高效液相色谱法测定结肠消炎丸中芦丁含量

徐艳红，陆 君，郭汉文，陈静苏

(1.辽宁省锦州市食品药品检验所，辽宁 锦州 121001; 2.辽宁省食品药品检验所，辽宁 沈阳 110023;3.辽宁省锦州市中医医院药剂科，辽宁 锦州 121000)

结肠消炎丸为医院制剂，由补骨脂、诃子、地榆、槐花等8味中药组方，是将中药粉碎后制成的大蜜丸，功能止血收敛、行气止泻、缓急止痛，用于治疗泄泻、休息痢等疾病。笔者采用高效液相色谱法测定结肠消炎丸中芦丁的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

日立L－2000型高效液相色谱仪，包括日立L－2130泵、日立L－2300柱温箱、D－2000 Elite色谱工作站、日立L－2400紫外检测器;BP－211D型电子天平。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100080－200707);样品、阴性样品均由某医院制剂室提供(批号分别为100901，101002，101103);乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse XDB －C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－水(15∶85);流速:1.0 mL/min;柱温:25℃;检测波长:257 nm;进样量:5 μL。理论板数按芦丁峰计算不低于3 000，分离度大于 1.5。

2.2 溶液制备

取于120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得对照品溶液。取本品大蜜丸剪碎，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)45 min，强力振摇10 min，放冷，再称定质量，摇匀，滤过，取滤液25 mL，残渣加水25 mL，微热使溶解，放冷，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解转移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液[1]。按处方比例及制备方法制备不含槐花的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5 μL，照拟订的色谱条件测定。结果供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，且阴性无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察:精密称取芦丁对照品 13.14 mg，置 25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取 1，3，5，7，9，11，13，15 μL 注入色谱仪中测定，以峰面积积分值为纵坐标(Y)、芦丁进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，回归方程为 Y=1 804 956.01X －184 543.67，r=0.999 7(n=8)。结果表明，芦丁进样量在 0.525 6 ～7.884 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

稳定性试验:取同一供试品(批号为101103)溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12，14 h 时进样测定。结果芦丁峰面积平均值为2 193 905.2，RSD 为 1.5%(n=8)，表明供试品溶液稳定性良好。

精密度试验:取同一对照品溶液连续进样。结果芦丁峰面积平均值为2 194 333，RSD为0.8%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为101103)，依法制备供试品溶液，依法测定。结果芦丁平均含量为 5.241 1 mg/g，RSD为0.3%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为101103，含量为5.241 1 mg/g)适量，共6份，分别加入高、中、低质量浓度的芦丁对照品溶液，按供试品溶液的制备与测定方法操作，测定芦丁含量，并计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 芦丁加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密吸取供试品溶液5 μL，按拟订的色谱条件测定，以外标两点法计算含量。结果批号为100901，101002，101103的样品中芦丁分量分别为 5.239 4，5.240 5，5.241 1 mg/g。

3 讨论

取芦丁对照品溶液，照紫外－可见分光光度法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅤA]，在200～400 nm波长范围内扫描，结果芦丁在257 nm波长处有最大吸收，并结合药典方法，因此选择257 nm作为检测波长[1]。将样品分别用纯水、50%甲醇、70%甲醇、50%乙醇提取，经试验考察，50%甲醇效果最佳，成分提取完全。由于样品中组分很多，使用正丁醇反复提取，可以消除其他干扰[2]。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:580，442.

[2]杜志茂，黄安军，白 娟.HPLC同时测定消栓通络胶囊中阿魏酸、芦丁和丹酚酸B的含量[J].中成药，2010，32(3):433－435.