槟榔药材高效液相色谱指纹图谱研究＊

丁 野，姚 蓉，龙海燕，李文莉

(湖南省药品检验所，湖南 长沙 410001)

槟榔居我国著名四大南药之首，原产于马来西亚，我国主产于海南、台湾、云南河口以及西双版纳热带雨林间，广西、广东和福建仅有少量的分布[1]。槟榔含生物碱、鞣质、脂肪酸、氨基酸类等成分，其中生物碱是主要的保健和药理活性成分之一[2－3]。目前国内外已对槟榔生物碱的提取分离、成分鉴定、含量测定和药理效应方面进行了深入的研究[4－9]，但未见有指纹图谱方面的报道。笔者采用反相高效液相色谱法建立了槟榔的高效液相色谱指纹图谱分析方法，为其质量控制提供了更全面的信息。

1 仪器与材料

安捷伦1200型高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站，KQ－300DE超声清洗仪。氢溴酸槟榔碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111684－200401);甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他均为分析纯;试验中所用药材均经作者鉴定为槟榔 Areca catechu L.的干燥成熟种子，药材来源见表1。

表1 样品信息表

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS－3 C18柱(250 mm ×4.6 mm ×5 μm);流动相:0.15%三乙胺溶液(磷酸调节pH至6.5)－甲醇(87∶13);流速:1.0 mL/min;检测波长:215 nm;柱温:30 ℃;进样量:5 μL。

2.2 溶液制备

取氢溴酸槟榔碱对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得对照品溶液。取本品粉末(序号A，过5号筛)约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，称定质量，超声处理(300 W，30 kHz)15 min，放冷，再称定质量，用50%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

精密度试验:取同一份供试品溶液，连续进样6次，依法测定。结果各共有峰相对保留时间的 RSD为0.08% ～0.10%，相对峰面积的 RSD为1.9% ～2.6%。

重复性试验:取同一批药材，依法制备6份样品并进行检测。结果各共有峰相对保留时间的 RSD为0.06% ～0.09%，相对峰面积 RSD为1.3% ～1.9%。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，8，12，24 h 时进样，记录色谱图。结果各共有峰的相对保留时间 RSD为0.37% ～0.46%、相对峰面积 RSD为 2.9% ～4.5%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.4 指纹图谱建立

对14批样品的指纹图谱进行分析，选择稳定性好、吸收较强、特征比较明显的色谱峰作为共有峰，其中1号峰保留时间与氢溴酸槟榔碱保留时间一致，作为参照峰，共标定了3个共有峰。利用国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件生成指纹图谱共有模式，并计算上述14批药材指纹图谱的相似度。参数设置:剪切溶剂峰0～5 min，对照图谱生成方法为中位数法，时间窗宽度为0.2 min，自动匹配。生成的标准指纹图谱共有模式以及14批样品的高效液相色谱指纹图谱见图1和图2。计算的相似度值见表2。

图2 14批槟榔药材指纹图谱

表2 相似度结果表

3 讨论

在选择提取溶剂时，分别考察了水、75%乙醇、50%乙醇、25%乙醇、无水乙醇，结果表明，除无水乙醇提取所得色谱图峰形较差外，其他溶剂所得色谱图峰形均较好且所得色谱峰数量相同，而以50%乙醇提取率最高，故选择50%乙醇为提取溶剂。考察了不同流动相对供试品溶液的分离效果，经过反复试验，结果以甲醇－0.15%三乙胺溶液(磷酸调pH至6.5，13∶87)为流动相所得色谱图分离度好，基线平稳。通过相似度评价软件计算，14批槟榔药材指纹图谱相似度均大于0.9，表明不同产地的槟榔药材的生物碱类成分具有较大程度的相似性。

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