即为 T细胞中 CD98阳性细胞的百分率。

1.5 肠上皮细胞中 CD98的检测 甲醛溶液固定后的肠黏膜组织,脱水制成蜡块。切片后烤片、脱蜡、水化及抗原修复,加山羊血清封闭液,再先后加入兔抗人 CD98单克隆抗体、生物素化二抗及试剂SABC,DAB显色,苏木素染色,盐酸乙醇分化,脱水、封片并镜检。选择 10个不重复视野(×400)观察,每个视野计数 50个细胞。参照文献[3]判定结果。阳性细胞百分比:～25%计 0分,～50%计 1分,～75%计 2分,＞75%计 3分;着色强度:轻度着色计 1分,中度着色计 2分,重度着色计 3分。以上两项得分之和≥3分为阳性,＜3分为阴性。

1.6 统计学处理 所得数据用 SPSS 16.0进行分析。对照组、轻度 UC组和中重度UC组外周血T细胞 CD98表达的比较采用单因素方差分析和 LSD-t检验,其相关性采用 Spearman秩相关分析;轻度 UC组和中重度 UC组肠上皮细胞 CD98表达的比较采用 χ2检验。检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 外周血 T细胞中 CD98的表达 中重度 UC组、轻度 UC组和对照组T细胞 CD98阳性细胞的百分率分别为(43.40±5.09)%、(32.45±6.71)%和(28.42±4.31)%,差异有统计学意义(F=60.501,P＜0.001),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P均 ＜0.05)。T细胞 CD98阳性细胞的百分率与UC的严重程度呈正相关(rs=0.739,P＜0.001)。

2.2 肠上皮细胞中 CD98的表达 见图 1。中重度UC组病灶部位肠上皮细胞中 CD98的表达(20/30,66.7%)高于轻度 UC组(11/30,36.7%)(χ2=5.406,P=0.020)。

图 1 轻度 UC(A)和中重度UC(B)肠上皮细胞 CD98的表达(SABC,×400)

3 讨论

IBD是一种病因和发病机制尚未完全明确的免疫相关性疾病,大量炎症细胞浸润并伴有免疫功能紊乱是其主要特征。在对 IBD发病机制的研究中,包括整合素在内的黏附分子参与的免疫反应和炎症过程是当前研究的热点之一[4]。CD98是一个发现和研究时间不长的白细胞分化抗原,目前认为它有调节 β1整合素、氨基酸转运及细胞融合与增殖等功能[5]。研究[6]发现,活化的 CD98上调 β1整合素的表达及与胞外配合基的亲和力,引起细胞黏附增加。另外,CD98可以使 β1整合素聚集为高密度的复合物,导致整合素活化[7]、整合素样信号传导和非贴壁依赖性生长[1],促进肠道炎症的发生。

作者发现,外周血 T细胞中 CD98的表达与 UC的发生有关,并与其严重程度呈正相关。因此,可以尝试检测外周血 T细胞 CD98的表达来辅助诊断UC及其严重程度。此外,研究结果还显示,轻度UC组肠上皮细胞中 CD98的表达亦低于中重度 UC组。

综上所述,CD98在外周血 T细胞和肠上皮细胞中的表达可反映 UC的病情变化,CD98可能参与了 UC的发病过程,并且与疾病的严重程度相关。

[1]Kim SM,Hahn JH.CD98 activation increase surface expression and clustering ofβ1 integrins in MCF-7 cells through FAK/Src-and cytoskeleton-independent mechanism[J].J Exp Mol Med,2008,40(3):261

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[7]Rintoul RC,Buttery RC,Mackinnon AC,et al.Cross-linking CD98 promotes integrin-like signaling and anchorageindependent growth[J].Mol Biol Cell,2002,13(8):2841