高效液相色谱法测定普瑞巴林胶囊的含量

肖 健，曹杨远

(福建卫生职业技术学院食品药品研究所，福建 福州 350101)

普瑞巴林(pregabalin，PGB)的化学名为 (S)－(+)－3－氨甲基－5－甲基己酸，是美国辉瑞公司研究开发的一种γ－氨基丁酸(GABA)受体阻滞剂，用于治疗部分癫痫发作，其作用机制是通过抑制中枢神经系统电压依赖性钙通道的一种α2－σ亚基蛋白，减少神经末梢的去极化，减少Ca2+内流，从而减少兴奋性神经递质的释放[1]。普瑞巴林的治疗指数高，不良反应少，是一种市场潜力巨大、安全有效的抗癫痫药物。目前普瑞巴林的含量测定方法有紫外光谱法和荧光光谱法[2]、高效液相色谱紫外检测法[3－6]、高效液相色谱荧光检测法[7]以及高效液相色谱－质谱法[8]。笔者采用高效液相色谱法紫外检测法测定了普瑞巴林胶囊的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。普瑞巴林对照品(美国辉瑞公司提供，批号为20080908);普瑞巴林胶囊(美国辉瑞公司，规格为50 mg/粒，批号为 20090125，20090314，20090316，20090318);试验用甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸盐为分析纯，水为二次蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 － 乙腈－pH=7.0的20 mmol/L磷酸盐缓冲液(400∶150∶450);流速:1.0 mL/min;检测波长:210 nm;进样量:20 μL;柱温:35℃。称取普瑞巴林对照品24.7 mg，置25 mL量瓶中，加10%流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20 μL进样测定。结果其保留时间为3.440 min(见图1)，理论板数为9 829.6，拖尾因子为1.14，可满足测定要求。

图1 普瑞巴林色谱图

2.2 方法学考察

标准曲线绘制:精密称取普瑞巴林对照品199.6 mg，置100 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释到刻度，摇匀，配成对照品贮备液。再分别精密量取 3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL 置 10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别取20 μL进样，测定峰面积，以峰面积(A)对质量浓度(C，μg/mL)进行线性回归，得标准曲线 A=17 462.9 C+540.7，r=0.999 7(n=5)。结果表明，普瑞巴林质量浓度在598.8～1 397.2 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

最低检测限:取普瑞巴林对照品适量，加流动相溶解并逐级稀释，进样20μL测定。按3倍信噪比计算，普瑞巴林最低检测质量浓度为 4.94 μg/mL。

进样精密度:精密称取普瑞巴林对照品25.1 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，连续进样6次。结果的RSD为0.92%，表明方法进样精密度良好。

中间精密度:分别取样品胶囊(批号为20090125)内容物细粉适量(约相当于普瑞巴林25 mg)，精密称定，由不同的操作者，使用不同的仪器，于不同的时间，照含量测定项下方法操作，测定并计算普瑞巴林胶囊的含量。结果平均含量为101.1%，RSD=0.89%，表明方法的中间精密度良好。

重复性:取本品胶囊(批号为20090125)内容物细粉适量(约相当于普瑞巴林25 mg)，共6份，精密称定，分别置25 mL量瓶中，加流动相至3/4量瓶，超声5 min，加流动相至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液，取20 μL进样测定，用标准曲线法计算普瑞巴林的含量。结果平均含量为100.1%，RSD=1.05%(n=6)，表明方法的重复性较好。

加样回收试验:取已知含量(99.6%)的胶囊内容物适量(约相当于普瑞巴林12.5 mg)，共9份，3份为1组，精密称定，分别置25 mL量瓶中;分别精密加入对照品贮备液(1.996 g/L)5.0，6.2，7.5 mL制成低、中、高3种不同质量浓度的溶液(各3份，每份平行操作2份)，加流动相稀释至刻度，精密量取20 μL进样，测定含量并计算普瑞巴林的回收率。结果见表1。

表1 普瑞巴林加样回收试验测定结果(n=9)

2.3 含量测定

取装量差异项下胶囊内容物细粉适量(约相当于普瑞巴林50 mg)，置50 mL量瓶中，加流动相至约3/4量瓶，超声5 min，加流动相至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液(1 g/L)，另取普瑞巴林对照品(约25 mg)，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度为1 g/L的溶液作为对照品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各20 μL进样测定，记录峰面积，按外标法以峰面积计算标示量的百分含量。结果批号为20090314，20090316，20090318的样品中普瑞巴林含量分别为标示量的99.6%，101.1%，100.7%(n=3)，3批样品的含量均符合规定。

3 讨论

采用高效液相色谱法紫外检测法测定普瑞巴林胶囊的含量，方法准确度高、精密度好，适用于其质量控制。

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