不同剂量60Co辐照对生骨胶囊中柚皮苷含量的影响

杜 亮，贾恩礼，孔宪波

生骨胶囊为笔者所在中心制剂室自行研制、生产的全军扩大调剂使用制剂。为保证本制剂质量，在确保以最小的剂量达到最佳灭菌效果的前提下，笔者对不同剂量60Co辐照下生骨胶囊进行了研究，建立了定性定量指标。

1 仪器与材料

Aglient1100高效液相色谱仪（四泵、手动进样），超声清洗器（KQ-50 型），电子天平（FA-2004 B 型）。

柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110722-200610），生骨胶囊 （笔者所在中心制剂室自制，批号090907），试验所用试剂均符合药典规定[1]。

2 方法

2.1 随机选取包装完好的生骨胶囊6组 （批号090907，规格：0.4 g/粒，60 粒/瓶，100 瓶/箱）放入专用灭菌室，药品距60Co辐射源在 60 cm 左右。辐射剂量分别为 2、4、6、10、15 kGy，未辐射的样品作为对照。辐射单位是山东省农业科学院60Co辐照中心。

2.2 色谱条件及系统适应性 Kromasil-C18柱（4.6×150 mm；5 μm）；乙腈-0.2%磷酸水溶液（13∶87）为流动相；检测波长为283 nm；理论塔板数按柚皮苷峰计算，应不低于2000。

2.3 生骨胶囊供试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定，倾出内容物，取粉末1 g，精密称定，加甲醇50 ml超声处理30 min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水15 ml微热使溶解，移至分液漏斗中，加乙醚15 ml提取1次，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇提取5次，15 ml/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，并转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品10.5 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取3 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每 1 ml中含柚皮苷 63 μg）。

2.5 线形关系考察 分别精密吸取柚皮苷对照品溶液1、2、4、8、10 ml至 10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过。分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，测定，记录峰面积。进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程为Y=1 529.1x-4.500 0相关系数0.999 8。结果表明柚皮苷在0.063～0.63 μg范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.6 测试方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，做平行样取平均值，计算即得。2.7 重复性试验 取6 kGy60Co辐照后生骨胶囊按测试方法测定5次，计算即得。

2.8 加样回收试验 取同一批6 kGy60Co辐照后生骨胶囊样品约1 g，5份，精密称定，分别精密加入同一浓度的柚皮苷对照品溶液，加甲醇至刻度，按供试品测试方法测定，计算平均回收率。

3 结果

不同剂量60Co辐照后，生骨胶囊柚皮苷含量的变化见表1。随着辐照剂量的增大柚皮苷含量逐渐降低，损耗率逐渐增加。当剂量达到15 kGy时，其损耗率已超过20%。

表1 不同剂量60Co辐照后柚皮苷的含量

同一批生骨胶囊样品经6 kGy60Co辐照后，柚皮苷含量测定结果见表2。结果显示生骨胶囊样品经6 kGy60Co辐照，柚皮苷含量变化范围小，重复性好，见表2。

表2 生骨胶囊样品6 kGy60Co辐照重复性实验结果

同一批生骨胶囊样品经6 kGy60Co辐照后，加样回收试验结果见表3。

表3 柚皮苷加样回收实验结果

4 讨论

骨碎补为生骨胶囊君药，柚皮苷为骨碎补中的主要成分，其含量高低与本制剂疗效密切相关。故以柚皮苷为本制剂的含量指标。试验看出，在0～15 kGy范围内随着辐照剂量增大，柚皮苷含量总趋势随着剂量增大逐渐降低，当剂量达到15 kGy时，其损耗率已超过20%。对其活性成分骨碎补具有分解损失作用。6 kGy60Co辐照生骨胶囊后，其微生物限量检测指标符合药典规定。含量测定（本品每克骨碎补按柚皮苷含量计算），经6 kGy60Co辐照后符合生骨胶囊质量标准规定。

近年来，节省能源，安全可靠，效果好，成本低的60Co辐照技术在各个领域得到广泛运用。对中药材来说，可在常温下进行，时间短，极大程度上避免了对某些不稳定成分的破坏。但辐照剂量的选择尤为重要，如何能达到灭菌效果，又保持成分和疗效的辐照剂量，应通过试验来决定。本试验表明：6 kGy60Co辐照可作为生骨胶囊灭菌方法，但辐照残留对以后的含量是否有影响，有待于进一步研究。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].2005年版（一部）.北京：化学工业出版社，2005.

[2]李奉勤，史冬霞，范文成，等.考察不同剂量60Co-γ射线辐照对冠心胶囊灭菌效果和含量的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006，12(03)：4.